P16在乳腺癌及乳腺腺病中的表達及其臨床意義

[摘要] 目的 探討P16在乳腺癌及乳腺腺病中的表達變化與臨床病理意義。方法 應用免疫組織化學方法，分別檢測乳腺癌52例及乳腺腺病15例組織中P16的表達情況，分析其與臨床病理參數的關系。結果 P16在乳腺癌中的陽性表達率為44.2%(23/52)，乳腺腺病為73.3%(11/15)，其差異有統計學意義(P<0.05)，并且其陽性表達率與腫瘤分化程度和淋巴結轉移密切相關(P<0.05)。結論 P16基因的異常表達，可能導致腫瘤細胞增殖活性增加，促進腫瘤的發生;而且可能是導致乳腺癌淋巴結轉移的重要原因。

[關鍵詞] P16; 乳腺癌; 乳腺腺病; 免疫組織化學

[中圖分類號] R737.9 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)07-138-02

Study of Expression of P16 in Breast Cancer and Adenosis

WEI Maofu1 YANG Yanli2 LIU Jingwen1

1.Department of Pathology;2.Department of Medicine，Humen Hospital，Dongguan 523900，China

[Abstract] ObjectiveTo investigate the relationship between the expression of P16 in the breast cancer and adenosis and clinicopathologic features. MethodsThe expression of P16 was detected in 52 patients with breast cancer，15 patients with adenosis by the immunohistochemical staining. ResultsThe frequency of P16 staining in breast cancer was 44.2%(23/52)，being significantly higher than that of in adenosis73.3%(11/15)(P<0.05). Furthermore，the positive expression of P16 was associated with high grading and lymphytic metastasis(P<0.05). ConclusionThe abnormal expression of P16 may associate with the occur of tumor，proliferation and lymphytic metastasis.

[Key words]P16; Breast cancer; Adenosis; Immunohistochemistry

乳腺癌的發生、發展是多基因參與的復雜過程，其中包括癌基因的異常激活和抑癌基因的失活，到目前為止，已經有100多種癌基因和10多種抑癌基因被分離。近年來分離出的一個重要的抑癌基因P16在很多腫瘤細胞中存在缺失和突變[1，2]，在體外實驗培養的細胞P16環狀DNA轉染實驗證明此基因有抑制細胞增值的功能[3]。本實驗研究目的在于探討P16在乳腺癌、乳腺腺病中的表達與臨床病理之間的關系。

1 資料與方法

1.1 標本來源

收集我院2000年3月～2008年3月手術切除經病理證實的乳腺癌標本52例，另外選取乳腺腺病標本15例作為對照觀察。52例乳腺癌標本中，年齡28～72歲，平均年齡52歲，術前均未作任何抗腫瘤治療。低級別乳腺癌12例，高級別乳腺癌40例，其中25例乳腺癌有淋巴結轉移。

1.2 試劑及免疫組化染色方法

鼠抗人P16單克隆抗體、抗體稀釋液及試劑盒均購自基因公司。其稀釋度為1∶50。所有標本均用10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm連續切片，按二步法進行免疫組化染色，染色前標本切片進行抗原修復處理，一抗在室溫下孵育1h，二抗在室溫下孵育0.5h，DAB顯色，蘇木素復染。用已知陽性的乳腺癌標本作陽性對照，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.3 判斷標準

所有免疫組化片子用奧林帕斯BX50顯微鏡進行定性和半定量評估。請三個高職稱病理醫生在不知道臨床信息的情況下獨立的對所有免疫組化片子進行評估。陽性判斷標準為細胞核和(或)細胞漿出現了黃色或棕黃色顆粒狀，并用陽性片作為對照。每張切片隨機選擇10個視野，40×10高倍顯微鏡下觀察計數。根據染色強度、陽性細胞百分比分別記分[4]:(1)染色強度:不著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分;(2)陽性細胞所占百分率:<5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分。計算染色強度與陽性細胞百分比得分之積并分為4級，即(-)為0分，弱陽性(+)為1～2分，陽性(++)為3～4分，強陽性(+++)為5～6分。

1.4 統計學方法

統計學處理應用SPSS10.0軟件進行χ2檢驗和Fisher確切概率法，P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

P16陽性表達主要表現為細胞核和(或)細胞漿染色。52例乳腺癌中陽性(+)23例表達率為44.2%;15例乳腺腺病中陽性(+)11例，表達率為73.3%，乳腺腺病與乳腺癌的陽性表達率差異有統計學意義(P<0.05)(見表1)。在低級別和高級別乳腺癌中P16表達率分別是75%(9/12)和35%(14/40)，差異有統計學意義(P<0.05)。在伴有淋巴結轉移和無淋巴結轉移的患者中表達率分別為28%(7/25)和59.3%(16/27)，差異有統計學意義(P<0.05)(見表2)。與其他臨床病理因素均無相關性(P>0.05)。

3 討論

P16基因編碼的蛋白質由148個氨基酸組成，它的分子量約為16kD，所以稱為P16蛋白。P16蛋白含有4個重復結構的錨蛋白，其抑制活性與該結構有關。最近相關實驗表明，P16基因有比較復雜的結構和調節轉錄機制。在很多腫瘤中P16基因出現高頻率的缺失和突變，最近幾年來實驗表明P16基因失活的另一個重要機制可能是DNA的甲基化[5，6]。抑癌基因編碼的P16蛋白與細胞周期蛋白D1競爭CDk4/6的結合，阻止抑癌基因Rb的磷酸化，最終抑制細胞的分裂增殖，對細胞生長有負調控作用[7]。基因的變異引起P16蛋白的異常表達時，其抑制作用消失，細胞分裂增殖活性增高，從而導致腫瘤的發生。本研究顯示:52例乳腺癌中陽性(+)23例，表達率為44.2%;15例乳腺腺病中陽性(+)11例，表達率為73.3%，乳腺腺病與乳腺癌的陽性表達率差異有統計學意義(P<0.05)。在低級別和高級別乳腺癌中P16表達率分別是75%(9/12)和35%(14/40)，差異有統計學意義(P<0.05)。在伴有淋巴結轉移和無淋巴結轉移的患者中表達率分別為28%(7/25)和59.3%(16/27)，差異有統計學意義(P<0.05)，與其它臨床病理因素均無相關性(P>0.05)。這提示P16蛋白的異常表達對乳腺癌的發生起重要作用。P16基因的異常表達，可能導致腫瘤細胞增殖活性增加，促進腫瘤的發生，而且可能是導致乳腺癌淋巴結轉移的重要原因。

[參考文獻]

[1] Kamb A，Gruis NA，Weaver-Feldhaus J，et al. A cell cycle regulator potentially involvedin genesis of many tumor types[J]. Science，1994，264(5157):436-440.

[2] Nobori T，Miura K，Wu DJ，et al. Deletion of the cyclin-dependent kinase 4 inhibitor gene in multiple human cancers[J]. Nature，1994，368(6473):753-756.

[3] Okamoto A，Demetrick DJ，Spillare EA，et al. Mutationand altered expression of p16 in human cancer[J]. Proc Nad Acad Science USA，1994，91(23):11045-11049.

[4] Liu WH，Kaur M，Wang G，et al. Inverse PCR-based RFLP scanning identifies low-level mutation signatures in colon cell and turmors[J]. Cancer Res，2004，64:2544-2551.

[5] Lee TL，Leung WK，Chan MW，et al. Detection of gene promoter hypermethylation in the tumor and serum of patients with gastric carcinoma[J]. Clin Cancer Res，2002，8(6):1761-1766.

[6] Bian YS，Osterheld MC，Fontolliet C，et al. p16 inactivation by methylation of the CDKN2A promoter Occurs early during neoplastic progression in Barretfs esophagus[J]. Gastroentero1ogy，2002，22(4):1113-1121.

[7] Kamb A，Liu QY，Harshman K，et al. Rates of P16(MTS1)mutation in primary tumors with 9p lose[J]. Science，1994，265(16):425.

(收稿日期:2009-12-16)