MP DNA檢測對小兒支原體肺炎的診斷價值

[摘要] 目的 探討肺炎支原體(MP) DNA檢測在小兒支原體肺炎早期診斷中的價值。方法 用熒光定量聚合酶鏈反應(FQ- PCR)技術對我院2009年1～11月805例疑似MP感染患兒的咽拭子標本進行MP DNA檢測，同時采取靜脈血檢測805例患兒血清中MP-IgM抗體。結果 805倒患兒咽拭子標本MP DNA檢測陽性率顯著高于血清中MP-IgM抗體檢測陽性(P<0.05)。結論 PCR技術可以快速、敏感、準確地定量檢測標本中MP DNA，對兒童MP感染的早期、快速診斷診斷具有重要的參考價值。

[關鍵詞] 肺炎支原體; 熒光定量聚合酶鏈反應; 支原體肺炎

[中圖分類號] R725.512 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)07-70-02

肺炎支原體(MP)是引起呼吸道感染的常見病原微生物，是一類介于細菌與病毒之間、能獨立生存的微生物[1]。近年來支原體感染日漸增高，有局部流行的趨勢，僅憑臨床表現很難與病毒性和細菌性下呼吸道感染相鑒別，從而延誤治療，并導致肺外并發癥的發生。因此，及時而準確的病原學診斷有助于臨床明確診斷和治療[2]。因此筆者從2009年1～11月用熒光定量聚合酶鏈反應技術對我院805例疑為呼吸系統MP感染的患兒咽拭子標本進行MP DNA檢測，同時采取靜脈血檢測患兒血清中MP-IgM抗體，以探討患兒咽拭子標本MP DNA檢測在MP感染早期診斷的價值，并報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

病例全部來自我院門診和住院疑似MP感染患兒，年齡分布:<1歲44例，1～3歲351例，3～5歲286例，>5歲124例。所有患兒均有發熱和咳嗽癥狀。

1.2 標本采集

患兒發病后采集靜脈檢測患兒血清中MP-IgM抗體，所有病例就診24h內用咽拭子取患兒咽分泌物為標本檢測MP-DNA。

1.3 檢測方法

血清MP-IgM抗體檢測采用金標免疫斑點法法，MP DNA檢測采用熒光定量聚合酶鏈反應技術，MP DNA大于103copies/mL為陽性。

1.4 儀器與試劑

MP DNA定量使用杭州博日Line-Gene實時熒光定量PCR儀，試劑由上海申友生物有限公司提供。MP-IgM抗體試劑由深圳博卡生物技術有限公司提供

1.5 統計學處理

對805例患兒咽拭子標本MP DNA檢測陽性率與血清中MP-IgM抗體檢測陽性率進行比較。采用χ2檢驗。

2 結果

2009年1～11月805例疑為呼吸系統MP感染的患兒咽拭子標本進行MP DNA檢測陽性315例，陽性率39.13%。血清MP-IgM陽性167例，陽性率20.75%。兩種檢測方法比較咽拭子標本MP DNA檢測陽性率顯著高于血清MP-IgM抗體檢測陽性率，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

3 討論

近年來，MP感染率呈增高趨勢，根據臨床癥狀很難鑒別由肺炎支原體或病毒、細菌等引起的呼吸道感染，給臨床診治帶來一定的難度。近年發病增多并有局部流行的趨勢，故早期診斷極為重要。

肺炎支原體實驗室培養難度較大，耗時較長，且陽性率較低，通常需2~3周，延誤了患者的最佳治療時機，不適宜臨床檢查。目前臨床上用于MP感染診斷的方法主要有血清學MP特異抗體檢測和PCR方法。MP感染臨床癥狀出現后7～10d是IgM抗體檢測的最佳時機(窗口期)，患兒發病初期(窗口期內)血清MP-IgM檢測往往為陰性，容易漏診和誤診，這也是血清中MP-IgM抗體檢測陽性率低于咽拭子標本進行MP DNA檢測陽性率的原因[4]。本文對臨床可疑MP感染者用MP DNA檢測和MP-IgM抗體檢測兩種方法作對比性分析，咽拭子標本進行MP DNA檢測陽性率顯著高于血清中MP-IgM抗體檢測陽性率(P<0.01)。血清MP-IgM檢測陽性率率受年齡、時間、B細胞功能及敏感性等因素的影響，往往不能對MP感染做出早期診斷[3]。PCR方法可以早期檢測出咽喉分泌物中的MP-DNA，對診斷和鑒別診斷支原體肺炎有較高的臨床價值，可作為早期肺炎支原體感染的診斷方法，并可以觀察判斷抗生素療效。

以標記特異性熒光探針為特點的實時熒光定量PCR作為分子生物學的實驗手段，完全閉管擴增和檢測，同時采用了dUTPUNG系統，有效地防范了PCR擴增物的污染，避免假陽性結果。聚合酶鏈反應(PCR)技術用于病原體的檢測，以其快速、簡便、靈敏等優點是以往其他檢測技術無法比擬的。

[參考文獻]

[1] 鐘天鷹，毛志紅，張其華. 熒光定量PCR法檢測呼吸系統感染兒童肺炎支原體DNA的分析[J]. 臨床兒科雜志，2002，20(3):137-139.

[2] 吳瑞萍，胡亞美，江載芳. 支原體肺炎//實用兒科學[M]. 第6版. 北京:人民衛生出版社，1996:1171-1172.

[3] 袁壯，董宗祈，魯繼榮，等. 小兒肺炎支原體肺炎診斷治療中的幾個問題[J]. 中國實用兒科雜志，2002，17(8):449-457.

[4] 林國躍，楊震，張和平. 呼吸道感染患者肺炎支原體IgM抗體檢測情況[J]. 解放軍預防醫學，2004，22(1):44-45.

(收稿日期:2009-12-21)