膽管癌組織中存活素及MMP-9的表達(dá)相關(guān)性及臨床意義

[摘要]目的研究存活素及MMP-9在膽管癌組織中的表達(dá)情況及其相關(guān)性，了解膽管癌組織中存活素及MMP-9表達(dá)的相關(guān)性及其與膽管癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，并討論其臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)法(PV-9000)檢測(cè)45例膽管癌組織中(34例浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移組，11例無(wú)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移組)存活素和MMP-9的表達(dá)情況。結(jié)果有浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的34例膽管癌標(biāo)本中，存活素和MMP-9表達(dá)的陽(yáng)性率分別為61.8%(21/34)和70.6%(24/34);無(wú)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的11例膽管癌標(biāo)本中，存活素和MMP-9表達(dá)的陽(yáng)性率分別為27.3%(3/11)，和36.4%(4/11);存活素的表達(dá)與膽管癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移傾向呈正相關(guān)性(P<0.05)，MMP-9的表達(dá)與膽管癌及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移傾向也呈正相關(guān)性(P<0.01)。存活素與MMP-9的表達(dá)呈正相關(guān)性(P<0.01)。結(jié)論存活素及MMP-9在膽管癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)性，并且二者與膽管癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移也均呈正相關(guān)性，它們可能共同參與了膽管癌的惡變與轉(zhuǎn)移過(guò)程。對(duì)存活素和MMP-9的聯(lián)合檢測(cè)可能作為膽管癌診斷、預(yù)后及轉(zhuǎn)移潛能判斷的指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞]膽管癌; 存活素; MMP-9; 浸潤(rùn); 轉(zhuǎn)移; 免疫組織化學(xué)

[中圖分類(lèi)號(hào)] R735.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701(2010)07-01-03

Survivin and Matrix Metalloproteinase 9 in Cholangiocarcinoma:Expression Correlation and Clinical Significance

DU Xiao1 XUE Bingchuan2 AN Xin2 XU Guixiang1

1.Department of General Surgery，the First Clinical College of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China;2.Department of General Surgery，the Third Clinical College of Shanxi Medical University，Taiyuan 030053，China

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression and correlation of survivin and matrix metalloproteinase 9(MMP-9) in cholangiocarci- noma，and evaluate their correlation with invasion and metastasis in cholangiocarcinoma.MethodsThe expression of survivin and MMP-9 was detected by immunohistochemistry(PV-9000) in 34 cases of cholangiocarcinoma with invasion and metastasis and 11 cases without invasion and metastasis. Results In invasion and metastasis cases，the positive rates of survivin and MMP-9 were 61.8%(21/34)and 70.6%(24/34)，respectively. In cases without invasion and metastasis，the positive rates were 27.3%(3/11)and 36.4%(4/11)，respectively. The expression of both survivin and MMP-9 was positively related to invasion and metastasis in cholangiocarcinoma(P<0.05)，and the survivin expression was positively related to the MMP-9 expression(P<0.01). ConclusionThe survivin expression is positively related to the MMP-9 expression in cholangiocarcinoma tissue，and the expression of both is positively related to invasion and metastasis in cholangiocarcinoma. Therefore，the joint detection of survivin and MMP-9 expression may serve as an indicator for judging diagnosis，prognosis and metastatic potential of cholangiocarcinoma.

[Key words]Cholangiocarcinoma; Survivin; MMP-9; Invasion; Metastasis; Immunohistochemistry

膽管癌是指發(fā)生在肝外膽管，即左、右肝管至膽總管下端的惡性腫瘤，它是一類(lèi)嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的消化道惡性腫瘤，且發(fā)病率逐年攀升。早在1990年中華醫(yī)學(xué)會(huì)的調(diào)查[1]就發(fā)現(xiàn)膽管癌的發(fā)病率以每年5%的速度上升，并且膽管癌具有早期診斷困難、手術(shù)根治率低、對(duì)常規(guī)放化療缺乏敏感性等特點(diǎn)，故其預(yù)后極差。許多文獻(xiàn)研究顯示，存活素和MMP-9與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，但它們?cè)谀懝馨┙M織中聯(lián)合表達(dá)的研究相關(guān)文獻(xiàn)較少。

本文通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)45例膽管癌組織中存活素及MMP-9的表達(dá)情況，觀察它們與膽管癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及它們之間的相關(guān)性并分析其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取山西醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院1998年12月~ 2008年12月收治的45例手術(shù)切除的膽管癌患者存檔組織蠟塊，根據(jù)臨床病理資料將其分為有局部浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組34例和無(wú)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移組11例。病例均經(jīng)病理確診，確診前均未進(jìn)行過(guò)化學(xué)藥物治療。

1.2 主要試劑

存活素和MMP-9單克隆抗體(鼠抗人)、PV-9000試劑盒和DAB顯色劑均購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

組織蠟塊連續(xù)切片，厚度為4～5μm，采用二步法免疫組化(PV-9000)測(cè)定，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 結(jié)果判斷

在組織切片中查找陽(yáng)性細(xì)胞，存活素和MMP-9的陽(yáng)性細(xì)胞均為鏡下組織結(jié)構(gòu)清晰、細(xì)胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒沉著、染色明顯高于背景者。根據(jù)染色強(qiáng)度及顯色癌細(xì)胞比例將染色分為“-，+”兩級(jí)。①按切片細(xì)胞顯色有無(wú)及深淺評(píng)分:無(wú)顯色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。②按顯色細(xì)胞比例記分:顯色細(xì)胞<10%為0分;10%～30%顯色為1分;31%～60%顯色為2分;60%以上顯色為3分。每例積分=①×②。按積分高低分為:陰性(-)，積分為0分;陽(yáng)性(+)，積分≥1分。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照采用已知的陽(yáng)性切片。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。采用卡方檢驗(yàn)及相關(guān)性檢驗(yàn)，α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 膽管癌中存活素表達(dá)情況

陽(yáng)性產(chǎn)物定位于細(xì)胞漿內(nèi)，呈棕褐色顆粒(見(jiàn)封三圖1)，45例標(biāo)本中有24例呈陽(yáng)性(53.3%)，浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移者34例標(biāo)本中有21例呈陽(yáng)性(61.8%)，無(wú)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移者的11例標(biāo)本中有3例呈陽(yáng)性(27.3%)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.973，P=0.046)。表明存活素表達(dá)與膽管癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。

2.2 膽管癌中MMP-9的表達(dá)情況

陽(yáng)性產(chǎn)物也定位于細(xì)胞漿內(nèi)，呈棕褐色顆粒(見(jiàn)封三圖2)，45例標(biāo)本中28例呈陽(yáng)性(62.2%)，浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移者34例標(biāo)本中24例呈陽(yáng)性(70.6%)，無(wú)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移者11例標(biāo)本中4例呈陽(yáng)性(36.4%)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.141，P=0.042)。表明MMP-9蛋白表達(dá)與膽管癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移也呈正相關(guān)。

2.3 膽管癌中存活素和MMP-9表達(dá)的相關(guān)性

在MMP-9呈陽(yáng)性表達(dá)的28例標(biāo)本中有23例存活素也呈陽(yáng)性表達(dá)，MMP-9呈陰性表達(dá)的17例標(biāo)本中有16例存活素也呈陰性表達(dá)，存活素表達(dá)與MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)性(r=0.741，P<0.001)。

3 討論

近年來(lái)，隨著腫瘤分子生物學(xué)的發(fā)展，人們已經(jīng)認(rèn)識(shí)到膽道腫瘤的發(fā)生發(fā)展和其他腫瘤一樣，與染色體、癌基因、抑癌基因的突變所致的活性改變密切相關(guān)。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲與轉(zhuǎn)移是涉及多種相關(guān)因子調(diào)控的復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程。

在眾多原因中，細(xì)胞凋亡異常在大多數(shù)惡性腫瘤的發(fā)病學(xué)上占重要地位，腫瘤細(xì)胞通過(guò)逃避凋亡而發(fā)生惡性增殖。在這方面，抗細(xì)胞凋亡蛋白(inhibitor of apoptosis，IAPs)家族起著重要作用。存活素(survivin)是于1997年由Ambrosini等[2]通過(guò)效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體-1(effector cell protease receptor-1，EPR-1)的c-DNA與人類(lèi)基因庫(kù)雜交而分離得到的，它是IAPs家族中最小的成員，分子量只有16500[2]，并且特異性地表達(dá)于細(xì)胞周期的G2/M期。一般認(rèn)為，survivin 主要通過(guò)直接抑制終末效應(yīng)酶，即caspase23和caspase27的活性來(lái)阻斷各種刺激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過(guò)程，這一過(guò)程是通過(guò)與細(xì)胞內(nèi)微管的聚合和解聚來(lái)實(shí)現(xiàn)的，這一特性在所有已知的細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)中是獨(dú)一無(wú)二的。在人的生長(zhǎng)發(fā)育中，survivin在胚胎組織中表達(dá)，而在成人分化成熟組織中表達(dá)缺少或喪失[3]，在多種惡性腫瘤組織中又出現(xiàn)高表達(dá)[4]。近年來(lái)多項(xiàng)研究表明，存活素基因能在大腸癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、成人細(xì)胞性白血病、胃癌、肝癌、宮內(nèi)膜癌以及嗜鉻細(xì)胞瘤等人類(lèi)惡性腫瘤中高表達(dá)，而且其表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后關(guān)系密切。但是腫瘤的形成和轉(zhuǎn)移的發(fā)生是多基因、多因子共同作用的結(jié)果，因而survivin在腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中的作用必將受到其他因子的影響。

越來(lái)越多的腫瘤研究發(fā)現(xiàn)，與細(xì)胞凋亡異常一樣，細(xì)胞外基質(zhì)(extra cellular matrix，ECM)的降解同多種腫瘤的轉(zhuǎn)移和預(yù)后關(guān)。在這方面，基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)家族起著重要的作用。MMPs是一族位于腫瘤細(xì)胞表面與惡性腫瘤密切相關(guān)的水解蛋白酶，在與腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和血管生成有關(guān)的細(xì)胞外基質(zhì)降解中發(fā)揮關(guān)鍵作用[5]，它幾乎能降解ECM中的各種蛋白成分，破壞腫瘤細(xì)胞侵襲的組織學(xué)屏障。目前，在MMPs家族中至少已發(fā)現(xiàn)26個(gè)成員，它們均為鋅依賴(lài)的肽鏈內(nèi)切酶[6]。MMP-9是MMPs家族的重要成員，由Sopata和Dancewicz于1974年從中性粒細(xì)胞提純獲得的一種蛋白酶，于1989年正式命名[7]。它以酶原形式分泌，被激活后形成Ⅳ型膠原酶，降解、破壞靠近腫瘤表面細(xì)胞外基質(zhì)中的Ⅳ型、Ⅴ型膠原和明膠，然后腫瘤細(xì)胞沿著缺失的基膜向周?chē)?rùn)，最終導(dǎo)致腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[8]。近年來(lái)，許多實(shí)驗(yàn)證明MMP-9在多種腫瘤中表達(dá)增高，并與胃癌和結(jié)腸癌[9，10]等腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。

本研究運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法測(cè)定了存活素和MMP-9蛋白在45例膽管癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)果表明存活素和MMP-9蛋白的表達(dá)與膽管癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān)性，同時(shí)，通過(guò)本實(shí)驗(yàn)也得出在膽管癌組織中存活素和MMP-9的表達(dá)呈正相關(guān)性(P<0.05)的結(jié)論，由此可以推測(cè)二者在膽管癌疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到協(xié)同作用，即二者的過(guò)度表達(dá)可能是膽管癌發(fā)展的促進(jìn)因素。但是本研究只是根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果分析在膽管癌發(fā)展過(guò)程中兩者可能有相互促進(jìn)作用，兩者間的相關(guān)性是否存在必然性及哪種因子起決定性作用尚有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

膽管癌的病因至今尚未完全闡明，而早期診斷及預(yù)測(cè)病變轉(zhuǎn)歸等是其治療的關(guān)鍵。相信隨著分子生物學(xué)的研究不斷深入，膽管癌的病因及其診療方面的研究將取得更大進(jìn)步。存活素和MMP-9將有望成為預(yù)測(cè)膽管癌診斷和評(píng)價(jià)預(yù)后的指標(biāo)，為膽管癌的早期診斷和及時(shí)治療提供新的依據(jù)。

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(收稿日期:2010-01-04)