應用環介導等溫擴增檢測阪崎腸桿菌

胡連霞

（河北出入境檢驗檢疫局，石家莊 050051）

應用環介導等溫擴增檢測阪崎腸桿菌

胡連霞*

（河北出入境檢驗檢疫局，石家莊 050051）

建立環介導等溫擴增檢測阪崎腸桿菌的方法，通過肉眼可見的白色沉淀，判斷檢測結果。將阪崎腸桿菌（ATCC29544）的16S-23SrRNA間區序列作為靶基因，設計2對特異引物，優化反應條件，進行LAMP擴增。對產物進行酶切分析，與理論上的預期結果相一致。通過測序比對，與GenBank上報道的同源性達到99%。用25株食源性致病菌證實該引物特異性強。LAMP擴增20min，其靈敏度為4.3×102fg/tube，結果表明，LAMP方法檢測阪崎腸桿菌，靈敏度高、特異性強、耗時短、方法簡便。

環介導等溫擴增；LAMP；檢測；阪崎腸桿菌

阪崎腸桿菌（Enterobacter sakazakii，E.sakazakii）是腸桿菌科中無芽孢而呈棒狀的革蘭氏陰性桿菌，為條件致病菌。阪崎腸桿菌能在很寬的溫度范圍內生長（6℃～47℃），比其他腸桿菌科細菌生長范圍更寬，而且遲滯時間和時代更短。2004年初，聯合國糧農組織和世界衛生組織在日內瓦召開的專家咨詢會，指出嬰兒配方粉中即使只存在微量的阪崎腸桿菌污染（＜3 CfU/100g） 也能導致感染的發生。因此，建立靈敏、特異的檢測方法尤為重要。

目前，阪崎腸桿菌傳統檢測方法和免疫學方法費時費力、靈敏度較低。2004年，FAO/WHO召開了兩次國際相關會議，建議采用國際通用的分子生物學方法檢測阪崎腸桿菌，來彌補傳統方法的缺陷。分子檢測方法如PCR，靈敏、快速，但對操作、設備條件、工作環境均有較高的要求，仍不能進行廣泛的普及和推廣。

2000年，日本榮研化學株式會的Notomi T等……