乳制品中阪崎腸桿菌的研究進(jìn)展

覃小玲，任國譜

（中南林業(yè)科技大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院,長沙 410004）

乳制品中阪崎腸桿菌的研究進(jìn)展

覃小玲，任國譜

（中南林業(yè)科技大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院,長沙 410004）

概述阪崎腸桿菌的檢測方法及其在乳制品中的污染情況和防控措施。

阪崎腸桿菌；乳制品；檢測方法；污染情況；防控措施

0 引 言

阪崎腸桿菌是一種有周生鞭毛、能運(yùn)動、無芽孢、兼性厭氧的革蘭氏陰性桿菌。新生兒感染該菌可導(dǎo)致腦膜炎、壞死性小腸結(jié)腸炎和菌血癥，并可引起嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥甚至死亡，感染引起的死亡率高達(dá)50%以上[1]。免疫功能低下的群體（如腫瘤、糖尿病患者及老年人等）感染該菌可引起菌血癥、膿毒血癥，以及泌尿道、呼吸道、創(chuàng)傷面或局部感染[2，3]。雖然目前還不能確定其宿主和傳播途徑，但多起新生兒阪崎腸桿菌感染事件基本證實(shí)嬰幼兒配方奶粉是主要的感染源；同時在其他乳制品中也分離到該菌，如奶酪制品[4]、含乳冷飲[5]、利樂包純牛奶[6]等。本文概述阪崎腸桿菌的檢測方法及其在乳制品中的污染情況，為追溯其污染源及建立相應(yīng)防控措施提供理論依據(jù)。

1 阪崎腸桿菌的檢測方法

1.1 傳統(tǒng)分離鑒定方法

主要有美國FDA(2002)推薦的方法[7]，2006年2月ISO和國際乳品聯(lián)盟 (International Dairy Federation,IDF)聯(lián)合公布的ISO/TS 22964 —IDF/RM210[8]；我國于2005年8月發(fā)布的SN/T 1632[9]，以及2008年11月21日發(fā)布GB/T 4789.40[10]，該標(biāo)準(zhǔn)于2010年3月進(jìn)一步修訂完善[11]。這幾種分離方法的比較結(jié)果如表1所示。

表1 幾種傳統(tǒng)分離方法的比較

表1中，a為腸道菌增菌肉湯 （Enterobacteria Enrichment Broth，EE）；b為結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂 （Violet Red Bile Glucose Agar，VRBG）；c為胰蛋白胨大豆瓊脂 （trypticase soy agar，TSA）；d和h為 Druggan-Forsythe-Iversen（DFI）培養(yǎng)基，選擇熒光素5-溴-4-氯-3-吲哚-a-D-葡萄糖普作為區(qū)別試劑；e為緩沖蛋白胨水（buffer peptone water，BPW）；f為改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古霉素 （modified lauryl sulfatetryptosebroth-vancomycinmedium，mLSTVm）；g為阪崎碭桿菌分離瓊脂（Enterobacter Sakazakii Isolation Agar，ESIA）。

1.2 分子檢測方法

1.2.1 PCR法

目前用于乳制品中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)的PCR法主要有普通PCR法和熒光PCR法。2005年8月發(fā)布SN/T1632.2和SN/T 1632.2.3，分別為乳制品中阪崎腸桿菌的普通PCR檢驗(yàn)法和熒光PCR檢驗(yàn)法[12，13]。PCR檢測方法能夠快速、準(zhǔn)確篩選食品中的阪崎腸桿菌陽性樣品。彭年才等[14]對普通PCR電泳法和熒光PCR法進(jìn)行了比較，結(jié)果如表2所示。

表2 熒光法和電泳法的比較

與普通PCR法相比，熒光PCR檢驗(yàn)法無需通過凝膠電泳成像，減少了實(shí)驗(yàn)中交叉污染和有毒制劑的接觸；且熒光PCR法靈敏度更高，還能實(shí)現(xiàn)定量分析；但是該法檢測結(jié)果假陽性和檢驗(yàn)成本都較高。

1.2.2 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

張宏偉等[15]提出利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)對奶粉中阪崎腸桿菌進(jìn)行檢測，試驗(yàn)表明該法特異性強(qiáng)、靈敏度高，可達(dá)到1.2 CFU/100 g，檢測流程可縮短至2 d。由于LAMP反應(yīng)在恒溫下進(jìn)行，因此在實(shí)驗(yàn)中僅僅需要一個水浴鍋或加熱裝置即可，免去了傳統(tǒng)PCR方法對儀器過度的依賴。

1.2.3 PCR-DHPLC法

楊春華等[16]建立了乳及乳制品中阪崎腸桿菌PCRDHPLC檢測方法。該法是根據(jù)阪崎腸桿菌16S-23S rRNA特異基因序列的特點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物,PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物經(jīng)DHPLC技術(shù)進(jìn)行快速檢測。結(jié)果表明該方法具有很好的特異性，方法靈敏度較高,檢測低限可達(dá)到為25 CFU/mL，可快速、準(zhǔn)確檢測阪崎腸桿菌。

2 阪崎腸桿菌對乳制品的污染情況

近年來國內(nèi)外研究部分乳制品中阪崎腸桿菌污染情況如表3所示。

3 乳制品中阪崎腸桿菌的防控措施

要防止阪崎腸桿菌的感染，必須在乳制品加工過程中對各個環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)格消毒，同時通過加工過程中適當(dāng)?shù)陌褪蠚⒕⒊邷貧⒕蚱渌邷毓に嚳蓮氐椎臍缭摼涣硗猓摼锌赡艽嬖谟诩庸C(jī)械、器具、包裝材料等。因此要防止阪崎腸桿菌污染乳制品，應(yīng)建立并嚴(yán)格執(zhí)行行之有效的HACCP（危害分析和關(guān)鍵控制點(diǎn)）系統(tǒng)，并把腸桿菌科作為生產(chǎn)線的衛(wèi)生指標(biāo)菌。

研究報(bào)道，阪崎腸桿菌噬菌體可特異性的與其宿主結(jié)合將其消除，因此有望被用于乳制品生產(chǎn)過程及環(huán)境中阪崎腸桿菌的控制，防止二次污染[30]。近年，利用微生態(tài)制劑對致病菌的競爭和拮抗作用成為防控致病菌污染的趨勢，姜淑英等[31]研究鼠李糖乳桿菌和植物乳桿菌等8種常見益生菌對阪崎腸桿菌的拮抗作用，發(fā)現(xiàn)鼠李糖乳桿菌和植物乳桿菌均能有效地競爭拮抗阪崎腸桿菌。

表3 乳制品中阪崎腸桿菌污染情況

4 結(jié)束語

阪崎腸桿菌作為一種條件致病菌，目前，研究者對阪崎腸桿菌的污染來源、微生物特性、檢測方法以及乳制品中的污染情況等方面已做了大量的調(diào)查研究，這對于減少阪崎腸桿菌的危害具有重要的指導(dǎo)意義。但是目前還不知道該菌是在哪個工序段污染乳制品的，而且許多防控該菌污染的技術(shù)方法都還處于理論研究階段，相信隨著研究的深入，防控阪崎腸桿菌污染乳制品的有效措施將被推出，到時對阪崎腸桿菌的控制將能真正做到防范于未然。研究發(fā)現(xiàn)大多數(shù)感染事件尤其是食用嬰幼兒配方奶粉引起的感染都是由于消費(fèi)過程中污染引起的，為此世界衛(wèi)生組織和聯(lián)合國糧農(nóng)組織于2007年發(fā)布了《安全制備、貯存和操作嬰幼兒配方奶粉指導(dǎo)原則》，分別對護(hù)理機(jī)構(gòu)和家庭環(huán)境中喂養(yǎng)給出了詳細(xì)的指導(dǎo)。

[1]Joint FAOPWHO Workshop on Enterobacter sakazakii and Other Microorganisms in Powdered Infant Formula,Geneva[Z].2004.

[2]SEE K C,THAN H A,TANG T.Enterobacter Sakazakii Bacteraemia with Multiple Splenic Abscesses in a 75-Year-Old Woman:a Case Report[J].Age and Ageing,2007,36:595-596.

[3]LAI K K.Enterobacter Sakazakii Infections among Neonates,Infants,Children,and Adults.Case Reports and a Review of the Literature[J].Medicine(Baltimore),2001,80(2):113-122.

[4]IVERSEN C,FORSYTHE S.Isolation of Enterobacter Sakazakii and Other Enterobacteriaceae from Powdered Infant Formula and Related Products[J].Food Microbiol,2004,21:771-776.

[5]戴嵐,宋白薇.含乳冷飲中阪崎腸桿菌和其它腸桿菌的污染狀況[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2009,19(2):337-338.

[6]楊毓環(huán),馬群飛,王進(jìn)喜.坂崎腸桿菌引起利樂包純牛奶腐敗變質(zhì)及其衛(wèi)生學(xué)意義[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2002,12(6):699-700.

[7]U.S.Food and Drug Administration Center for Food Safety and APPlied Nutrition.Isolation andEnumeration of Enterobacter sakazakii from Dehydrated Powdered Infant FormuLa.2002[J/OL]，httP://www.cfsan.fda.gov/eomm./mm esakqa.hmL.

[8]ISO.Milk and milk products-Detection of Enterobacter sakazakii[DB/OL].http://www.iso.Org/iso/en/,2006-05-10.

[9]奶粉中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)方法：第1部分（SN/T 1632.1-2005）[S].

[10]食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)：阪崎腸桿菌檢驗(yàn)（GB/T 4789.40-2008）[S].

[11]食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)：阪崎腸桿菌檢驗(yàn)（GB/T 4789.40-2010）[S].

[12]奶粉中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)方法：第2部分（SN/T 1632.2-2005）[S].

[13]奶粉中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)方法：第3部分（SN/T 1632.3-2005）[S].

[14]彭年才,李明,張鎮(zhèn)西，等.PCR熒光技術(shù)在阪崎腸桿菌檢測中的應(yīng)用[J].中國乳業(yè),2008(8):48-50.

[15]張宏偉.利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)對奶粉中阪崎腸桿菌進(jìn)行檢測[J].食品研究與開發(fā),2009,30(6):114-117.

[16]楊春華,曹際娟,桂家祥，等.乳及乳制品中阪崎腸桿菌PCR-DHPLC檢測新技術(shù)的建立[J].微生物學(xué)通報(bào),2008,35(11):1845-1849.

[17]陸崢,王麗麗,王迪等.北京市售國產(chǎn)嬰幼兒配方奶嬰兒食品帶染阪崎腸桿菌調(diào)查[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2008,18(1):140-141.

[18]黎明,黃劍屏,黃薇等.成都市市售國產(chǎn)嬰幼兒配方奶粉中阪崎腸桿菌污染情況調(diào)查[J].衛(wèi)生研究,2009,38(2):158-159.

[19]劉鐵雁,麻郁峰,李俊華，等.從進(jìn)口原料奶粉中檢出阪崎腸桿菌[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2007,17(4):678-679.

[20]張欣強(qiáng),龐杏林,劉俊華，等.廣州市售國產(chǎn)嬰幼兒配方粉中阪崎桿菌污染調(diào)查[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2010,20(1):183-185.

[21]黎明,黃劍屏,黃薇，等.某國產(chǎn)嬰幼兒配方奶粉中檢出阪崎腸桿菌[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志,2008,24(11):921-922.

[22]李秀娟,白萍,徐保紅，等.批發(fā)市場銷售國產(chǎn)配方奶粉及嬰幼食品中阪崎腸桿菌污染情況調(diào)查 [J].職業(yè)與健康,2010,26,(13):1496-1499.

[23]劉秀梅,裴曉陽,郭云昌.中國安徽阜陽劣質(zhì)嬰幼兒配方粉中阪崎腸桿菌的污染[J].中國食品衛(wèi)生雜志,2005,17(1):10-12.

[24]陳偉偉,洪錦春,李閩真，等.奶粉中阪崎腸桿菌的污染及快速檢測方法的研究[J].食品科學(xué),2009,30(04):182-184.

[25]郝長敏,王羽,張會彥，等.液態(tài)奶中阪崎腸桿菌污染狀況的調(diào)查[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(28):13495-13497.

[26]REYAD SHAKER,TAREQ OSAILI,WAIL Al-OMARY,et al.Isolation of Enterobacter sakazakii and other Enterobacter sp.from Food and Food Production Environments [J].Food Control,2007(18):1241-1245.

[27]EDITH TORRES-CHAVOLLA,ELSA RAMIREZ-CERDA,and ROSALBA GUTIERREZ-ROJO.Isolation and Identification of Enterrobactersakazakiiin InfantMilk Formulas[J].Foodborne Pathogens and Disease,2007,4(2):164-168.

[28]LEUSCHNER GKR,BAIRD F,DONALD B,et al.A Medium for the Presumptive Detection of Enterobacter sakazakii in Infant Formula.Food Microbiol 2004;21:527–533.

[29]SEO KH,BRAKETT RE.Rapid Specific Detection of Enterobacter sakazakii in Infant Milk Formulas Using Real-time PCR Assay.J Food Prot 2005;68:59–63.

[30]趙貴明,姚李四.阪崎腸桿菌噬菌體的分離及其生物學(xué)特性[J].微生物學(xué)報(bào),2008,48(10):1373-1377.

[31]姜淑英,譚強(qiáng)來,徐鋒，等.益生菌拮抗阪崎腸桿菌的初步研究[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志,2011,23(1):1-4.

Research advance of E.sakazakii in dairy products

QIN Xiao-ling，REN Guo-pu

(Faculty of Food Science and Engineering,Central South University of Forestry and Technology,Changsha 410004,China)

The physiological and biochemical characteristics,the detection methods as well as the pollution and the control measures in dairy products were summarized.

Enterobacter sakazakii；dairy products；detection methods；pollution situation；prevent and control measures

TS201.3

B

1001-2230（2011）11-0045-02

2011-07-12

長沙市重大專項(xiàng)（K0902007-21）；國家高技術(shù)發(fā)展計(jì)劃（863計(jì)劃）201AA23004 。

覃小玲(1985-)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称芳庸ぜ夹g(shù)研究與檢測方法開發(fā)。

任國譜