GC法測定鹽酸金剛烷胺片中有關物質含量

陳 佩，翟 宇（寧夏回族自治區(qū)藥品檢驗所，銀川市 750004）

鹽酸金剛烷胺片用于治療帕金森病、藥物誘發(fā)的錐體外系疾患，也用于防治A型流感病毒所引起的呼吸道感染。《中國藥典》2005、2010年版[1，2]中未收載鹽酸金剛烷胺片有關物質的測定方法，《美國藥典》（USP）[3]和《英國藥典》（BP）[4]也只對鹽酸金剛烷胺原料藥有關物質作了規(guī)定。而片劑在制粒、包衣以及貯存過程中均有可能會導致有關物質產(chǎn)生或增加，影響藥品的療效[5]。故本文參考《中國藥典》2010年版中鹽酸金剛烷胺原料藥有關物質的測定方法，建立了氣相色譜（GC）法測定鹽酸金剛烷胺片中的有關物質含量。該方法靈敏、準確、專屬性強，可用于鹽酸金剛烷胺片的質量控制。

1 儀器與試藥

6890N氣相色譜儀及工作站（美國Agilent公司）。

鹽酸金剛烷胺標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100426-200301，含量：100.0%）；金剛烷（美國Chromadex公司，批號：01380-L01，含量：99.9%）；41批鹽酸金剛烷胺片（國內8家藥廠提供，批號略，規(guī)格：每片0.1 g）；三氯甲烷為分析純，鹽酸、氫氧化鈉、雙氧水、無水硫酸鈉均為優(yōu)級純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為HP-5（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；載氣為氮氣；氫火焰離子化檢測器（FID），進樣口溫度為200℃，檢測器溫度為300℃；柱溫采用程序升溫，初始溫度為80℃，保持4 min，然后以12℃·min－1升溫至280℃，保持15 min；載氣流速為1.0 mL·min－1；溶液進樣，進樣體積為2 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 鹽酸金剛烷胺標準品溶液。精密稱取鹽酸金剛烷胺標準品2.000 g，置于分液漏斗中，加5 mol·L－1氫氧化鈉溶液20 mL，用三氯甲烷分次振搖提?。?5、10 mL），靜置分層；取三氯甲烷層，加適量無水硫酸鈉振搖脫水，濾過；取濾液置于25 mL容量瓶中，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為標準品貯備溶液。精密量取貯備液1 mL置于10 mL容量瓶中，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為標準品溶液。

2.2.2 鹽酸金剛烷胺供試品溶液。取鹽酸金剛烷胺片樣品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于鹽酸金剛烷胺1.25 g），置于分液漏斗中，加5 mol·L－1氫氧化鈉溶液20 mL，用三氯甲烷分次振搖提?。?5、10 mL），取三氯甲烷層，加適量無水硫酸鈉振搖脫水，濾過，取濾液置于25 mL容量瓶中，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3 金剛烷溶液。精密稱取金剛烷0.5 g，置于10 mL容量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.4 輔料溶液。按處方量稱取輔料（約相當于含鹽酸金剛烷胺1.25 g的量），按“2.2.2”項下方法制備輔料溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

精密量取“2.2.3”項下金剛烷溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加鹽酸金剛烷胺供試品溶液1 mL，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗溶液。取此試驗溶液及“2.2”項下鹽酸金剛烷胺標準品溶液、鹽酸金剛烷胺供試品溶液、輔料溶液各2 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜，見圖1。

由圖1可知，鹽酸金剛烷胺保留時間約為14.1 min，金剛烷保留時間約為11.1 min，鹽酸金剛烷胺峰與金剛烷峰（分離度大于20）及其他物質峰的分離度良好。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗色譜圖A.輔料；B.標準品；C.供試品；D.系統(tǒng)適用性試驗溶液；1.鹽酸金剛烷胺；2.金剛烷Fig 1 The chromatogram of system suitability testA.blank excipient；B.reference substance；C.test sample；D.solution of system suitability；1.amantadine hydrochloride；2.adamantane

2.4 專屬性試驗

精密稱取鹽酸金剛烷胺片細粉適量（約相當于鹽酸金剛烷胺1.25 g）共5份，進行如下處理。（1）酸破壞：加0.1 mol·L－1鹽酸溶液10 mL使鹽酸金剛烷胺溶解，在50℃水浴加熱20 min，放置至室溫，加0.1 mol·L－1氫氧化鈉溶液中和；（2）堿破壞：加1 mol·L－1氫氧化鈉溶液10 mL使鹽酸金剛烷胺溶解，在80℃水浴加熱50 min，放置至室溫，加1 mol·L－1鹽酸溶液中和；（3）氧化破壞：加雙氧水10 mL使鹽酸金剛烷胺溶解，放置過夜；（4）高溫破壞：在105℃烘箱中加熱過夜；（5）光照破壞：在5 000 lx照度下光照過夜。上述5份樣品均加入5 mol·L－1氫氧化鈉溶液20 mL，用三氯甲烷分次振搖提?。?5、10 mL），靜置分層；取三氯甲烷層，加適量無水硫酸鈉振搖脫水，濾過，取濾液置于25 mL容量瓶中，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻。分別取上述5種溶液，按“2.1”項下的色譜條件測定，記錄色譜。結果，各破壞條件下均有不同程度的降解產(chǎn)物生成，但均能與主峰達到完全分離，表明該方法專屬性好，詳見圖2。

圖2 專屬性試驗色譜圖A.酸破壞后樣品；B.堿破壞后樣品；C.氧化破壞后樣品；D.高溫破壞后樣品；E.光照破壞后樣品；1.鹽酸金剛烷胺Fig 2 The chromatogram of exclusion inspectionA.sample destroyed by acid；B.sample destroyed by alkali；C.sample destroyed by oxidation；D.sample destroyed by high temperature；E.sample destroyed by high light；1.amantadine hydrochloride

2.5 線性關系考察

精密量取“2.2.1”項下鹽酸金剛烷胺標準品貯備溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置于5 mL容量瓶中，用三氯甲烷溶液稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取上述不同濃度溶液2 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，以各溶液濃度（X，mg·mL－1）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸。結果表明，進樣濃度在8.03～80.3 mg·mL－1的范圍內，與測定的峰面積呈良好的線性關系：A＝6.489×105X+4.060（r＝0.999 9，n＝6）。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取“2.2”項下鹽酸金剛烷胺標準品和供試品溶液，分別在0、1、4、12 h進樣測定。結果鹽酸金剛烷胺標準品溶液放置12 h穩(wěn)定，鹽酸金剛烷胺峰面積的RSD＝0.8%；供試品溶液中雜質峰面積未有明顯增加，鹽酸金剛烷胺峰面積的RSD＝1.2%。

2.7 精密度試驗

精密量取“2.2.1”項下鹽酸金剛烷胺標準品貯備溶液1.0 mL，置于5 mL容量瓶中，用三氯甲烷溶液稀釋至刻度，搖勻。連續(xù)進樣6次，測定。結果，鹽酸金剛烷胺峰面積值的RSD＝1.1%。

2.8 最低檢測限

精密量取“2.2.1”項下鹽酸金剛烷胺標準品貯備溶液適量，用三氯甲烷逐步稀釋，測定，以鹽酸金剛烷胺峰的信噪比（S/N）為3計算，測得其最低檢測限為0.22 μg。

2.9 回收率試驗

分別精密稱取鹽酸金剛烷胺標準品1.0、1.25、1.5 g各3份，分置于9個分液漏斗中，分別加入輔料適量，按“2.2.2”項下方法制備成低、中、高3個濃度的溶液各3份。取上述溶液進樣2 μL測定，記錄色譜。計算鹽酸金剛烷胺回收率，結果低、中、高濃度回收率（n＝3）分別為92.1%、97.3%、95.5%，RSD分別為2.8%、2.1%、1.9%，表明準確度良好。

2.10 樣品中有關物質的含量測定

取鹽酸金剛烷胺片樣品20片，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，加入金剛烷溶液。精密量取“2.3”項下系統(tǒng)適用性試驗溶液2 μL，注入氣相色譜儀，調節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%，金剛烷胺峰與金剛烷峰的分離度應不小于20。精密量取供試品溶液2 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，按歸一化法計算，單個雜質峰面積不得大于總峰面積的0.5%，各雜質峰面積的和不得大于總峰面積的2.0%。

對全國8個生產(chǎn)廠家的41批樣品按擬定的有關物質方法測定，結果顯示，41批樣品中均檢查出雜質峰，檢出率為100.0%，41批樣品中總雜質峰的峰面積均在規(guī)定限度（2.0%）內，單個雜質峰的峰面積均在規(guī)定限度（0.5%）內，結果見表1。

3 討論

3.1 雜質限度的選擇

USP及BP收載的鹽酸金剛烷胺原料藥采用氣相色譜法測定有關物質，限度規(guī)定單個未知雜質不得過0.3%，所有雜質總量不得過1.0%；《中國藥典》2010年版二部中鹽酸金剛烷胺原料藥有關物質的限度規(guī)定單個雜質峰面積不得大于總峰面積的0.3%，各雜質峰面積的和不得大于總峰面積的1.0%。考慮片劑中有關物質可能增加，故擬定鹽酸金剛烷胺片有關物質的限度為：單個雜質峰面積不得大于總峰面積的0.5%，各雜質峰面積的和不得大于總峰面積的2.0%。

表1 41批樣品中有關物質含量測定結果Tab 1 Determination results of related substances in 41 batches of samples

3.2 檢測方法的選擇

筆者曾嘗試采用高效液相-紫外分光光度法（HPLC-UV法）和高效液相-蒸發(fā)光散射（HPLC-ELSD）法進行測定。但由于鹽酸金剛烷胺紫外最大吸收波長為210 nm，屬于末端吸收，基線噪音大，故不適合采用HPLC-UV法；鹽酸金剛烷胺為水溶性化合物，采用HPLC-ELSD法測定，其在色譜柱上的保留時間短，雜質峰與鹽酸金剛烷胺峰不能完全分離。經(jīng)方法學驗證，本文建立的氣相色譜法測定鹽酸金剛烷胺片的有關物質專屬性強、準確，可有效地控制產(chǎn)品質量。

3.3 測定結果分析

鹽酸金剛烷胺片廠家編號為2、5、6、7的樣品單個雜質量較高，范圍在0.11%～0.36%；廠家編號為1、4、8的樣品單個雜質量較低，范圍在0.03%～0.09%；廠家編號為3的樣品單個雜質量總體較低，但有1批較高。說明建立的有關物質測定方法對鹽酸金剛烷胺片生產(chǎn)處方的合理性、生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性均可良好監(jiān)控。

[1] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學工業(yè)出版社，2005：538.

[2] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：737.

[3] The United States Pharmacopeial Convention.The United States Pharmacopeial[S].Rockville：The United States Pharmacopeial Convention，2009：1 054.

[4] The Recommendation of the Commission on Human Medicines.British Pharmacopoeia[S].London：British Pharmacopoeia Commission Office，2009：262.

[5] 許晉星.RP-HPLC法測定馬來酸桂哌齊特片中有關物質的含量[J].中國藥房，2009，20（1）：59.