GC法測(cè)定鹽酸金剛烷胺片中有關(guān)物質(zhì)含量

陳 佩，翟 宇（寧夏回族自治區(qū)藥品檢驗(yàn)所，銀川市 750004）

鹽酸金剛烷胺片用于治療帕金森病、藥物誘發(fā)的錐體外系疾患，也用于防治A型流感病毒所引起的呼吸道感染。《中國(guó)藥典》2005、2010年版[1，2]中未收載鹽酸金剛烷胺片有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法，《美國(guó)藥典》（USP）[3]和《英國(guó)藥典》（BP）[4]也只對(duì)鹽酸金剛烷胺原料藥有關(guān)物質(zhì)作了規(guī)定。而片劑在制粒、包衣以及貯存過程中均有可能會(huì)導(dǎo)致有關(guān)物質(zhì)產(chǎn)生或增加，影響藥品的療效[5]。故本文參考《中國(guó)藥典》2010年版中鹽酸金剛烷胺原料藥有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法，建立了氣相色譜（GC）法測(cè)定鹽酸金剛烷胺片中的有關(guān)物質(zhì)含量。該方法靈敏、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，可用于鹽酸金剛烷胺片的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

6890N氣相色譜儀及工作站（美國(guó)Agilent公司）。

鹽酸金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100426-200301，含量：100.0%）；金剛烷（美國(guó)Chromadex公司，批號(hào)：01380-L01，含量：99.9%）；41批鹽酸金剛烷胺片（國(guó)內(nèi)8家藥廠提供，批號(hào)略，規(guī)格：每片0.1 g）；三氯甲烷為分析純，鹽酸、氫氧化鈉、雙氧水、無水硫酸鈉均為優(yōu)級(jí)純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為HP-5（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；載氣為氮?dú)猓粴浠鹧骐x子化檢測(cè)器（FID），進(jìn)樣口溫度為200℃，檢測(cè)器溫度為300℃；柱溫采用程序升溫，初始溫度為80℃，保持4 min，然后以12℃·min－1升溫至280℃，保持15 min；載氣流速為1.0 mL·min－1；溶液進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為2 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 鹽酸金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密稱取鹽酸金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品2.000 g，置于分液漏斗中，加5 mol·L－1氫氧化鈉溶液20 mL，用三氯甲烷分次振搖提取（15、10 mL），靜置分層；取三氯甲烷層，加適量無水硫酸鈉振搖脫水，濾過；取濾液置于25 mL容量瓶中，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品貯備溶液。精密量取貯備液1 mL置于10 mL容量瓶中，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2.2 鹽酸金剛烷胺供試品溶液。取鹽酸金剛烷胺片樣品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于鹽酸金剛烷胺1.25 g），置于分液漏斗中，加5 mol·L－1氫氧化鈉溶液20 mL，用三氯甲烷分次振搖提取（15、10 mL），取三氯甲烷層，加適量無水硫酸鈉振搖脫水，濾過，取濾液置于25 mL容量瓶中，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3 金剛烷溶液。精密稱取金剛烷0.5 g，置于10 mL容量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.4 輔料溶液。按處方量稱取輔料（約相當(dāng)于含鹽酸金剛烷胺1.25 g的量），按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備輔料溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取“2.2.3”項(xiàng)下金剛烷溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加鹽酸金剛烷胺供試品溶液1 mL，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。取此試驗(yàn)溶液及“2.2”項(xiàng)下鹽酸金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液、鹽酸金剛烷胺供試品溶液、輔料溶液各2 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜，見圖1。

由圖1可知，鹽酸金剛烷胺保留時(shí)間約為14.1 min，金剛烷保留時(shí)間約為11.1 min，鹽酸金剛烷胺峰與金剛烷峰（分離度大于20）及其他物質(zhì)峰的分離度良好。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖A.輔料；B.標(biāo)準(zhǔn)品；C.供試品；D.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液；1.鹽酸金剛烷胺；2.金剛烷Fig 1 The chromatogram of system suitability testA.blank excipient；B.reference substance；C.test sample；D.solution of system suitability；1.amantadine hydrochloride；2.adamantane

2.4 專屬性試驗(yàn)

精密稱取鹽酸金剛烷胺片細(xì)粉適量（約相當(dāng)于鹽酸金剛烷胺1.25 g）共5份，進(jìn)行如下處理。（1）酸破壞：加0.1 mol·L－1鹽酸溶液10 mL使鹽酸金剛烷胺溶解，在50℃水浴加熱20 min，放置至室溫，加0.1 mol·L－1氫氧化鈉溶液中和；（2）堿破壞：加1 mol·L－1氫氧化鈉溶液10 mL使鹽酸金剛烷胺溶解，在80℃水浴加熱50 min，放置至室溫，加1 mol·L－1鹽酸溶液中和；（3）氧化破壞：加雙氧水10 mL使鹽酸金剛烷胺溶解，放置過夜；（4）高溫破壞：在105℃烘箱中加熱過夜；（5）光照破壞：在5 000 lx照度下光照過夜。上述5份樣品均加入5 mol·L－1氫氧化鈉溶液20 mL，用三氯甲烷分次振搖提取（15、10 mL），靜置分層；取三氯甲烷層，加適量無水硫酸鈉振搖脫水，濾過，取濾液置于25 mL容量瓶中，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻。分別取上述5種溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜。結(jié)果，各破壞條件下均有不同程度的降解產(chǎn)物生成，但均能與主峰達(dá)到完全分離，表明該方法專屬性好，詳見圖2。

圖2 專屬性試驗(yàn)色譜圖A.酸破壞后樣品；B.堿破壞后樣品；C.氧化破壞后樣品；D.高溫破壞后樣品；E.光照破壞后樣品；1.鹽酸金剛烷胺Fig 2 The chromatogram of exclusion inspectionA.sample destroyed by acid；B.sample destroyed by alkali；C.sample destroyed by oxidation；D.sample destroyed by high temperature；E.sample destroyed by high light；1.amantadine hydrochloride

2.5 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下鹽酸金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品貯備溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置于5 mL容量瓶中，用三氯甲烷溶液稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取上述不同濃度溶液2 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以各溶液濃度（X，mg·mL－1）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，進(jìn)樣濃度在8.03～80.3 mg·mL－1的范圍內(nèi)，與測(cè)定的峰面積呈良好的線性關(guān)系：A＝6.489×105X+4.060（r＝0.999 9，n＝6）。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下鹽酸金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品和供試品溶液，分別在0、1、4、12 h進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果鹽酸金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液放置12 h穩(wěn)定，鹽酸金剛烷胺峰面積的RSD＝0.8%；供試品溶液中雜質(zhì)峰面積未有明顯增加，鹽酸金剛烷胺峰面積的RSD＝1.2%。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下鹽酸金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品貯備溶液1.0 mL，置于5 mL容量瓶中，用三氯甲烷溶液稀釋至刻度，搖勻。連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定。結(jié)果，鹽酸金剛烷胺峰面積值的RSD＝1.1%。

2.8 最低檢測(cè)限

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下鹽酸金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品貯備溶液適量，用三氯甲烷逐步稀釋，測(cè)定，以鹽酸金剛烷胺峰的信噪比（S/N）為3計(jì)算，測(cè)得其最低檢測(cè)限為0.22 μg。

2.9 回收率試驗(yàn)

分別精密稱取鹽酸金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品1.0、1.25、1.5 g各3份，分置于9個(gè)分液漏斗中，分別加入輔料適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成低、中、高3個(gè)濃度的溶液各3份。取上述溶液進(jìn)樣2 μL測(cè)定，記錄色譜。計(jì)算鹽酸金剛烷胺回收率，結(jié)果低、中、高濃度回收率（n＝3）分別為92.1%、97.3%、95.5%，RSD分別為2.8%、2.1%、1.9%，表明準(zhǔn)確度良好。

2.10 樣品中有關(guān)物質(zhì)的含量測(cè)定

取鹽酸金剛烷胺片樣品20片，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，加入金剛烷溶液。精密量取“2.3”項(xiàng)下系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液2 μL，注入氣相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%，金剛烷胺峰與金剛烷峰的分離度應(yīng)不小于20。精密量取供試品溶液2 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，按歸一化法計(jì)算，單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于總峰面積的0.5%，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于總峰面積的2.0%。

對(duì)全國(guó)8個(gè)生產(chǎn)廠家的41批樣品按擬定的有關(guān)物質(zhì)方法測(cè)定，結(jié)果顯示，41批樣品中均檢查出雜質(zhì)峰，檢出率為100.0%，41批樣品中總雜質(zhì)峰的峰面積均在規(guī)定限度（2.0%）內(nèi)，單個(gè)雜質(zhì)峰的峰面積均在規(guī)定限度（0.5%）內(nèi)，結(jié)果見表1。

3 討論

3.1 雜質(zhì)限度的選擇

USP及BP收載的鹽酸金剛烷胺原料藥采用氣相色譜法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，限度規(guī)定單個(gè)未知雜質(zhì)不得過0.3%，所有雜質(zhì)總量不得過1.0%；《中國(guó)藥典》2010年版二部中鹽酸金剛烷胺原料藥有關(guān)物質(zhì)的限度規(guī)定單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于總峰面積的0.3%，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于總峰面積的1.0%。考慮片劑中有關(guān)物質(zhì)可能增加，故擬定鹽酸金剛烷胺片有關(guān)物質(zhì)的限度為：?jiǎn)蝹€(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于總峰面積的0.5%，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于總峰面積的2.0%。

表1 41批樣品中有關(guān)物質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果Tab 1 Determination results of related substances in 41 batches of samples

3.2 檢測(cè)方法的選擇

筆者曾嘗試采用高效液相-紫外分光光度法（HPLC-UV法）和高效液相-蒸發(fā)光散射（HPLC-ELSD）法進(jìn)行測(cè)定。但由于鹽酸金剛烷胺紫外最大吸收波長(zhǎng)為210 nm，屬于末端吸收，基線噪音大，故不適合采用HPLC-UV法；鹽酸金剛烷胺為水溶性化合物，采用HPLC-ELSD法測(cè)定，其在色譜柱上的保留時(shí)間短，雜質(zhì)峰與鹽酸金剛烷胺峰不能完全分離。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，本文建立的氣相色譜法測(cè)定鹽酸金剛烷胺片的有關(guān)物質(zhì)專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確，可有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量。

3.3 測(cè)定結(jié)果分析

鹽酸金剛烷胺片廠家編號(hào)為2、5、6、7的樣品單個(gè)雜質(zhì)量較高，范圍在0.11%～0.36%；廠家編號(hào)為1、4、8的樣品單個(gè)雜質(zhì)量較低，范圍在0.03%～0.09%；廠家編號(hào)為3的樣品單個(gè)雜質(zhì)量總體較低，但有1批較高。說明建立的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法對(duì)鹽酸金剛烷胺片生產(chǎn)處方的合理性、生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性均可良好監(jiān)控。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：538.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：737.

[3] The United States Pharmacopeial Convention.The United States Pharmacopeial[S].Rockville：The United States Pharmacopeial Convention，2009：1 054.

[4] The Recommendation of the Commission on Human Medicines.British Pharmacopoeia[S].London：British Pharmacopoeia Commission Office，2009：262.

[5] 許晉星.RP-HPLC法測(cè)定馬來酸桂哌齊特片中有關(guān)物質(zhì)的含量[J].中國(guó)藥房，2009，20（1）：59.