消水腫Ⅱ號對妊娠高血壓綜合征大鼠的防治作用*

孫國珍 陳衛(wèi)平 史黨民 賈淑杰 姚天一 李毅敏 葉 娟 王 蕾

消水腫Ⅱ號對妊娠高血壓綜合征大鼠的防治作用*

孫國珍 陳衛(wèi)平 史黨民 賈淑杰 姚天一 李毅敏 葉 娟 王 蕾

目的：觀察消水腫Ⅱ號對亞硝酸左旋精氨酸甲酯(L-NAME)7 mg/kg致妊娠高血壓綜合征（妊高征）大鼠血壓、尿蛋白及胎盤胎仔發(fā)育的影響。方法雌雄鼠合籠次日晨，雌鼠陰道涂片發(fā)現(xiàn)精子確定為孕0 d(E0 d)，按照順序依次分入各受試組，即正常孕鼠組(A組，n=6，E10 d開始灌胃蒸餾水10 mL/kg)、妊高征模型對照組(B組，n=10，E10 d灌胃蒸餾水10 mL/kg)、硫酸鎂陽性對照組(C組，n=8，E14 d開始腹腔注射硫酸鎂注射液100 mg/kg)、消水腫Ⅱ號42 g生藥/kg組(D組，n=10，E10 d開始灌胃消水腫Ⅱ號42 g/kg)、消水腫Ⅱ號21 g/kg組(E組，n=9，E10 d開始灌胃消水腫Ⅱ號21 g/kg)。孕期14 d開始，除A組外其他各組經(jīng)靜脈注射L-NAME 7 mg/kg 1次/d，共4 d。測定大鼠尾動脈血壓，尿蛋白含量，胎仔、胎盤質(zhì)量及死胎率、畸胎率。結(jié)果實驗結(jié)束時，D組大鼠收縮壓，舒張壓，平均動脈壓與B組比較，差異有統(tǒng)計學意義（均P<0.01）。E組較B組收縮壓明顯降低（P<0.05）。消水腫Ⅱ號對尿蛋白含量未見明顯改善作用。E組死胎率較妊B組明顯降低，畸胎率亦顯著下降（均P<0.01）。結(jié)論消水腫Ⅱ號能夠有效降低妊高征大鼠血壓，促進妊高征大鼠胎盤供血和胎仔發(fā)育。

高血壓,妊娠性 血壓 胎盤 死胎 畸胎 疾病模型,動物 大鼠,Sprague-Dawley 消水腫Ⅱ號

消水腫Ⅱ號臨床主要應用于妊娠高血壓綜合征(妊高征)。該方應用丹參和川芎的脂溶性成分以舒張平滑肌、黃芪的益氣固本和益氣化淤作用達活血安胎、益氣生血及行血行水的功能。本研究旨在利用現(xiàn)代藥理學方法探討其用于妊高征治療作用藥效及機制，為消水腫Ⅱ號的臨床應用提供藥理學參考。

1 材料與方法

1.1實驗動物 SPF級SD大鼠139只，雌性90只，雄性49只，平均8周齡，平均體質(zhì)量(260.0±10.0)g，購自北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部，許可證編號：SCXK（京）2006-0008。動物管理：標準化實驗室［實驗動物使用許可證號SYXK（津）2007-0001］，每天為大鼠提供普通全價顆粒飼料Ⅱ號(北京科澳協(xié)力飼料有限公司)，自由飲水。

1.2儀器與試劑 ALC-NIBP無創(chuàng)血壓測量分析系統(tǒng)（上海奧爾科特生物科技有限公司），T-1000電子天平（常熟市雙杰測試廠），PL203精密電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；消水腫Ⅱ號，為棕色膏狀，規(guī)格2.371 g生藥/g膏，用純凈水配制成不同濃度的應用液：42 g生藥/kg，21 g生藥/kg。硫酸鎂注射液（天津金耀氨基酸有限公司），亞硝酸左旋精氨酸甲酯（L-NAME），購自碧云天生物科技有限公司，使用前用雙蒸水無菌條件下配制成0.7%L－NAME溶液。

1.3造模與給藥方法 將雌雄大鼠按照2∶1比例合籠，次晨用生理鹽水浸濕的無菌棉簽對雌鼠進行陰道擦拭，鏡檢發(fā)現(xiàn)精子者為妊娠[1]。造模：從妊娠后14 d開始，除正常孕鼠組外，其余孕鼠靜脈注射L-NAME 7 mg/kg，正常孕鼠組靜脈注射生理鹽水，1次/d，共4 d。確定受孕大鼠43只，按受孕順序依次分入各組，正常孕鼠組（A組）6只，于妊娠后10 d開始灌胃蒸餾水10 mL/kg；妊高征模型對照組（B組）10只，于妊娠后10 d開始灌胃蒸餾水10 mL/kg；硫酸鎂陽性對照組（C組）8只，于妊娠后14 d開始腹腔注射硫酸鎂注射液100 mg/kg；消水腫Ⅱ號42 g生藥/kg組（D組）10只，于妊娠后10 d開始灌胃消水腫Ⅱ號42 g生藥/kg（相當于臨床人用劑量的30倍）；消水腫Ⅱ號21 g生藥/kg組（E組）9只，于妊娠后10 d開始灌胃消水腫Ⅱ號21 g生藥/kg（相當于臨床人用劑量的15倍）。

1.4指標檢測及方法 （1）血壓：每組于妊娠后9 d（藥物干預前）測量基礎收縮壓、基礎舒張壓及基礎平均動脈壓、于18 d（藥物干預后）測量收縮壓、舒張壓及平均動脈壓。（2）尿蛋白：妊娠18 d測定血壓后，用4.5%戊巴比妥鈉溶液腹腔注射大鼠麻醉，膀胱穿刺取尿，與日間3次腹部按壓收集的尿液混合后，送檢500 μL測得尿蛋白濃度。（3）胎盤和胎仔：剖腹取胎，觀察子宮和胎盤形態(tài)，記錄胎仔和胎盤質(zhì)量，比較各組間的死胎率（死胎數(shù)/胎鼠總數(shù)）和畸胎率（畸死胎數(shù)/胎鼠總數(shù)）。

1.5統(tǒng)計學方法 用SPSS 11.5和SAS 9.1.3統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以x ±s表示，多組均數(shù)間比較采用單因素方差分析及SNK-q檢驗。計數(shù)資料用χ2檢驗，不符合χ2檢驗時進行雙向無序R×C表確切概率法，組間兩兩比較時選用四格表確切概率法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計意義。

2 結(jié)果

2.1消水腫Ⅱ號對妊高征大鼠血壓的影響 制備妊高征模型前，各組大鼠基礎血壓差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1；實驗結(jié)束時，B組大鼠收縮壓、舒張壓、平均動脈壓較A組升高，D組收縮壓、舒張壓、平均動脈壓較B組明顯降低，E組收縮壓較B組明顯降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01或P<0.05），見表2。

2.2對妊高征大鼠尿蛋白的影響 A～E組尿蛋白分別為（0.080±0.015）、（0.130±0.027）、（0.106±0.018）、（0.115±0.023）及（0.128±0.024）mg，差異有統(tǒng)計學意義(F=5.680，P<0.01)，其中B組較A組差異有統(tǒng)計學意義（q=3.804，P<0.01），C、D、E組與B組比較，差異均無統(tǒng)計學意義（均P>0.05）。

表1 藥物干預前各組大鼠基礎血壓比較

表1 藥物干預前各組大鼠基礎血壓比較

均P>0.05;1 mm Hg=0.133 kPa

組別 n 基礎收縮壓 基礎舒張壓 基礎平均動脈壓A組B組C組D組E組F 6 10 8 10 9 130.72±17.26 133.18±8.64 132.39±13.05 130.99±15.52 125.85±10.06 0.473 90.35±14.30 99.69±16.30 100.35±16.16 97.62±11.55 96.70±13.03 0.519 101.46±15.54 110.23±17.63 112.03±17.45 109.20±12.76 106.80±13.20 0.483

表2 消水腫Ⅱ號對妊娠高血壓大鼠血壓的影響

表2 消水腫Ⅱ號對妊娠高血壓大鼠血壓的影響

*P<0.05,**P<0.01

組別 n 收縮壓 舒張壓 平均動脈壓A組B組C組D組E組F q A∶B A∶C A∶D A∶E B∶C B∶D B∶E C∶D C∶E D∶E 6 10 8 10 9 128.74±15.92 159.35±11.94 134.04±13.82 132.57±13.87 141.77±16.43 6.499**5.837**0.938 0.743 2.484 5.058**6.036**3.871*0.299 1.544 2.073 96.00±18.01 117.42±8.52 104.85±14.40 99.89±9.30 111.25±13.24 4.061**4.697*1.801 0.868 3.343 2.889 4.543**1.563 1.161 1.470 2.943 106.25±18.80 129.36±10.05 115.41±16.03 111.90±9.75 123.40±14.22 3.862*4.674*1.719 1.162 3.470 2.957 4.174*1.390 0.759 1.695 2.751

2.3消水腫Ⅱ號對胎仔和胎盤的影響 各組胎盤和胎仔質(zhì)量比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表3。B組和D組均出現(xiàn)死胎和畸胎現(xiàn)象，且A組死胎率與B組、D組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），C組、E組死胎率和畸胎率與B組比較均顯著降低（P<0.05或P<0.01），見表4。

3 討論

妊高征動物模型的建立方法主要有結(jié)扎雙側(cè)子宮動脈致子宮胎盤缺血[2]、內(nèi)毒素皮下注射致血管內(nèi)皮損傷[3]、局部寒冷刺激孕鼠足底[4]及一氧化氮合酶(NOS)抑制劑皮下或靜脈注射致一氧化氮合成降低[5-6]。結(jié)合妊高征的全身細小動脈痙攣的基本病理變化，本實驗采用L-NAME靜脈注射，慢性阻斷孕鼠NOS使其產(chǎn)生妊高征樣癥狀。實驗結(jié)果證實孕鼠L-NAME靜脈注射7 mg/kg即可誘發(fā)孕鼠血壓升高及蛋白尿，同時出現(xiàn)胎鼠發(fā)育遲緩，死胎增加等癥狀，與人類妊高征的表現(xiàn)相似。大鼠孕期分期為孕1～4 d為著床期，7～9 d為早孕期，9～13 d為中孕期，16～18 d為晚孕期[5]。L-NAME誘導的大鼠妊高征大多是在大鼠妊娠中晚期，因此本實驗選擇L-NAME注射時間為孕14 d，以求起到慢性NOS抑制作用。

表3 消水腫Ⅱ號對胎仔和胎盤的影響

表3 消水腫Ⅱ號對胎仔和胎盤的影響

均P>0.05

組別 n 胎盤質(zhì)量 胎仔質(zhì)量A組B組C組D組E組F 6 10 8 10 9 0.404±0.019 0.376±0.023 0.377±0.043 0.408±0.032 0.391±0.060 1.291 1.510±0.055 1.430±0.056 1.462±0.105 1.544±0.140 1.548±0.140 2.116

表4 消水腫Ⅱ號對死胎率、畸胎率的影響 （%）

D組大鼠尾動脈收縮壓、舒張壓和平均動脈壓較B組均降低，表明消水腫Ⅱ號降壓作用明顯，但未見對尿蛋白含量的影響。孕鼠、胎盤和胎仔三者有著緊密的關系：一氧化氮（NO）在維持胎兒-胎盤循環(huán)的基礎血管張力，調(diào)節(jié)孕期子宮-胎兒-胎盤循環(huán)的血流量方面發(fā)揮重要作用。胎兒發(fā)育遲緩，死胎增加是妊高征的重要特征[7]。本實驗結(jié)果表明，L-NAME靜脈注射可致孕鼠胎盤質(zhì)量下降，胎仔發(fā)育遲緩，死胎、畸胎率增加；消水腫Ⅱ號可降低畸胎率、死胎率。D組出現(xiàn)9個死胎和1個畸胎，E組未出現(xiàn)死胎和畸胎，考慮可能為消水腫Ⅱ號21 g生藥/kg是預防畸胎和死胎的有效劑量，而隨劑量增高至42 g生藥/kg，其預防畸胎、死胎的效果已不明顯。

[1] 徐叔云主編.藥理實驗方法學[M].第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1571-1571.

[2] Takei H,Iizuka S,Yamamoto M,et al.The herbal medicine To?ki-shakuyaku-san improves the hupertension and intrauterine growth retardation in preeclampsia rats induced by Nomega-ni?tro-L-arginine methyl ester[J].J Phytomedicine Sci，2007,104(4):319-328.

[3] Pandhi P,Saha L,Malhotra S.Effect of oral magnesium supplemen?tation on experimental preeclampsia induced by prolonged block?ade of nitric oxide synthesis in pregnant rats[J].Indian J Exp Biol，2002,40(3):349-351.

[4] Fernández Celadilla L,Carbajo Rueda M,Mu?oz Rodríguez M.Pro?longed inhibition of nitric oxide synthesis in pregnant rats:effects on blood pressure,fetal growth and litter size[J].Arch Gynecol Ob?stet，2005,271(3):243-248.

[5] Podjarny E,Benchetrit S,Katz B,et al.Effect of methyldopa on re?nal function in rats with L-NAME-induced hypertension in preg?nancy[J].Nephron，2001，88（4）：354-359.

[6] 方馬榮，李繼承.川芎嗪合并硫酸鎂治療妊高征大鼠的療效及機制探討[J].實驗生物學報，2005，38（2）：45-53.

[7] 陳敦金，趙揚，佘若菁，等.川芎嗪、硫酸鎂對妊娠高血壓綜合征患者的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2003，23（3）：185-188.

The Preventive Effect of XSZⅡon Pregnancy-Induced Hypertension in Rats

SUN Guozhen,CHEN Weiping，SHI Dangmin，JIA Shujie，YAO Tianyi，LI Yimin，YE Juan，WANG Lei

Tianjin Central Hospital of Obstetrics and Gynecology，Tianjin 300052，China

Objective:To study the hypotensive and preventive effects of XSZⅡon pregnancy-induced hypertension in rat model established by L-NAME.Methods:Pregnancy rats were assigned to 5 groups according to the sequence of pregnan?cy including normal pregnancy rats(A group,n=6,PO distilled water 10 mL/kg from E10)，hypertension control rats(B group,n=10,PO distilled water 10 mL/kg from E10)，Epsom salt control rats(C group，n=8,ip Epsom salt 100 mg/kg from E14)，XSZⅡ 42 g/kg group(D group，n=10,PO XSZⅡ 42 g/kg from 10)and XSZⅡ 21 g/kg group(E group，n=9,PO XSZⅡ21 g/kg from E10).Pregnancy rats were injected 7 mg/kg L-NAME i.v.on the E14 once a day for 4 days except for rats of A group.The values of tail arterial blood pressure,urine protein,placental weight,fetal death rate and birth defects rate were measured in rats.Results:There were different significances in systolic blood pressure,diastolic blood pressure and mean ar?terial pressure between D and B group(P<0.01).The systolic blood pressure was significantly decreased in E group com?pared with that of B group(P<0.05).There was no significant improvement in urine protein in rats treated by XSZⅡ.The still birth rate was significant lower in E group than that of B group(P<0.01).The abnormal embryo rate was also significant lower in rats of E group than that of control group(P<0.01).Conclusion:For pregnancy-induced hypertension,XSZⅡcan effectively reduce the blood pressure and promote blood supply to the placenta and fetal rat development.

hypertension,pregnancy-induced blood pressure placenta fetal death monsters disease models,animalrats,Sprague-Dawley XSZⅡ

*天津市衛(wèi)生局中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合科研課題基金（項目編號：07054）

300052 天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院（孫國珍，史黨民，姚天一，葉娟）；天津市醫(yī)藥科學研究所（陳衛(wèi)平，賈淑杰，李毅敏，王蕾）

（2010-03-30收稿 2010-08-13修回）

（本文編輯 陸榮展）

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