2種羅格列酮鈉制劑在犬體內的生物等效性研究Δ

胡思星，方大樹，張檢，李靖柯，周鴻睿，胡湘南（重慶醫科大學藥學院，重慶市 400016）

2種羅格列酮鈉制劑在犬體內的生物等效性研究Δ

胡思星＊，方大樹，張檢，李靖柯，周鴻睿，胡湘南#（重慶醫科大學藥學院，重慶市 400016）

目的：比較羅格列酮鈉腸溶制劑與羅格列酮鈉普通制劑在犬體內的藥動學特征及其生物等效性。方法：將6只犬均分為2組，分別單次灌服羅格列酮鈉腸溶膠囊或羅格列酮鈉普通膠囊4mg，于給藥前及給藥后450min內后腿靜脈取血，給藥7d后，相同劑量自身交叉給藥，于上述相同時間點取血，用高效液相色譜法測定血漿中羅格列酮濃度；經DAS 2.0軟件處理，計算藥動學參數。結果：在相同劑量下，羅格列酮鈉腸溶膠囊與其普通膠囊的藥動學參數分別為AUC0～∞：（119.662±8.451）、（118.493±15.325）mg·min·L－1，t1/2Ka：（101.548±6.526）、（39.702±26.293）min，cmax：（0.359±0.035）、（0.807±0.208）mg·L－1；與普通膠囊比較，腸溶膠囊的AUC0～∞無顯著性差異，t1/2Ka明顯延長、cmax明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。結論：與普通膠囊比較，羅格列酮鈉腸溶制劑與其生物等效且具有明顯的緩釋特征。

羅格列酮鈉；腸溶膠囊；普通膠囊；藥動學；犬；生物等效性

羅格列酮是噻唑烷二酮類藥，其以過氧化物酶——增殖體活化受體γ（PPARγ）為作用靶點的治療2型糖尿病的新型藥物，其通過提高骨骼肌和脂肪對葡萄糖的吸收以及降低肝糖的輸出，來發揮胰島素的敏感作用，達到對糖尿病患者血糖的控制作用[1]。羅格列酮鈉片（商品名：太羅）是我國自行研究開發的、國內唯一擁有完全自主知識產權的抗糖尿病新藥，其通過放大胰島素的降糖作用，減少胰島素抵抗，更好地“復活”自身胰島素。但羅格列酮鈉呈堿性，且其普通片劑或膠囊在胃中崩解后又轉變成了羅格列酮或其鹽酸鹽，并不利于其吸收。為此，重慶醫科大學藥學院研發了其腸溶膠囊，在本文中，通過以羅格列酮鈉的普通膠囊為參比制劑，采用文獻[2，3]方法建立血漿中羅格列酮的高效液相色譜分析方法，對犬體內的羅格列酮鈉腸溶膠囊的藥動學特征和生物利用度進行研究，為進一步完善該劑型以及開發新的藥物提供理論依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

1100 型高效液相色譜儀（美國Aglient公司）；GL-88B型混勻器（江西醫療器械廠）；R200D電子天平（北京塞多利斯天平有限公司）；HS-120D超聲處理器（上海新芝生物技術研究所）；Anke TGL-16G離心機（上海醫療器械廠）。

1.2 試藥

羅格列酮鈉片（太極集團重慶涪陵制藥廠有限公司，批號：66070001，規格：每片4mg）；羅格列酮對照品（北京高盟化工有限公司，批號：070911，含量：99.9%）；羅格列酮鈉普通膠囊（取羅格列酮鈉片研碎，以4號空心膠囊以每粒4mg的劑量灌裝，打光后即得）；羅格列酮鈉腸溶膠囊（自制，規格：每粒4mg）；乙二胺四乙酸（EDTA）、醋酸鈉、冰醋酸（分析純，重慶川東化工有限公司化學試劑廠）；乙腈、甲醇（色譜純，江蘇漢邦有限公司）；戊巴比妥鈉（分析純，中國醫藥集團上海化學試劑公司）。

1.3 動物

家犬6只，♀♂各半，體重8～12kg，月齡10～12個月，由重慶醫科大學實驗動物中心提供，合格證號：SYXK（渝）2007-0001，實驗前2周進入實驗室。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[4，5]

色譜柱：Lichrospher C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：0.01mol·L－1的醋酸鈉緩沖溶液（醋酸調pH為6.0）-甲醇（35∶65）；流速：1mL·min－1；柱溫：35℃；熒光檢測激發波長：250nm ；發射波長：370nm；進樣量：100μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備液：精密稱取羅格列酮對照品95.58mg，置于100mL容量瓶中，加乙腈超聲處理使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液1mL，置于25mL容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻。再精密量取1mL，置于10mL的容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，得濃度為3.8232μg·mL－1的溶液，即得，貯存于4℃冰箱備用。

2.2.2 標準工作液：精密量取“2.2.1”項下對照品貯備液1mL，加3mL乙腈稀釋后，搖勻，得濃度為0.9558μg·mL－1的溶液，貯存于4℃冰箱中備用。

2.3 樣品處理

將血漿樣品200μL、乙腈400μL，同置于1.5mL具塞離心試管，混勻3min，15000r·min－1離心15min，將上清液轉入另一具塞離心試管內，相同條件下再離心5min，取上清液100μL注入液相色譜儀，記錄色譜，以外標法進行定量分析。

2.4 含量測定方法學研究

取♂家犬1只，用3%戊巴比妥鈉1mL·kg－1麻醉，于后腿靜脈取血，每1mL加入50mmol·L－1EDTA 0.1mL抗凝，轉入離心管中，3000r·min－1離心5min，取血漿于具塞玻璃試管中，置于－20℃冰箱中備用，即為空白血漿。

2.4.1 專屬性考察。精密量取標準工作液0.1mL，加醋酸鈉緩沖液0.2mL、乙腈0.3mL，混勻后，精密量取該溶液100μL注入液相色譜儀；取空白血漿0.2mL，加乙腈0.4mL，按“2.3”項下方法處理，取上清液進樣；取犬灌服羅格列酮普通膠囊190min后的血漿，處理后進樣分析，記錄色譜。結果顯示，空白血漿在羅格列酮對照品出峰處無色譜峰，血漿樣品溶液的主峰出峰時間與對照品一致，說明空白血漿不會干擾羅格列酮血漿樣品的測定。高效液相色譜詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.空白血漿；C.樣品血漿；1.羅格列酮Fig1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.blank plasma；C.sample plasma；1.rosiglitazone

2.4.2 標準曲線的制備。精密量取對照品貯備液適量，分別置于0.2mL的空白血漿中，加乙腈稀釋，制備成濃度分別為0.01991、0.07965、0.15930、0.47790、0.63720、1.27440、1.91160μg·mL－1的血漿樣品，按“2.3”項下方法處理后，進樣分析，記錄色譜。以濃度（c）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標進行回歸分析，得回歸方程：A＝2523.7c+23.391（r＝0.99945），結果表明，羅格列酮檢測濃度在0.01991～1.91160μg·mL－1范圍內呈良好的線性關系。

2.4.3 靈敏度考察。取對照品貯備液適量，分別稀釋成不同濃度溶液，加入至空白血漿中，按“2.3”項下方法處理后，進樣分析。結果表明，羅格列酮最低檢測限（S/N＞2）為0.125ng。

2.4.4 回收率與精密度試驗。分別取標準工作液適量，置于0.2mL空白血漿中，加乙腈稀釋，制備成濃度分別為0.039825、0.1593、0.6372μg·mL－1的樣品血漿，然后按“2.3”項下方法處理后，進樣分析，以醋酸鈉緩沖液稀釋的標準工作液為對照，分別計算回收率；另取回收率試驗中高、中、低3種溶液各1份，每天進樣5次，連續進樣5d，同法計算日內和日間精密度，結果見表1。

表1 回收率與精密度試驗結果Tab1 Results of recovery and precision tests

2.5 藥動學研究

取犬6只，隨機分為2組，每組3只，給藥前犬禁食12h，用3%戊巴比妥鈉1mL·kg－1麻醉，灌胃給予羅格列酮鈉腸溶膠囊或羅格列酮鈉普通膠囊4mg，于給藥前及給藥后30、50、80、100、130、150、190、230、270、310、360、400、450min分別從后腿靜脈取血，給藥7d后，同劑量自身交叉給藥，于上述相同時間點取血，加入EDTA抗凝，轉入離心管中，3000r·min－1離心5min，取血漿0.5mL于試管中，按“2.3”項下方法處理后，進樣分析，記錄色譜，計算各時間點血藥濃度，采用DAS2.0藥動學軟件進行自動擬合處理。由于實驗過程中有2只犬數據未獲得，因此文中只用了4只犬的血藥數據進行分析。2種制劑在犬體內的藥-時曲線詳見圖2，藥動學參數詳見表2。

圖22 種制劑在犬體內的藥-時曲線Fig2 Plasma concentration-time curves of 2kinds of preparations in dogs

表2 2 種制劑在犬體內的藥動學參數（±s，n＝4）Tab2 Pharmacokinetic parameters of 2kinds of preparations in dogs（±s，n＝4）

表2 2 種制劑在犬體內的藥動學參數（±s，n＝4）Tab2 Pharmacokinetic parameters of 2kinds of preparations in dogs（±s，n＝4）

與普通膠囊比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.capsule：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

參數Ke/min－1 Ka/min－1 V1/F/L·kg－1 t1/2Ka/min tmax/min CL/F/mL·min－1·kg－1 cmax/μg·mL－1 AUC0～450min/μg·min·mL－1 AUC0～∞/μg·min·mL－1普通膠囊0.013±0.0040.034±0.0390.355±0.06639.702±26.293200±205±10.621±0.264103.66±16.839118.493±15.325腸溶膠囊0.006±0.001＊0.007±0.001＊＊0.679±0.025101.548±6.526＊＊260±20＊4±10.359±0.035＊＊102.716±3.764119.662±8.451

由表2可見，與普通膠囊比較，腸溶膠囊的Ka、Ke、cmax明顯降低，t1/2Ka、tmax明顯延長（P＜0.05或P＜0.01），AUC0～450min、AUC0～∞無顯著性差異。

2.6 生物等效性分析

在相同劑量下，與普通膠囊 AUC0～450min、AUC0～∞比較，腸溶膠囊的相對生物利用度為（90.4±8.4）%和（100.9±14.4）%，通過三因素方差分析（周期、制劑、個體），結果顯示，在制劑間、周期間無明顯差異，而個體間存在差異，這可能是由于個體差異或操作誤差造成。并在此基礎上對AUC0～450min進行雙單側檢驗，結果表明，腸溶膠囊與普通膠囊AUC0～∞的比值90%置信區間為83.3%～97.5%，在80%～125%內，各參數與等效性檢驗的低限及高限比較以及群體等效性（PBE）分析顯示均合格，說明了2種制劑具有生物等效性。

3 討論

有研究[2]表明，麻醉藥戊巴比妥鈉對羅格列酮藥動學沒有影響。在本次研究中，將羅格列酮鈉的普通制劑改成腸溶制劑后，可以減少其堿性鈉鹽對胃黏膜的刺激以及胃環境的破壞，同時，也避免了羅格列酮鈉轉變成羅格列酮或其鹽酸鹽，有利于藥物的吸收[6～9]。從實驗結果可推知，羅格列酮鈉的腸溶制劑有明顯的緩釋特征，在一定程度上避免了血藥濃度的峰值和谷值，延長了藥物作用時間，使血藥濃度更加平穩，也減少血藥濃度的峰值可能帶來的噻唑烷二酮類藥物的相關副作用，提高了患者的順應性，適合長期服用。本文可在某種程度上給臨床合理用藥提供一定的指導，但動物和人體對該制劑的吸收可能存在差異，因此，還需要對該制劑進行更深入的考察和研究。

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Bioequivalence of 2Kinds of Rosiglitazone Sodium Preparations in Dogs

HU Si-xing，FANG Da-shu，ZHANG Jian，LI Jing-ke，ZHOU Hong-rui，HU Xiang-nan
（School of Pharmacy，Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China）

OBJECTIVE：To compare pharmacokinetic characteristics and bioequivalence of Rosiglitazone sodium enteric-release capsule and Rosiglitazone sodium capsule in dogs.METHODS：6dogs were divided into two groups.Both groups were given Rosiglitazone sodium enteric-release capsule or Rosiglitazone sodium capsule 4mg respectively in randomized cross-over study.Blood samples of hind legs vein were collected before administration and within 450min after administration.The plasma concentration of rosiglitazone was measured by HPLC.The pharmacokinetic parameters of rosiglitazone were calculated using DAS 2.0software.RESULTS：The pharmacokinetic parameters of same dosage of Rosiglitazone sodium enteric-release capsules vs.Rosiglitazone sodium capsules were as follows：AUC0～∞：（119.662±8.451）mg·min·L－1vs.（118.493±15.325）mg·min·L－1；t1/2Ka：（101.548±6.526）min vs.（39.702±26.293）min；cmax：（0.359±0.035）mg·L－1vs.（0.807±0.208）mg·L－1.Compared with normal capsule，AUC0～∞of enteric-release capsule had no significant difference，t1/2Kaextended andcmaxdecreased significantly（P＜0.05orP＜0.01）.CONCLUSION：Rosiglitazone sodium enteric-release capsules and common capsule are bioequivalente and characterized with sustained-release profile.

Rosiglitazone sodium；Enteric-release capsule；Common capsule；Pharmacokinetics；Dog；Bioequivalence

R969；R587.1

A

1001-0408（2011）17-1556-03

Δ重慶自然科學基金項目（2006BB5286）

＊碩士研究生。研究方向：藥物化學。E-mail：husixing051@163.com

#通訊作者：副教授。研究方向：藥物化學。電話：023-66729212。E-mail：huxiangnan@yahoo.com.cn

2011-01-13

2011-02-25）