頂空氣相色譜法測定洛伐他汀原料藥中的有機溶劑殘留量

姜建國，宋更申，張西如，高燕霞

（河北省藥品檢驗所，石家莊市 050011）

頂空氣相色譜法測定洛伐他汀原料藥中的有機溶劑殘留量

姜建國＊，宋更申，張西如，高燕霞

（河北省藥品檢驗所，石家莊市 050011）

目的：建立測定洛伐他汀原料藥中乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯4種有機溶劑殘留量的方法。方法：采用頂空氣相色譜法。色譜柱為DB-624石英毛細管柱，柱溫采用程序升溫，檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為280℃，進樣口溫度為160℃。結果：乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯的檢測濃度的線性范圍分別為10.0～250（r＝1.0000）、10.0～250（r＝0.9999）、10.0～250（r＝0.9999）、1.78～89μg·mL－1（r＝0.9997）；平均回收率為97.6%～99.1%（RSD＝0.9%～1.9%），定量限為0.22～5.61μg·mL－1；4批樣品中4種有機溶劑殘留量均符合《中國藥典》2005年版要求。結論：該方法操作簡便、精密度好，結果準確、可靠。

洛伐他汀；頂空氣相色譜法；有機溶劑；殘留量

洛伐他汀原料藥（Lovastatin）是微生物來源的羥甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑類降膽固醇藥物，其主要的產生菌為土曲霉、桔青霉和紅曲霉。在從發酵液中萃取洛伐他汀和重結晶時，筆者根據不同的生產工藝所涉及的、《藥品注冊的國際技術要求·質量部分》（ICH）規定應控制的有機溶劑的品種，將乙醇、丙酮、乙酸乙酯和甲苯等4種有機溶劑作為檢測對象。本文根據ICH[1]的指導原則和《中國藥典》2005年版[2]的相關規定，并參考有關文獻[3～5]，采用靜態無溶劑頂空氣相色譜法，同時測定上述4種溶劑在原料藥中的殘留量。該方法可有效避免溶劑不純導致的對測定結果的干擾，經驗證，該方法操作簡便、精密度好，結果準確、可靠。

1 儀器與試藥

6890 型氣相色譜儀、7694E型頂空進樣器（美國Agilent公司）；BP 211D型電子天平（德國Sartorius公司）。

洛伐他汀原料藥樣品（由國內4家公司提供，批號分別為091006、20080203、E1003101、091102，含量分別為 99.2%、99.4%、99.5%、99.0%）；乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）均為色譜純（美國Fisher公司）；試驗用水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為DB-624石英毛細管柱（60m×530μm×3μm），柱溫：82℃維持6.5min，以20℃·min－1的速率升至160℃，維持6min；氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度：280℃；分流進樣，分流比：1∶1；進樣口溫度：160℃；載氣：氮氣，流速：5.5mL·min－1；頂空進樣，平衡溫度：90℃，平衡時間：30min，頂空定量環體積：1mL，定量環溫度：100℃，傳輸線溫度：110℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備液。精密稱取乙醇500mg、丙酮500mg、乙酸乙酯500mg、甲苯89mg，置于同一100mL容量瓶中，加DMF溶液25mL使溶解，再用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 對照品溶液。精密量取對照品貯備液5mL，置于50mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液5mL，置于20mL頂空進樣瓶中，密封，搖勻，即得。

2.2.3 供試品。精密稱取本品約0.5g，置于15mL頂空進樣瓶中，密封，即得。

2.3 系統適用性試驗

照“2.2”項下的方法制備對照品溶液和供試品，按“2.1”項下的色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，見圖1。

圖1結果顯示，4種溶劑分離良好，理論板數均不低于5000。

2.4 線性關系

精密稱取甲苯89mg，置于100mL容量瓶中，加入DMF 25mL使溶解，再用水稀釋至刻度，搖勻。精密量取10mL，置于50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。再分別精密量取5、25、15、5、2、1mL分別置于10、100、100、100、100、100mL容量瓶中，分別用水稀釋至刻度，搖勻。

精密稱取乙醇500mg、丙酮500mg、乙酸乙酯500mg，置于同一100mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取5、3、2、1、0.5、0.2mL分別置于100mL容量瓶中，分別用水稀釋至刻度，搖勻。

圖1 氣相色譜圖A.對照品；B.供試品；1.乙醇；2.丙酮；3.乙酸乙酯；4.甲苯Fig1 GC chromatogramsA.reference substances；B.test sample；1.alcohol；2.acetone；3.ethyl acetate；4.methylbenzene

分別精密量取上述各溶液5mL，置于20mL頂空進樣瓶中，密封，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進樣分析，以峰面積（A）為縱坐標，濃度（c）為橫坐標，進行線性回歸，結果見表1。

表1 線性關系考察結果（n＝6）Tab1 Linear ranges of organic solvents（n＝6）

2.5 重復性試驗

精密稱取本品（批號：091006）約0.5g，置于15mL頂空進樣瓶中，共6份，密封，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進樣分析，檢出本品中乙醇為0.04%（RSD＝0.9%），乙酸乙酯為0.02%（RSD＝1.1%），丙酮、甲苯均未檢出。

2.6 回收率試驗

精密稱取已知各溶劑含量的樣品（批號：091006）0.5g，置于15mL頂空進樣瓶中，共9份，分別精密加入對照品貯備液0.40、0.50、0.60mL，各3份，密封，搖勻。按“2.1”項下的色譜條件進樣分析，按外標法計算。結果，乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯的平均回收率分別為98.8%、98.2%、99.1%、97.6%，RSD分別為1.6%、1.2%、0.9%、1.9%。

2.7 穩定性試驗

精密量取“2.2.2”項下的對照品溶液，于室溫下放置0、1、2、4、8、12h，分別按“2.1”項下的色譜條件進樣分析。結果，乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯在12h內測定的峰面積的RSD分別為1.1%、1.8%、1.5%、1.3%，表明本溶液在12h內穩定。

2.8 檢出限與定量限

用逐步稀釋法進行測定，以信噪比約為3時計算檢出限，以信噪比約為10時計算定量限。結果乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯的檢出限分別為1.81、1.02、0.25、0.07μg·mL－1，定量限分別為5.61、3.08、0.76、0.22μg·mL－1。

2.9 樣品中有機溶劑殘留量的測定

為了考查基質效應對待測溶劑活度的影響導致的測定結果的差異，本文將無溶劑法測定結果與以水為溶劑的測定結果進行了比較，結果如下。

2.9.1 無溶劑法。取4批樣品，按“2.2”項下的方法制備對照品溶液和供試品，按“2.1”項下的色譜條件進樣分析，按外標法計算4種有機溶劑的含量。

2.9.2 以水為溶劑法。取4批樣品，分別精密稱取約0.5g，置于20mL頂空進樣瓶中，精密加水5mL，使均勻分散，密封，即得。按“2.1”項下的色譜條件進樣分析，按外標法計算4種有機溶劑的含量。

2種方法的測定結果見表2。表2結果表明，2種方法測定結果基本一致。

表2 2種方法的測定結果比較Tab2 Comparison of results determined by two kinds of methods

3 討論

目前殘留溶劑測定大多數是針對1個企業的產品而建立的方法，由于不同的生產企業采用的生產工藝可能不同，從而使用的有機溶劑的種類也可能有所不同，導致同一品種不同來源的樣品中殘留溶劑的種類可能不盡相同。另外有的生產企業出于保密的目的或其他原因，提供的生產工藝或許不完整，這就使殘留溶劑測定具有很大的不確定性，因此應該廣泛收集樣品取得不同的生產工藝信息，根據試驗建立相應的多種溶劑的檢測方法。此次試驗涉及的樣品覆蓋了國內幾乎所有的洛伐他汀生產企業，而不是針對某一個生產企業的樣品，故而所建立的方法具有普遍性。

ICH[1]和《中國藥典》2005年版[2]都規定，甲苯屬第2類在藥品中應限制殘留量的溶劑，限度為0.089%；乙醇、丙酮、乙酸乙酯均屬第3類低毒性殘留溶劑，應控制其殘留量，限度均為0.5%。結果本試驗4批樣品殘留溶劑的測定結果均符合規定。

本方法4種有機溶劑的定量限為0.22～5.61μg·mL－1，靈敏度完全可以滿足洛伐他汀中有機溶劑殘留量測定的需要。

有機溶劑殘留量測定中，水是較理想的溶解介質，應盡量采用；對于水不溶性待測有機溶劑，在制備對照品溶液時，可先用高沸點、無干擾的中極性溶劑溶解后再溶于水。本試驗將待測溶劑先溶于DMF后，再用水稀釋，結果表明DMF不干擾測定。

本文采用無溶劑法測定洛伐他汀中的殘留溶劑，由于加入頂空瓶中的對照品溶液的體積為5mL，采用20mL頂空瓶，而供試品未加溶劑，為了使頂部氣體的濃度保持一致，采用15mL頂空瓶。經無溶劑法與以水為溶劑方法測定結果的比較，兩者測定結果基本一致，表明基質效應對待測溶劑活度的影響導致的測定結果的差異在可接受的范圍之內，說明該方法可行。

[1] 周海鈞.藥品注冊的國際技術要求·質量部分[M].北京：人民衛生出版社，2001：343.

[2] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學工業出版社，2005：54-57.

[3] 宋更申，姜建國，劉紅莉，等.頂空氣相色譜法測定美羅培南中有機溶劑的殘留量[J].中國藥房，2010，21（5）：447.

[4] 宋更申，姜建國，張西如，等.毛細管氣相色譜法測定羅庫溴銨中8種有機溶劑殘留量[J].中國藥學雜志，2010，45（7）：93.

[5] 宋更申，周 麗，孫玉靜.頂空氣相色譜法測定羥乙基淀粉中的殘留溶劑[J].中國藥業，2010，19（8）：31.

Determination of Residual Organic Solvents in Lovastatin by Headspace Gas Chromatography

JIANG Jian-guo，SONG Geng-shen，ZHANG Xi-ru，GAO Yan-xia
（Hebei Institute for Drug Control，Shijiazhuang 050011，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of residual organic solvents in lovastatin，i.e.alcohol，acetone，ethyl acetate and methylbenzene.METHODS：Headspace GC was adopted.The determination were separated on DB-624capillary column using temperature programming.FID was used as detector with a temperature of 280℃，and the inlet temperature was 160℃.RESULTS：The linear ranges of alcohol，acetone，ethyl acetate and methylbenzene were 10.0~250μg·mL－1（r＝1.0000），10.0～250μg·mL－1（r＝0.9999），10.0～250μg·mL－1（r＝0.9999），1.78～89μg·mL－1（r＝0.9997），respectively.The average recoveries ranged from 97.6%to 99.1%with RSD of 0.9%～1.9%.The determination limits were 0.22～5.61μg·mL－1.The residual levels for the 4organic solvents in 4batches of samples were all up to the standard stipulated inChinese Pharmacopeia（2005edition）.CONCLUSION：The method is simple，precise，accurate and reliable.

Lovastatin；Headspace gas chromatography；Organic solvents；Residual

R927.11；R972+.4

A

1001-0408（2011）17-1607-02

＊主任藥師，碩士。研究方向：藥物分析。電話：0311-85212008-8037。E-mail：JiangJG216@yahoo.com.cn

2010-07-02

2010-08-23）