HPLC法測定橘紅枇杷顆粒中柚皮苷的含量

蔡曄芬

（廣州醫學院附屬腫瘤醫院藥劑科，廣州市 510095）

HPLC法測定橘紅枇杷顆粒中柚皮苷的含量

蔡曄芬＊

（廣州醫學院附屬腫瘤醫院藥劑科，廣州市 510095）

目的：建立測定橘紅枇杷顆粒中柚皮苷含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Nucltosil C18（250mm×4.6mm，10μm），流動相為甲醇-冰醋酸-水（35∶4∶60），檢測波長為283nm，流速為1.0mL·min-1。結果：柚皮苷進樣量在0.6～1.4μg范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系（r＝0.9998）；平均回收率為97.36%，RSD＝1.37%（n＝6）。結論：本方法簡便、準確度高、重復性好，可用于測定橘紅枇杷顆粒中柚皮苷的含量。

橘紅枇杷顆粒；柚皮苷；高效液相色譜法；含量測定

橘紅枇杷顆粒是我院自主研制的止咳中藥復方制劑，處方由化橘紅、陳皮、枇杷葉、桔梗、紫蘇子、甘草共6味藥材組成。其中，化橘紅功能散寒、燥濕、利氣、消痰，用于治療風寒咳嗽、喉癢痰多[1]，為方中君藥。本試驗結合文獻報道[2～4]，采用高效液相色譜（HPLC）法測定方中化橘紅主要成分柚皮苷的含量，以為橘紅枇杷顆粒的質量控制提供試驗依據。

1 儀器與試藥

HPLC儀，包括510型高壓泵、486型檢測器、進樣閥、810型液相色譜工作站（美國Waters公司）。

柚皮苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號：110722-200309）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；橘紅枇杷顆粒（筆者自制，批號：20090601、20090617、20091201、20100416、20100423）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Nucltosil C18（250mm×4.6mm，10μm）；流動相：甲醇-冰醋酸-水（35∶4∶60）；檢測波長：283nm；柱溫：28℃；流速：1.0mL·min-1。理論板數以柚皮苷峰計算應＞2500，分離度＞3.5，拖尾因子為1.05。在此色譜條件下，柚皮苷與其他組分均能達到較好的分離。色譜見圖1。

2.2 檢測波長的確定

取對照品溶液，測定其紫外-可見吸收光譜。結果表明，對照品溶液在283nm波長處有最大吸收，故選擇283nm為檢測波長。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取柚皮苷對照品10.05mg，置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL含柚皮苷0.1mg）。

2.4 供試品溶液的制備

取本品10g，研碎，精密稱取0.60g，加入甲醇30mL，加熱回流2h，放冷，濾過，取濾液，置50mL量瓶中，用少量的甲醇分次洗滌容器和殘渣，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續濾液作為供試品溶液，即得。

2.5 線性關系考察

分別精密量取對照品溶液6、8、10、12、14μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定峰面積。以峰面積分值（X）為橫坐標，對照品進樣量（Y）為縱坐標，制備標準曲線，得回歸方程為Y＝1.5369×105X+0.0071（r＝0.9998）。結果表明，柚皮苷進樣量在0.6～1.4μg范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.6 精密度試驗

精密吸取對照品溶液10μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，連續6次。結果，RSD＝0.38%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 重復性試驗

取同一批樣品顆粒適量，共6份，分別按“2.4”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。結果，RSD＝2.23%（n＝6），表明方法重復性良好。

2.8 穩定性試驗

取同一供試品溶液，分別于制備后0、1、2、4、8h進樣測定。結果，RSD＝1.61%（n＝5），表明供試品溶液在8h內穩定性良好。

2.9 加樣回收率試驗

準確稱定已知柚皮苷含量的樣品顆粒（批號：20090601）適量，共6份，精密加入柚皮苷對照品溶液，按“2.4”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab1 Results of recovery tests（n＝6）

2.10 樣品含量測定

取5批樣品，分別按“2.4”項下方法制成供試品溶液。精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL進樣，以外標一點法測定樣品中柚皮苷的含量。結果，柚皮苷的平均含量為0.3378mg·g-1。

3 討論

橘紅枇杷顆粒是中藥復方制劑，化學成分復雜，其他成分易對柚皮苷的含量測定帶來干擾。筆者綜合考慮了文獻以及2005年版《中國藥典》的方法，最后確定流動相為甲醇-冰醋酸-水（35∶4∶60），在柱溫28℃、流速1.0mL·min-1條件下，柚皮苷與其他成分峰可達基線分離，且峰形對稱。

本方法操作簡單、精密度高、重復性好，可作為橘紅枇杷顆粒中柚皮苷的含量測定方法，并可為其質量控制提供參考。

由于本品含有6味中藥，除柚皮苷外，其他成分也可能起到重要的藥效作用，故下一步將建立橘紅枇杷顆粒的指紋圖譜，以更好地控制成品質量。

[1] 韋 敏，楊中林，吳建民.大孔吸附樹脂法分離純化化橘紅中柚皮苷的研究[J].中成藥，2007，29（3）：352.

[2] 李玉仿，林月英.高效液相色譜法測定骨仙片中柚皮苷含量[J].中草藥，2007，38（7）：1019.

[3] 趙 清，解世權，賈天柱.高效液相色譜法測定傷痛舒片中柚皮苷的含量[J].遼寧中醫學院學報，2006，8（2）：108.

[4] 周 駿，劉美輝，金順福，等.高效液相色譜法測定枳術顆粒中柚皮苷的含量[J].中國藥房，2006，17（14）：1103.

Content Determination of Naringin in Juhong Pipa Granules by HPLC

CAI Ye-fen
（Dept.of Pharmacy，Cancer Hospital of Guangzhou Medical College，Guangzhou 510095，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of naringin in Juhong pipa granules.METHODS：HPLC method was adopted.The determination was performed on Nucltosil C18（250mm×4.6mm，10μm）column with mobile phase consisted of methanol-acetic acid-water（35∶4∶60）at the flow rate of 1.0mL·min-1.The detection wavelength was set at 283nm.RESULTS：It showed a good linear relation between naringin content and peak area at a range of 0.6～1.4μg（r＝0.9998）with an average recovery of 97.36%（RSD＝1.37%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，accurate and reproducible for the content determination of naringin in Juhong pipa granules.

Juhong pipa granules；Naringin；HPLC；Content determination

R283.627；R927.2

A

1001-0408（2011）19-1798-02

＊主管藥師。研究方向：醫院藥學。E-mail：cai-yf@163.com

2010-10-13

2011-03-29）