氣相色譜法測定鹽酸吉西他濱中的5種殘留溶劑

王崇益 陳建剛 金 華 江蘇正大清江制藥有限公司,江蘇省淮安市 300; 江蘇省淮安藥品檢驗所

鹽酸吉西他濱(gemcitabine hydrochloride)化學名2-脫氧-2,2-鹽酸二氟脫氧胞苷(β-異構體),是一種阿糖胞苷類似物,屬于新型抗嘧啶核苷酸代謝化療藥物,屬細胞周期特異性抗代謝類藥物,主要作用于DNA合成期的腫瘤細胞,即S期細胞。在一定條件下,可以阻止G1期向S期的進展;具有抗瘤譜廣、作用機制獨特、毒性反應低、與其他化療藥物無交叉耐藥且毒性反應無疊加等特點。國家藥品標準[1]規定檢查二氯甲烷、氯仿、吡啶、甲苯、正己烷的殘留量,曾有資料報道[2]對丙酮、二氯甲烷、甲苯進行控制。而目前鹽酸吉西他濱合成過程中使用了一定量的甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯等有機溶媒,中國藥典2005年版[3]對上述溶劑均規定了殘留限度,筆者參考標準要求,采用頂空毛細管氣相色譜方法,建立對鹽酸吉西他濱中5種殘留溶劑的測定方法,結果準確、靈敏,操作簡便。

1 儀器與試藥

Clarus500GC型氣相色譜儀(檢測器FID)(Perkins Elmer公司生產),Turbomatrix40型頂空進樣器(Perkins Elmer公司生產);甲醇、乙醇、異丙醇 、二氯甲烷、二甲亞砜均為色譜純,乙酸乙酯為分析純;鹽酸吉西他濱樣品(江蘇正大清江制藥本公司生產,批號為 080301、080302、080401,紅外圖譜經與USP鹽酸吉西他濱標準品圖譜比對一致)。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品貯備溶液的制備。分別精密稱取甲醇約3g、乙醇約3g、異丙醇約 1g、二氯甲烷 0.2g、乙酸乙酯約 1g,置裝有約80ml二甲亞砜的100ml量瓶中混勻,加二甲亞砜稀釋至刻度,搖勻備用。

2.1.2 樣品溶液的制備。精密稱取鹽酸吉西他濱樣品約0.5g,置頂空瓶中,精密加入二甲亞砜5ml,溶解,搖勻備用。

2.2 色譜條件與系統適用性 色譜柱:DB-624石英毛細管柱(30m×0.45mm,2.55μ m),柱溫 40℃保持2min,然后以2℃/min升溫至 50℃,再以 20℃/min升溫至 200℃,保持1.5min;進樣口溫度140℃,檢測器溫度 260℃;載氣為氮氣,流速為5.5ml/min,分流為22ml/min;頂空平衡時間60min,進樣體積1ml;加熱爐溫度 90℃;取樣針溫度100℃;傳輸線溫度100℃。精密量取各對照品貯備溶液1ml,置入100ml量瓶中,用二甲亞砜稀釋至刻度,搖勻;精密量取 5ml置頂空瓶中,密封。在上述色譜條件下進樣測定,結果顯示5種有機溶劑的理論板數均不低于5 000,各組分與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。

2.3 線性關系考察 精密量取對照品溶液0.05ml、0.1ml、0.25ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml分別置入 100ml量瓶中,加入二甲亞砜稀釋至刻度,搖勻。分別量取上述溶液5ml,置頂空瓶中,密封,照2.2項中的方法進樣測定。以對照品濃度C為橫坐標,以峰面積A為縱坐標,進行線性回歸。線性回歸方程見表1。

表1 5種有機溶劑的線性回歸方程

2.4 檢測限及定量限的測定 分別精密量取甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯適量,逐級稀釋,按 2.2項中的方法進行測定。以基線噪音的3倍計算,甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯的檢測限分別為1.92,0.316,0.542,0.418,1.06μ g?ml-1;以基線噪音的10倍計算,定量限分別為 6.336,1.04,1.789,1.38,3.18μ g?ml-1。

2.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液1.0ml,置入100ml量瓶中,加二甲亞砜稀釋至刻度,混勻,制成100%規格的溶液作為對照溶液。精取5.0ml注入頂空瓶中,密封。按2.2項中方法進行測定,計算甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯的RSD范圍分別為 0.4%、0.4%、0.3%、0.8%(n=6)。

2.6 回收率試驗 分別取對照品溶液適量,加二甲亞砜分別制成低(80%)、中(100%)、高(120%)3種濃度的對照品溶液;取已知溶劑殘留的樣品約0.5g共6份,精密稱定,分別置頂空瓶中,精密加入上述 6份對照品溶液各5ml,密封,進樣測定。結果甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯3種濃度樣品的平均回收率分別為99.0%、104.4%、103.4%、105.0%、103.1%;RSD 分別 為2.9%、2.1%、1.7%、4.3%、1.9%。

2.7 樣品測定 取3批原料按照2.2項中的方法制備供試品溶液,進樣測定。計算樣品中各有機溶劑殘留量,結果甲醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯均未檢出,乙醇的含量分別為 305.3μ g/g 、260.8μ g/g 、265.2μ g/g;RSD 分 別為 4.3%、1.8%、1.1%,符合藥典要求。

3 討論

3.1 溶劑選擇 以水為溶劑時,乙酸乙酯的回收率偏低,乙醇偏高,可能是乙酸乙酯在頂空瓶內加熱水解的原因。用二甲亞砜作為溶劑后避免了乙酸乙酯的水解,因而得到了較好的回收率。

3.2 頂空進樣條件 提高平衡溫度有利于殘留溶劑的揮發,但高溫會引起樣品的分解,干擾檢測的進行。平衡時間的選擇,在嘗試 15、30、45、60、75、90min,顯示 60min 后,各溶劑面積基本不變,故選擇60min。進樣體積的選擇,嘗試進樣 0.2、0.5、1.0、1.5ml、2.0ml(蒸汽)、0.2、0.5ml體積進樣時尤其是二氯甲烷相應值低,不利于樣品檢測。進樣體積1.5ml以上時會導致樣品峰加寬,不利于組分的分離。因為二甲亞砜在常壓的情況下沸點為189℃,故要對取樣針和傳輸線進行溫度設置,考慮到加熱平衡的爐溫為90℃,在此基礎上增加到100℃,用以防止二甲亞砜等揮發性成分在取樣針和傳輸線上的冷凝。

1 國家藥典委員會,編.國家藥品標準-新藥轉正標準(第 47冊)〔M〕.北京:人民衛生出版社,2005:50.

2 楊先啟,茅海瓊.頂空氣相色譜法測定鹽酸吉西他濱中的殘留溶劑〔J〕.中國藥師,2009,(5):600-601.

3 國家藥典委員會,編.中華人民共和國藥典(二部)〔S〕.北京:化學工業出版社,2005:附錄56.