一點(diǎn)紅提取物的一般藥理作用觀察

張玉軍， 鐘正賢， 陳敬民， 李開(kāi)雙， 李友娣， 李翠紅

(1.廣西骨傷醫(yī)院，廣西 南寧530012;2.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧530022)

一點(diǎn)紅，別名羊蹄草、葉下紅等，系菊科植物一點(diǎn)紅Emilia sonchifolia(L)DC.的全草，分布于我國(guó)華南、華中和西南等地。性涼，味微苦，具有清熱解毒，消炎，利尿，散瘀消腫等功效。臨床上常用于治療上呼吸道感染、口腔潰瘍、肺炎、泌尿道感染、乳腺炎、癤腫瘡瘍、皮膚濕疹等癥。化學(xué)成分含生物堿、黃酮類(lèi)、三萜類(lèi)、酚類(lèi)等。藥理研究證實(shí)一點(diǎn)紅提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、傷寒桿菌等有抑制作用［1］，動(dòng)物試驗(yàn)顯示一點(diǎn)紅提取物具有抗炎、鎮(zhèn)痛、保肝、免疫增強(qiáng)作用［2-3］。一點(diǎn)紅藥材現(xiàn)已作為婦科用中成藥花紅片的主要原料，主治婦科炎癥。為了進(jìn)一步探討其主要藥效學(xué)以外更為廣泛的藥理作用及應(yīng)用安全性，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行一般藥理學(xué)研究，觀察其對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的影響。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1 藥物制備 (1)一點(diǎn)紅水提物制備:全草干燥后切碎，粉碎成粗粉，加8倍量水，浸泡后加熱煮沸提取，煮提兩次，合并濾液。濾液水浴濃縮至稠膏狀，得水提取物，得率為16.67%，1 g稠膏含2.1 g生藥，批號(hào):20070305。(2)一點(diǎn)紅醇提物制備:全草干燥后切碎，粉碎成粗粉，置燒瓶中，加8倍量95%乙醇，浸泡后加熱回流提取，回流提取兩次，合并濾液。濾液減壓回收乙醇，揮盡乙醇并水浴濃縮至稠膏狀，得醇提取物，得率為6.65%。1 g稠膏含6.8 g生藥，批號(hào):20070308。一點(diǎn)紅藥材的水提物和醇提取物，由廣西中醫(yī)藥研究院中藥化學(xué)研究所提供。空白對(duì)照及一點(diǎn)紅水提物、醇提物均加入數(shù)滴吐溫-80研磨后用1%CMC溶液配制成所需濃度，灌胃給藥體積均為20 mL/kg。

1.2 劑量與分組 給藥組分別以一點(diǎn)紅水提物5.0、2.5 g藥材/kg，一點(diǎn)紅醇提物6.4、3.2 g藥材/kg劑量給藥，小鼠灌胃(ig)20 mL/kg，大鼠10 mL/kg，分別相當(dāng)于推薦臨床劑量的10～20倍。

1.3 動(dòng)物 昆明種小鼠，體質(zhì)量(20±2)g;Wistar種大鼠，體質(zhì)量(200±20)g，雌雄各半，均由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，SPF級(jí)，合格證號(hào):SCXK桂2003—0003。

1.4 儀器 BL-310生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司出品。

2 方法

2.1 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的影響 采用小鼠自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)方法［5］。取小鼠50只，均分5組，每組10只。將小鼠分別單個(gè)投入活動(dòng)箱(31 cm×19 cm×18 cm)中，適應(yīng)5 min后，記錄給藥前2 min內(nèi)小鼠走動(dòng)時(shí)間及雙前肢向上抬舉次數(shù)為指標(biāo)，先測(cè)定各組小鼠給藥前的活動(dòng)正常值，隨后分別灌胃(ig)給一點(diǎn)紅水提物5.0、2.5 g藥材/kg，一點(diǎn)紅醇提物6.4、3.2 g藥材/kg，對(duì)照組給等體積水。觀察給藥后小鼠一般行為、姿勢(shì)、步態(tài)、有無(wú)流涎、肌顫等變化，并在給藥后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 h測(cè)定2 min內(nèi)小鼠自主活動(dòng)情況，給藥組作藥前藥后配對(duì)比較，并與對(duì)照組作組間比較T檢驗(yàn)。

2.2 對(duì)呼吸及心血管系統(tǒng)的影響［6］取大鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分成5組，每組10只，動(dòng)物以40 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，頸左總動(dòng)脈插管接壓力換能器，于大鼠胸部劍突處接張力換能器，在大鼠四肢接心電圖Ⅱ?qū)?lián)接頭，各換能器及心電導(dǎo)聯(lián)與BL-310生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)連接，以記錄動(dòng)物血壓、呼吸及心電圖。動(dòng)物各記錄指標(biāo)穩(wěn)定20 min后開(kāi)始試驗(yàn)，分別記錄給藥前、給藥后 10 min、0.5 h、1 h、2 h、3 h 的大鼠血壓、呼吸和心電圖情況。各組分別統(tǒng)計(jì)各時(shí)間的均數(shù)、方差，與給藥前進(jìn)行組內(nèi)T檢驗(yàn)和與對(duì)照組進(jìn)行組間T檢驗(yàn)，經(jīng)檢測(cè)其顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響 結(jié)果見(jiàn)表1，表2。結(jié)果表明，經(jīng)用藥前后比較并與對(duì)照組比較，一點(diǎn)紅水提物對(duì)小鼠行為、姿勢(shì)、步態(tài)等異常，無(wú)流涎、肌顫等變化，對(duì)小鼠神經(jīng)系統(tǒng)自主活動(dòng)無(wú)明顯影響;而醇提物2個(gè)劑量組則在0.5～2.0 h均出現(xiàn)顯著減少小鼠自主走動(dòng)時(shí)間和抬前腳次數(shù)，具有一定鎮(zhèn)靜作用，其他時(shí)間表現(xiàn)同水提物，對(duì)小鼠自主活動(dòng)無(wú)明顯影響。

表1 對(duì)小鼠的自主活動(dòng)(小鼠抬前腳次數(shù))的影響(± s，n=10)

表1 對(duì)小鼠的自主活動(dòng)(小鼠抬前腳次數(shù))的影響(± s，n=10)

注:與給藥前比較，*P＜0.05;與對(duì)照組比較，#P＜0.05。

組別 劑量/(g/kg) 給藥前 給藥后不同時(shí)間小鼠抬前腳次數(shù)/2 min 0.5 h 1 h 2 h 3 h 4 h對(duì)照組 13.9±2.6 10.7±1.7 12.7±1.4 11.9±1.8 13.7±1.7 12.6±1.5一點(diǎn)紅水提 2.5 11.4±3.8 9.0±3.2 10.0±3.0 11.1±3.3 12.0±3.4 12.0±3.5 5.0 13.1±3.7 10.0±3.5 12.0±2.5 11.0±3.3 12.0±3.1 13.0±3.2一點(diǎn)紅醇提 3.2 12.3±3.8 7.2±3.7*# 8.4±3.5*# 8.0±3.3*# 12.6±3.5 10.4±3.7 6.4 11.9±2.6 7.4±3.9*# 8.2±4.0*# 8.6±4.2*#10.4±3.1 11.4±2.0

表2 對(duì)小鼠的自主活動(dòng)(小鼠走動(dòng)時(shí)間)的影響( ± s，n=10)

表2 對(duì)小鼠的自主活動(dòng)(小鼠走動(dòng)時(shí)間)的影響( ± s，n=10)

注:與給藥前比較，*P＜0.05，＊＊P ＜0.01;與對(duì)照組比較，#P ＜0.05。

組別 劑量/(g/kg) 給藥前 給藥后不同時(shí)間小鼠走動(dòng)時(shí)間/2 min 0.5 h 1 h 2 h 3 h 4 h對(duì)照組 33.4±4.5 29.1±5.1 32.1±3.8 30.1±4.2 32.1±5.1 33.1±4.0一點(diǎn)紅水提 2.5 33.1±4.4 32.3±3.3 32.4±4.3 29.6±3.7 28.6±5.2 31.6±3.3 5.0 30.6±5.8 30.2±4.9 31.2±4.9 29.8±4.5 30.0±4.5 29.7±4.3一點(diǎn)紅醇提 3.2 30.5±5.0 19.0±5.8*# 20.0±4.8*# 19.0±5.8*# 26.0±5.8 27.0±5.5 6.4 29.1±6.0 16.5±6.5＊＊# 16.5±5.6＊＊# 16.5±6.4＊＊#27.5±7.6 28.5±5.3

3.2 對(duì)大鼠心血管系統(tǒng)的作用 大鼠給藥前后不同時(shí)間的心率、收縮壓、舒張壓和心電圖之T波進(jìn)行測(cè)定記錄。結(jié)果見(jiàn)表3～6。結(jié)果表明，一點(diǎn)紅水提物和醇提取物分別灌胃給予大鼠后，給藥前后的自身比較時(shí)都未見(jiàn)在心率、心電圖之T波、收縮壓和舒張壓方面有明顯差異。與對(duì)照組比較時(shí)，水提物和醇提物對(duì)心率、血壓均無(wú)明顯影響;但水提物大劑量給藥前，醇提物大小劑量組給藥前后多個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有一定降低，可能是動(dòng)物本身的個(gè)體差異所致。

3.3 對(duì)大鼠呼吸系統(tǒng)的影響 一點(diǎn)紅水提物和醇提取物給予大鼠前后，各組對(duì)大鼠呼吸頻率的作用見(jiàn)表7。從表中可見(jiàn)，在實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)，一點(diǎn)紅水、醇提取物經(jīng)給藥前后自身對(duì)照，未見(jiàn)明顯差異。與對(duì)照組的組間比較，一點(diǎn)紅水提物大劑量給藥前、2 h和3 h，醇提取物給藥前和給藥后10 min時(shí)對(duì)呼吸頻率有減少現(xiàn)象，說(shuō)明在這些時(shí)間點(diǎn)有輕度抑制作用。

表3 對(duì)大鼠心率的影響( ± s，n=10)

表3 對(duì)大鼠心率的影響( ± s，n=10)

注:與給藥前比較，P＞0.05;與對(duì)照組比較，#P＜0.05。

組別 劑量/(g/kg) 給藥前 給藥后心率變化值/(次/min)10 min 0.5 h 1 h 2 h 3 h對(duì)照組453±38 444±39 480±52 459±23 469±29 468±30一點(diǎn)紅水提 2.5 450±20 449±37 447±29 422±59 453±65 444±60 5.0 447±43 460±16 430±36 435±18 434±44 450±60一點(diǎn)紅醇提 3.2 480±25 471±21 466±30 464±41 461±41 469±38 6.4 434±53 443±51 434±55 429±34 397±76 383±84

表4 對(duì)大鼠心電圖T波的影響( ± s，n=10)

表4 對(duì)大鼠心電圖T波的影響( ± s，n=10)

注:與給藥前比較，*P＜0.05;與對(duì)照組比較，#P＜0.05。

組別 劑量/(g/kg) 給藥前 給藥后不同時(shí)間T波值(uv)10 min 0.5 h 1 h 2 h 3 h對(duì)照組 144±61 144±61 160±36* 160±61*152±18 156±18一點(diǎn)紅水提 2.5 136±22 144±17 136±22 144±18 144±18 144±18 5.0 160±40# 152±17 160±28 152±33 152±66 160±75一點(diǎn)紅醇提 3.2 120±57# 128±17# 128±18# 112±18# 128±18# 120±28#6.4 120±57# 120±28# 128±18# 128±44# 136±61* 152±52*

表5 對(duì)大鼠收縮壓的影響(± s，n=10)

表5 對(duì)大鼠收縮壓的影響(± s，n=10)

注:與給藥前比較，P＞0.05;與對(duì)照組比較，#P＜0.05。

組別 劑量/(g/kg) 給藥前給藥后收縮壓/kPa 10 min 0.5 h 1 h 2 h 3 h對(duì)照組 15.2±2.1 14.9±0.6 14.5±2.2 14.2±2.2 13.9±2.1 14.4±2.2一點(diǎn)紅水提 2.5 14.2±1.4 14.8±0.3 13.3±2.0 14.0±0.9 13.5±1.4 13.9±1.1 5.0 16.1±2.4 15.8±0.6 15.4±1.1 16.0±2.6# 16.0±1.8# 16.8±2.1#一點(diǎn)紅醇提 3.2 15.2±1.2 14.9±1.2 13.6±2.0 13.6±14 13.6±0.9 13.8±9.0 6.4 14.1±1.2 13.3±3.3 13.3±1.4 13.6±1.2 13.3±1.9 13.6±2.0

表6 對(duì)大鼠舒張壓的影響(± s，n=10)

表6 對(duì)大鼠舒張壓的影響(± s，n=10)

注:與給藥前比較，P＞0.05;與對(duì)照組比較，#P＜0.05。

組別 劑量/(g/kg) 給藥前給藥后舒張壓/kPa 10 min 0.5 h 1 h 2 h 3 h對(duì)照組 11.6±1.8 11.2±1.1 10.8±1.7 10.6±1.7 11.6±1.7 10.6±1.7一點(diǎn)紅水提 2.5 10.9±1.3 10.9±1.2 10.8±0.4 10.9±0.8 10.8±1.8 10.4±0.8 5.0 11.8±1.1 11.7±0.8 11.6±1.1 11.8±2.2 11.0±1.6 11.3±1.8一點(diǎn)紅醇提 3.2 10.8±1.6 10.5±0.9 9.9±1.3 9.8±0.9 10.0±0.8 10.1±1.1 6.4 10.4±1.6 9.1±2.9 9.9±1.2 9.6±1.1 9.6±2.29.9±2.4

表7 對(duì)大鼠呼吸頻率的影響( ± s，n=10)

表7 對(duì)大鼠呼吸頻率的影響( ± s，n=10)

注:與給藥前比較，P＞0.05;與對(duì)照組比較，#P＜0.05。

組別 劑量/(g/kg) 給藥前 給藥后呼吸頻率/(次/min)10 min 0.5 h 1 h 2 h 3 h對(duì)照組81±19 80±7 80±4 86±12 92±28 84±21一點(diǎn)紅水提 2.5 86±15 80±15 75±19 78±22 80±22 78±21 5.0 71±10# 76±13 77±15 81±27 79±6# 78±10#一點(diǎn)紅醇提 3.2 73±14# 83±19 75±14 88±18 85±11 89±25 6.4 75±12 73±3#83±8 83±10 88±8 87±17

4 小結(jié)與討論

一般藥理學(xué)研究是指觀察主要藥效學(xué)以外的藥理作用，觀察神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)三個(gè)方面，是新藥研究的重要內(nèi)容，為新藥用于臨床提供安全性依據(jù)［7］。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，一點(diǎn)紅水提物在藥效學(xué)劑量對(duì)小鼠自主活動(dòng)能力無(wú)明顯影響，對(duì)動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)無(wú)明顯影響;一點(diǎn)紅醇提物對(duì)小鼠自主活動(dòng)有輕度抑制作用，具有一定鎮(zhèn)靜作用。一點(diǎn)紅水提物和醇提物對(duì)呼吸頻率在給藥前后比較及與對(duì)照組比較，差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)，與對(duì)照組作組間比較時(shí)，一點(diǎn)紅水提物大劑量給藥前、2 h和3 h，醇提取物給藥前和給藥后10 min時(shí)對(duì)呼吸頻率有減少現(xiàn)象，說(shuō)明在這些時(shí)間點(diǎn)有輕度抑制作用。一點(diǎn)紅水提物和醇提物對(duì)大鼠各用藥組心率、平均動(dòng)脈收縮壓和舒張壓給藥前后比較差異均無(wú)顯著(P＞0.05)。與對(duì)照組比較時(shí)，水提物和醇提物對(duì)心率、血壓均無(wú)明顯影響;但水提物大劑量給藥前，醇提物大小劑量組給藥前后多個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)心電圖T波均有一定降低，可能是動(dòng)物本身的個(gè)體差異所致。

綜上所述，在正常藥效劑量范圍內(nèi)，一點(diǎn)紅水提物對(duì)呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)均無(wú)明顯影響，但醇提物有一定鎮(zhèn)靜作用。一點(diǎn)紅醇提物對(duì)心電圖T波和呼吸頻率有輕度抑制作用，提示在應(yīng)用該藥材時(shí)需注意。本實(shí)驗(yàn)為開(kāi)發(fā)一點(diǎn)紅新藥提供了一定的一般藥理學(xué)依據(jù)。

［1］國(guó)家中醫(yī)藥管理局.中華本草［M］.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999:6863.

［2］鐘正賢，周桂芬，陳學(xué)芬，等.一點(diǎn)紅提取物藥理作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］. 云南中醫(yī)中藥雜志，2006，27(4):36.

［3］鐘正賢，李開(kāi)雙，李翠紅，等.一點(diǎn)紅藥理作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］. 中國(guó)中醫(yī)藥科技，2007，14(4):267.

［4］陳 奇主編.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:669.

［5］朱 彬，李鳳新，郜 欣，等.虎杖總蒽醌提取物一般藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究［J］.東北師大學(xué)報(bào)自然科學(xué)版，2009，41(2):160.

［6］李 華，蒯正根，鄺荔香.藥用輔料殼聚糖的一般藥理學(xué)研究［J］.安徽醫(yī)藥，2004，8(2):95.

［7］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政局.中藥新藥研究指南［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1994:59.