一氧化碳中毒遲發記憶障礙小鼠血小板膜糖蛋白CD 61的研究

彭道勇 王蘇平 李迪 朱曉鈺

(大連市中心醫院神經內科 遼寧大連 116000)

一氧化碳中毒遲發記憶障礙小鼠血小板膜糖蛋白CD 61的研究

彭道勇 王蘇平 李迪 朱曉鈺

(大連市中心醫院神經內科 遼寧大連 116000)

目的 通過對一氧化碳中毒遲發記憶障礙小鼠血小板膜糖蛋白CD61的研究,探索一氧化碳中毒遲發腦病的發病機制。方法篩選出急性中毒遲發記憶障礙小鼠,測其血CD61表達情況。結果 急性一氧化碳中毒小鼠中有10%出現遲發記憶障礙,其血CD61的表達量明顯高于對照組。結論 血小板活化和血栓形成可能是遲發腦病的發病機制之一。

氧化碳中毒 遲發記憶障礙 CD61

一氧化碳(Carbon monoxide,CO)是造成中毒性死亡最常見的窒息性氣體,部分患者經過數日或數周的假愈期后,還會發生遲發性腦病(Delayed neuropsychologic sequelae,DNS),臨床表現為一組以急性癡呆為主的精神神經功能紊亂,其發病機制不清。本研究檢測CO中毒遲發記憶障礙的小鼠血CD61的表達。

1 材料與方法

1.1 材料及試劑

選用健康昆明小鼠80只,體重18～20g,鼠齡2～3個月,每籠5只溫室飼養。99.9%CO氣;PE標記的小鼠CD61抗體及同型對照,流式細胞儀

實驗動物分組及模型制備：(1)將小鼠飼養1周以適應環境后行光電刺激小鼠條件反射跳臺適應性訓練,讓小鼠學會跳上安全臺。(2)染毒。采用按體重(1.5m L/10g)每間隔6h連續8次注射99.9%的CO氣體致小鼠中毒進行染毒。

1.2 遲發記憶障礙小鼠的篩選

于小鼠中毒后第1、3、5、7、11、15、20、25、30天,分別利用光電刺激小鼠條件反射跳臺儀記錄小鼠跳下安全臺的跳臺潛伏期,作為評價小鼠的記憶保持鞏固能力的指標。篩選出遲發記憶障礙小鼠。

1.3 標本制備

從小鼠眶動脈和眶靜脈采血0.5m L(3.8%枸櫞酸鈉1∶9抗凝),按步驟制備標本:100uL全血+10uL對照試劑,100uL全血+10uL實驗試劑避光孵育15m in,自動定容到1m L,上機待測。

1.4 小鼠血血小板CD61測定

用流式細胞儀檢測標本,每管收集10000個CD61陽性血小板,記錄CD61的強度。

1.5 統計學分析

2 結果

2.1 CO中毒小鼠記憶保持能力的改變

小鼠腹腔注射CO中毒后第1天記憶保持能力明顯受損,第3天基本恢復正常,在第5、7、11天的測試中各有2只、第15、20天各有1只小鼠再次出現記憶保持能力受損。將再次出現記憶保持能力受損的8只小鼠(標記為A組);在未再次出現記憶保持能力受損的觀察組中隨機抽取8只小鼠(標記為B組)。

表1 2組小鼠記憶保持能力、COHb、血CD 61表達(±s)

表1 2組小鼠記憶保持能力、COHb、血CD 61表達(±s)

注:與B組相比較(1)P<0.05;(2)P<0.01

與B組相比較,A組小鼠記憶保持能力明顯受損(P<0.01); COHb無明顯變化。

2.2 流式細胞儀測小鼠血CD61結果

與B組相比較,A組血CD61增加(P<0.05),見表1。

3 討論

關于CO中毒及其遲發性腦病發病機制的研究,缺血缺氧機制曾被許多學者所推崇[1]。但單純的缺血缺氧機制無法解釋一些現象,特別是神經、精神方面的許多癥狀都是在COHb水平完全恢復正常之后才出現,近年來關于缺血性腦卒中后白細胞浸潤所致的炎癥反應在缺血性腦損傷的發生、發展中所起的重要作用已被研究所證實[2]。本實驗通過建立動物模型,對CO中毒后遲發記憶礙小鼠血CD61的表達進行了研究。

外周血CD61即GPⅡb/Ⅲa的復合物,是細胞黏附分子家族中的整合素分子,廣泛參與細胞與細胞、細胞與細胞外基質之間的黏附和引發細胞內的代謝變化,并在血栓形成和炎癥反應中起重要作用。正常人的血小板基本處于靜息狀態,而在血栓前狀態、血栓性疾病過程中,受各種因素的影響,激活而成為活化血小板。一旦不可逆的活化發生,血小板和纖維蛋白原聚集成團,將引起動脈血栓形成,造成血管閉塞。CD61可與CD41形成復合體,是多種因素血小板聚集、血栓形成的最終通道[3],可直接反映血小板的活化狀態。

本實驗觀察到CO中毒后遲發記憶障礙小鼠外周血CD61表達顯著增高,說明CO中毒后,血小板活化及血栓形成,可能是出現CO中毒遲發腦病的病理原因之一。提示高壓氧處理配合改善腦循環、降低纖維蛋白原及抗血小板聚集治療有可能對CO中毒遲發腦病產生更好的療效。

[1]Kwon OY,Chung SP,Ha YR.Delayed postanoxic encephalopathy after carbon m onoxide poisoning[J].Emerg M ed J,2004,21(2): 250～251.

[2]張海英,劉郁,趙敏.一氧化碳中毒大鼠腦內腫瘤壞死因子、白介素-10的時程變化[J].中華急診醫學雜志,2002,11(4): 227～228.

[3]李玉峰,王士雯,周榮斌,等.缺血性心力衰竭患者功能狀態的研究[J].中國循環雜志,2001,16:259.

R595.1

A

1674-0742(2011)05(a)-0020-01

2010-11-22