血清胱抑素C在腎損傷中研究及與血肌酐尿素氮關(guān)系的分析

張立軍

腎損傷疾病是臨床上一種常見的疾病，主要表現(xiàn)雙腎排泄過(guò)濾機(jī)體廢物能力的極大降低。早診斷、早治療，可逆轉(zhuǎn)損傷的腎功能，阻止腎臟疾病惡化。目前血清胱抑素C（cystatin C）檢測(cè)是近幾年發(fā)展起來(lái)的腎臟疾病早期診斷的新檢測(cè)項(xiàng)目，它是一種低分子量蛋白質(zhì)，由體內(nèi)有核細(xì)胞產(chǎn)生，來(lái)源恒定。作為一種血漿內(nèi)源性成分對(duì)此我們采用顆粒透射比濁法測(cè)定血清cystatin C的濃度，探討其在腎病中的變化情況，并同血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）進(jìn)行比較。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 2010年1～6月6338例患者血清標(biāo)本來(lái)自我院門診及住院患者共同檢測(cè)cy statin、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN），其中血清胱抑素C（cy statin C）≥1.55（m g/L）共560例，男性328例，女性232例。年齡94～60歲368例，30～59歲163例，15～29歲23例，0～14歲6例。cy statin C正常參考范圍0.50～1.55mg/L，血清肌酐（Scr）正常參考范圍44～133μmol/L、尿素氮（BUN）正常參考范圍2.4～7.5m ol/L。各項(xiàng)正常參考范圍是依據(jù)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》，結(jié)合本院實(shí)際情況做適當(dāng)修改得出。

1.2 儀器 cystatin C、Scr、BUN濃度測(cè)定采用貝克曼公司生產(chǎn)的LX 20全自動(dòng)生化分析儀。

1.3 試劑和方法cystatin C濃度測(cè)定試劑是由利德曼公司提供，采用顆粒增強(qiáng)透射比濁法測(cè)定。患者在采血后3h內(nèi)分離血清并進(jìn)行測(cè)定。Scr和BUN采用Jaffe速率法和尿素酶法進(jìn)行常規(guī)測(cè)定，試劑由貝克曼公司公司提供。6338例cystatin C、Scr、BUN的測(cè)定數(shù)據(jù)均來(lái)自我院2009.06.01～2010.01.01門診及住院患者。

2 結(jié)果

560例cystatin C（cysc）≥1.55m g/L的患者cystatin C、BUN、Scr性別年齡構(gòu)成比比較。cystatin C的值在≥1.55m g/L時(shí)為異常，BU N的值在≥7.5m o l/L為異常，Sc r的值在≥133μmol/L時(shí)為異常，各組的異常檢出率見表1。

560例cy statin C（cy sc）≥1.55m g/L的患者各年齡階段cystatin C、Scr、BUN均值結(jié)果比較。cystatin C的值在≥1.55 m g/L時(shí)為異常，BUN的值在≥7.5m o l/L為異常，Scr的值在≥133μmol/L時(shí)為異常，各年齡段均值見表2。

從560例標(biāo)本中選出cystatin C（cysc）、Scr、BUN數(shù)值最高30、60、90、120、150、180例患者，并計(jì)算cystatin C、BUN、Scr均值與BUN、Scr對(duì)應(yīng)cystatin C（cysc）均值，分析cystatin C、Scr、BUN的相互關(guān)系，見表3。

3 討論

在1981年檢測(cè)了人胱氨酸蛋白酶抑制劑C（cy statinC）的氨基酸系列，它沒(méi)有顯示與已知任何超家族蛋白系列的同源性。直到兩年后研究者檢測(cè)了雞胱氨酸蛋白酶抑制劑的結(jié)構(gòu)，并發(fā)現(xiàn)兩種蛋白44％的氨基系列相同，才確定胱氨酸蛋白酶抑制劑C的功能—半胱氨酸蛋白酶的抑制劑。又經(jīng)過(guò)二十多年的研究，人胱氨酸蛋白酶抑制劑家族目前已有明確11種蛋白組成。它們是胱氨酸蛋白酶抑制劑家族1中的胱氨酸蛋白酶抑制劑A和B，是惟一的細(xì)胞內(nèi)蛋白。胱氨酸蛋白酶抑制劑家族2中的胱氨酸蛋白酶抑制劑C、D、E、F、S、SA和SN組成，它們是細(xì)胞外蛋白和細(xì)胞間蛋白。胱氨酸蛋白酶抑制劑家族3由高和低分子量的激肽原（K in inogen）組成，它們主要是血管內(nèi)蛋白。1983年A nastasi等首次從雞蛋清中分離純化得到高純度的半胱氨酸蛋白酶抑制劑（cysteine p roteinase inh ibitor，CPI），是這一類蛋白質(zhì)超大家族的成員之一，有半胱氨酸蛋白酶抑制劑C、胱抑素C、γ-痕跡蛋白（γ-trace protein）、后γ球蛋白（post-γ-globu lin）之稱，目前中文多稱之為胱抑素C。它由122個(gè)氨基酸組成，帶正電荷，等電點(diǎn)為9.3，是一種堿性非糖化的低分子蛋白質(zhì)，相對(duì)分子質(zhì)量為13 300[1]。

為比較血清胱抑素C在醫(yī)院常規(guī)檢測(cè)中相對(duì)血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的優(yōu)勢(shì)，筆者從6338份醫(yī)院患者標(biāo)本中統(tǒng)計(jì)出血清胱抑素C異常標(biāo)本560例，在560例血清胱抑素C異常標(biāo)本中，血清肌酐（Scr）異常355例，尿素氮（BUN）異常422例。各項(xiàng)正常參考范圍的來(lái)源是依據(jù)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》，結(jié)合我院實(shí)際情況做適當(dāng)修改得出。從橫向比較得出的這個(gè)數(shù)據(jù)中可以看出血清胱抑素C在檢測(cè)中相對(duì)血清肌酐、尿素氮的優(yōu)勢(shì)。因此可以說(shuō)胱抑素C（Cystatin C）因其分子量小，能自由通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)膜，幾乎完全被腎小管重吸收且不被分泌，能很好地替代血肌酐而成為一種新的反映腎小球?yàn)V過(guò)率（GFR）的理想標(biāo)志物[4-5]。在縱向比較時(shí)，4個(gè)不同的年齡段中除最低年齡段（0～14歲），檢測(cè)中的血清胱抑素C和血清肌酐、尿素氮無(wú)論是在異常檢出率和均值上都無(wú)很大區(qū)別，血清胱抑素C在低年齡段（0～14歲）檢測(cè)中具有很好優(yōu)勢(shì)，而血清肌酐與尿素氮由于小兒體重和代謝原因，不能真實(shí)反映早期腎損傷。

國(guó)內(nèi)外對(duì)血清胱抑素C的參考值從出生到101歲之間年齡范圍的個(gè)體以及各種體液進(jìn)行了研究，正常人血清胱抑素C為（0.96±0.20）m g/L，臍帶血為（2.08±0.33）m g/L，嬰兒（＜1個(gè)月）為（0.18±0.04）m g/L，＜12個(gè)月為（0.39±0.09）m g/L，＞12個(gè)月為（0.72±0.29）m g/L。腦脊液為（5.371±0.36）m g/L，唾液為（1.22±0.67）m g/L，關(guān)節(jié)液為（1.27±0.41）m g/L，尿液為（0.11±0.125）m g/L。羊水中的濃度與血漿中的濃度接近，腦脊液濃度為血漿的5～6倍，精漿中濃度最高，平均為51m g/L[6]。

血清胱抑素C應(yīng)用中的不足，相對(duì)血清肌酐與尿素氮低廉的價(jià)格，血清胱抑素C的價(jià)格是昂貴的，增加患者負(fù)擔(dān)。從表2我們可以看到血清胱抑素C最大測(cè)定值大多小于10m g/L，在中至重度腎損傷的患者的檢測(cè)結(jié)果中對(duì)患者腎損傷程度上的反映不如血清肌酐與尿素氮明顯。從方法學(xué)上顆粒增強(qiáng)透射免疫比濁法測(cè)血清胱抑

表1 560例cystatin C（cysc）≥1.55m g/L的患者cysc、BUN、Scr性別年齡構(gòu)成比

表2 560例cystatin C（cysc）≥1.55的患者各年齡階段cysc scr BUN均值

表3 560例標(biāo)本中數(shù)值最高30～180例cysc、BUN、Scr均值與BUN、Scr對(duì)應(yīng)cysc均值

Cystatin C是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，也被稱為γ-微量蛋白或γ-后球蛋白，廣泛存在于各種組織的有核細(xì)胞和體液中，是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì)，分子量為13300M r，由122個(gè)氨基酸殘基組成，由機(jī)體有核細(xì)胞產(chǎn)生，產(chǎn)生率恒定，不受炎性反應(yīng)、膽紅素、溶血、血脂等影響，且與性別、年齡、體重、飲食無(wú)關(guān)。Cystatin C相對(duì)分子質(zhì)量低、等電點(diǎn)高，能自由地通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)膜并在近曲小管上皮細(xì)胞重吸收和降解。由于cy statin C的生成速度和血濃度穩(wěn)定，不受其他病理變化影響，腎臟是其惟一的濾過(guò)和代謝器官，因此其可作為反映腎小球過(guò)率的一種理想的內(nèi)源性標(biāo)志物，當(dāng)腎小球出現(xiàn)輕微損傷時(shí)血中cystatin C濃度即可出現(xiàn)升高，并隨著病情的加重而逐漸升高，所以cystatin C被公認(rèn)為是反映早期腎損害的敏感標(biāo)志物之一[2-3]。

在早期的研究中，胱氨酸蛋白酶抑制劑C濃度的測(cè)定只能通過(guò)放射免疫擴(kuò)散方法，此方法非常耗時(shí)，需要至少10～20h，并且CV值相當(dāng)高（大約10％）。10年后發(fā)展了全自動(dòng)的微粒子增強(qiáng)透射免疫比濁法和夾心酶免疫法，不僅快速而且精密度高，所以明顯促進(jìn)胱氨酸蛋白酶抑制劑C再臨床常規(guī)實(shí)驗(yàn)的發(fā)展。透射免疫比濁法可在自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行，有準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)。顆粒增強(qiáng)透射免疫比濁法是以多克隆抗體為基礎(chǔ)的改良免疫比濁分析法，利用碳二亞胺反應(yīng)將抗胱抑素C IgG共價(jià)結(jié)合到Intex顆粒上，與抗原結(jié)合形成的免疫復(fù)合物被聚乙二醇-6000沉淀，在340nm處比濁，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液比較，計(jì)算標(biāo)本中胱抑素C的含量。整個(gè)分析過(guò)程只需幾分鐘，可利用生化分析儀進(jìn)行比濁測(cè)定，批內(nèi)和批間CV分別為0.9％和2.2％，回收率為98％，黃疸、溶血和脂血標(biāo)本均不受影響。使cystain C在臨床的廣泛應(yīng)用成為可能。素的線性與血清肌酐的 Jaffe速率法與尿素氮尿素酶法也是不可比的。可見血清胱抑素C應(yīng)用的優(yōu)勢(shì)在反映早期腎損傷。

[1]孫曉慧.血清胱抑素C測(cè)定在疾病監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)綜述,2006，12（7）：443-445.

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