淫羊藿總黃酮對高脂血癥大鼠血清脂聯素水平的影響

蔡 輝 趙智明 趙凌杰 董曉蕾

南京軍區南京總醫院（江蘇南京210002）

淫羊藿為為小檗科淫羊藿的多年生植物，主要含淫羊藿總黃酮。淫羊藿苷為淫羊藿總黃酮主要成分。研究顯示淫羊藿總黃酮有改善冠狀動脈血管內皮功能［1-2］。本實驗研究高脂血癥模型大鼠經淫羊藿總黃酮處理后主動脈內皮改變及血漿脂聯素水平的變化，探討淫羊藿總黃酮對高脂大鼠血管內皮的保護作用及可能機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及試藥 （1）動物：剛斷乳的SD雄性大鼠35只，平均體質量約60g，清潔型，由南京軍區南京總醫院動物實驗中心提供［實驗動物使用許可證號：SYXK（蘇）2003-0032］。 （2）試藥：淫羊藿總黃酮由南京澤朗醫藥公司合成，其中淫羊藿總黃酮含量占90%。脂聯素ELISA試劑盒購于美國R＆D公司；甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 造模及給藥 所有大鼠均適應性喂養1周，隨機分為自配方高脂飼料（魚粉3%、豬油12%、白蔗糖5%、雞蛋10%、膽固醇2%、膽酸鹽0.5%、甲基硫氧嘧啶0.2%和67.3%基礎飼料）組（26只）和對照組（予普通飼料，9只）。高脂飼料進食量控制在15g（100g/d），分早、中、晚三餐定時定量給予，第12周末從大鼠眶后靜脈抽血檢測血脂水平以確定模型是否復制成功。再將高脂飼料組大鼠隨機分為模型組 （8只）和低劑量淫羊藿總黃酮組（100mg/kg，9 只）、高劑量淫羊藿總黃酮組（200mg/kg，9 只）。 模型組及高、低劑量淫羊藿總黃酮組繼續喂飼高脂飼料，并予相應藥物灌胃，對照組和模型組予空白溶劑灌胃。各組均給藥4周。

1.3 標本采集 12周末從大鼠眶后靜脈抽取血液4mL，常規消毒。實驗結束后第16周，禁食24h，于次日上午8時，用20%氯胺酮，以1mL/100g劑量麻醉后，剪開胸腹腔，暴露心臟，左心室穿刺取血5mL，室溫靜置1h后，3000r/min離心 5min，分離血清置-20℃冰箱保存；于冰盤中分離主動脈，置液氮中保存。

1.4 血脂指標檢測 甘油三酯 （TG）用TPO-PAP法，膽固醇（TC）用CHOD-PAP法，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）用選擇性沉淀法，均按照試劑盒說明書進行。

1.5 主動脈病理檢測 大鼠主動脈弓與胸主動脈交界處取材，10%中性甲醛固定，石蠟包埋，水平橫切面制備石蠟切片，厚度4μm，蘇木素伊紅（HE）染色，100倍光鏡下觀察。

1.6 脂聯素（ADP）檢測 脂聯素用ELISA法檢測，應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠ADP水平，每份標本測2次取平均值，嚴格按照試劑盒說明進行操作。

1.7 統計學處理 應用SPSS13.0統計軟件。計量資料以表示，多組資料組間比較用單因素方差分析，方差齊性用LSD，方差不齊用Dunnett T3。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組血脂及ADP水平比較 見表1，表2。造模后12周時（干預前）高脂飲食組TG、TC、LDL-C較對照組明顯升高 （＜0.01）。實驗16周末（干預后），模型組TG、TC顯著高于對照組和高、低劑量淫羊藿總黃酮組（P＜0.05或0.01），模型組HDL-C明顯高于對照組（P＜0.01），與高、低劑量淫羊藿總黃酮組比較無明顯差異（P＞0.05）；模型組LDL-C高于對照組及高劑量淫羊藿總黃酮組，但差異無統計學意義（P＞0.05）。模型組血清ADP水平顯著低于其他各組（P＜0.05）；高劑量淫羊藿總黃酮組ADP水平較低劑量高，差異有統計學意義（P＜0.05）。

表1 第12周時（干預前）血脂水平比較 （mmol/L

表1 第12周時（干預前）血脂水平比較 （mmol/L

與對照組比較，*P＜0.05。

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表2 干預后各組血脂及脂聯素水平比較

表2 干預后各組血脂及脂聯素水平比較

與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與高劑量淫羊藿總黃酮組比較，▲P＜0.05。

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2.2 主動脈病理檢測結果 見圖1。光鏡下可見：對照組血管壁結構清晰、內皮細胞完整無脫落，內膜薄，中層平滑肌層均勻、厚度正常，外層為疏松結締組織；模型組血管內皮細胞部分脫落，內膜增厚，血管壁向管腔內突出，可見中膜平滑肌增生、排列紊亂；低劑量淫羊藿總黃酮組可見內膜輕度增厚，少量缺損，未見明顯平滑肌增生；高劑量淫羊藿總黃酮組沒有明顯的病理改變。

圖1 各組主動脈病理學切片

3 討 論

高脂飲食為動脈粥樣硬化獨立危險因素，在沒有代謝綜合征情況下高脂飲食可增加血漿TC及LDL，并增加動脈粥樣硬化形成危險［3］。其中氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）和TC會對動脈內膜造成功能性損傷，出現血管內皮損傷［4］。本研究利用高脂飲食飼養大鼠12周后，發現大鼠血脂水平增高，模型組TG、TC均明顯升高，主動脈病理切片示出現不同程度的內膜增厚、斷裂、脫落、平滑肌增生，符合內皮損傷表現，形成高脂血癥內皮損傷模型。藥物干預后可見，淫羊藿總黃酮能降低血脂（TG、TC）水平，減輕血管內皮細胞損傷，說明淫羊藿總黃酮通過調節血脂改善血管內皮。

ADP為白色脂肪組織分泌的唯一與體內脂含量負相關的脂肪因子，為診斷心血管疾病的一個新的生物標志物［5］，其水平隨著不斷增加的血脂水平而下降。ADP通過激活cAMP和AMP激酶的活性來抑制TNF-α誘導的核因子κB，從而起到抗炎、抗氧化等作用，改善高脂所致的內皮細胞損傷［6-8］。并有研究顯示高脂飲食誘導的肥胖大鼠可出現血管內皮損傷，舒張功能障礙，通過加入ADP進行孵化，可改善動脈血管內皮的功能［9］。ADP素抑制動脈粥樣硬化主要通過抑制單核細胞聚集和吞噬細胞的激活，并可抑制血管內皮損傷及增加內皮性NO的量，改善內皮細胞功能［10］。本研究顯示，高脂血癥模型組較對照組ADP水平顯著下降，進一步證明了低ADP與高脂血癥及其誘導的血管內皮損傷有關。有研究顯示ADP改善高脂血癥所致的血管內皮損傷，可能與增加eNOS的活性，抑制iNOS活性相關，從而增加NO的量，減輕氧化應激水平［8］。淫羊藿總黃酮可顯著提高血漿ADP水平，高劑量治療組較低劑量治療組改善更為明顯，差異有統計學意義。病理切片示淫羊藿組血管未見明顯改變，未見脂質沉積，內皮完整，平滑肌未見增厚。提示淫羊藿總黃酮可能通過提高血漿ADP水平發揮保護血管內皮，抗動脈粥樣硬化作用。

本研究顯示淫羊藿總黃酮通過調節高脂血癥大鼠血脂及提高血漿ADP水平，從而達到抗高脂癥所致的早期動脈粥樣硬化血管內皮損傷。

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