注射用地塞米松磷酸鈉中細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)

鄭劍峰 王育紅

沈陽(yáng)綠洲制藥有限責(zé)任公司（沈陽(yáng) 110300） 遼寧廣播電視大學(xué)（沈陽(yáng) 110034）

注射用地塞米松磷酸鈉中細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)

鄭劍峰 王育紅

沈陽(yáng)綠洲制藥有限責(zé)任公司（沈陽(yáng) 110300） 遼寧廣播電視大學(xué)（沈陽(yáng) 110034）

建立注射用地塞米松磷酸鈉的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。使用兩個(gè)廠家的鱟試劑和自制的3批注射用地塞米松磷酸鈉樣品進(jìn)行干擾試驗(yàn)。注射用地塞米松磷酸鈉濃度稀釋至0.3125 mg/mL時(shí)無(wú)干擾。注射用地塞米松磷酸鈉可按內(nèi)毒素限值6 Eu/mg進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

注射用地塞米松磷酸 鱟試劑 細(xì)菌內(nèi)毒素

地塞米松磷酸鈉為腎上腺皮質(zhì)激素類(lèi)藥，主要用于過(guò)敏性與自身免疫性炎癥性疾病。本研究參照中國(guó)藥典2005年二部有關(guān)要求及應(yīng)用指導(dǎo)原則，進(jìn)行了地塞米松磷酸鈉凍干粉針細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的可行性研究。

1 儀器和試藥

內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，規(guī)格：180 EU/支，批號(hào)：2004-5）。鱟試劑：福州新北生化工業(yè)有限公司（標(biāo)示靈敏度：0.25 EU/mL，規(guī)格：0.1mL/支，批號(hào)：04101411）；湛江安度斯生物有限公司（標(biāo)示靈敏度：0.25 EU/mL，規(guī)格：0.1 mL/支，批號(hào)：0411121）。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水：湛江安度斯生物有限公司（規(guī)格：5 mL/支，批號(hào)：0409230）。注射用地塞米松磷酸鈉（自制，規(guī)格：2 mg/支，批號(hào)：20080501、20080502、20080503）。

2 方法與結(jié)果

2.1 靈敏度復(fù)核

鱟試劑按中國(guó)藥典2005年規(guī)定方法進(jìn)行靈敏度復(fù)核試驗(yàn)，結(jié)果均符合規(guī)定。

2.2 細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）的確定

USP28版、中國(guó)藥典2005年版只收載地塞米松磷酸鈉注射液標(biāo)準(zhǔn)，未見(jiàn)本品的收載。美國(guó)USP28版規(guī)定的地塞米松磷酸鈉注射液限度為：31.3 EU/mg。地塞米松磷酸鈉注射液說(shuō)明書(shū)表明，臨床最大可靜脈推注50 mg。根據(jù)L=K/M，其中K=5 EU（Kg·h）-1，計(jì)算限度為：L=6 EU/mg，參照臨床最大劑量規(guī)定本品的限度為6 EU/mg。

2.3 有效稀釋濃度（MVD）的計(jì)算

公式MVD（λ=0.25）=λ/L，其中L為地塞米松磷酸鈉細(xì)菌內(nèi)毒素限值6 EU/mg，λ為鱟試劑標(biāo)示靈敏度。取樣品配成2.5 mg/mL，則MVD=6×2.5÷0.25 =60倍（即0.04 mg/mL）。

2.4 供試品干擾預(yù)試驗(yàn)

取供試品，加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，配成2.5 mg/mL，作為供試品貯備液；再用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成系列濃度的供試樣品，參照細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行干擾預(yù)試驗(yàn)，結(jié)果表明本品2.5mg/mL液的1：8稀釋液無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.5 干擾確證試驗(yàn)

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)以上兩批鱟試劑，取供試品貯備液（2.5 mg/mL）稀釋8倍（0.3125 mg/mL）進(jìn)行干擾確證試驗(yàn)。結(jié)果表明，本品對(duì)兩批鱟試劑均無(wú)干擾，0.5λs<λt<2.0λs，符合中國(guó)藥典2005年版對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查有效性的規(guī)定，進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。見(jiàn)表2和表3。

2.6 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

按中國(guó)藥典2005年版細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，使用兩批不同廠家的鱟試劑分別對(duì)樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，同時(shí)設(shè)樣品陽(yáng)性對(duì)照管，結(jié)果3批樣品均呈陰性。結(jié)果見(jiàn)表4和表5。

表1 注射用地塞米松磷酸鈉干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

表2 干擾確證試驗(yàn)結(jié)果（鱟試劑批號(hào)：04101411）

表3 干擾確證試驗(yàn)結(jié)果（鱟試劑批號(hào)：0411121）

表4 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果（鱟試劑批號(hào)：04101411）

表5 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果（鱟試劑批號(hào)：0411121）

3 結(jié)論

由干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果可初步判斷，當(dāng)樣品稀釋至0.3125 mg/mL時(shí)與鱟試劑無(wú)干擾，且兩個(gè)廠家的鱟試劑反應(yīng)結(jié)果相當(dāng)。正式干擾試驗(yàn)用0.3125 mg/mL樣品濃度，且兩個(gè)廠家的鱟試劑反應(yīng)結(jié)果均為0.5 λs<λt<2.0 λs，確證無(wú)干擾影響，細(xì)菌內(nèi)毒素限值定為6 Eu/mg。注射用地塞米松磷酸鈉可適用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，但供試品濃度應(yīng)在0.3125 mg/mL或以下，鱟試劑靈敏度在0.5 Eu/mL以上均可。

[1]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.地塞米松磷酸鈉注射液說(shuō)明書(shū).國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥說(shuō)明書(shū)內(nèi)容匯編第一冊(cè).

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).地塞米松磷酸鈉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).中華人民共和國(guó)藥典二部（2005）.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法.中華人民共和國(guó)藥典二部（2005）.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

齊婷婷）