基質金屬蛋白酶組織抑制因子-1、2在宮頸鱗癌中的表達及意義*

南云澤 劉麗利 林貞花 金仁順

宮頸癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一，全球范圍內宮頸癌的發病率雖有下降趨勢，但仍是惡性腫瘤造成婦女死亡的第二位因素。腫瘤細胞侵襲和轉移是宮頸癌患者死亡的根本原因。控制腫瘤的侵襲和轉移是當前研究的重點。基質金屬蛋白酶(MMPs)可降解細胞外基質和基底膜，是與腫瘤侵襲、轉移關系最為密切的一類蛋白水解酶，而MMPs活性又可被基質金屬蛋白水解酶組織抑制因子（tis?sue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMPs）所抑制。本文旨在應用免疫組化技術檢測TIMP-1和TIMP-2在宮頸鱗癌組織中的表達情況，并探討其與宮頸癌生物學行為的關系，從而明確其在腫瘤侵襲轉移過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 標本選自2001年7月—2009年7月我院婦產科住院手術切除的組織，其中宮頸鱗癌標本（鱗癌組）46例，年齡22～59歲，平均年齡（42.89±7.16）歲，臨床分期采用國際婦產科聯盟（FIGO）2000年修訂的標準[1]。宮頸原位癌標本（原位癌組）34例，年齡25～64歲，平均年齡（38.97±8.09）歲。選取20例同期因子宮肌瘤行子宮切除的正常宮頸標本作為對照組，年齡25～64歲，平均年齡（40.25±8.90）歲。全部病例在術前均未接受放療、化療，臨床及病理資料完整。3組間年齡比較差異無統計學意義（F=2.56,P＞0.05）。

1.2 主要試劑 兔抗人TIMP-1免疫組化多克隆抗體（40282Ra），兔抗人TIMP-2免疫組化多克隆抗體（40283Ra），即用型快捷免疫組化MaxvisionTM試劑盒（鼠/兔），DAB顯色試劑盒，均購自福州邁新生物技術有限公司。

1.3 染色方法 所有標本均經10%中性福爾馬林固定，常規石蠟包埋，4 μm厚連續切片，并行常規HE染色經病理科專家閱片復診。免疫組織化學MaxvisionTM法嚴格按試劑盒說明書進行，DAB顯色，蘇木素復染，封片后用光學顯微鏡觀察。同時設置陰性對照（用PBS代替一抗），陽性對照用已知陽性片。

1.4 結果判定標準 TIMP-1、TIMP-2蛋白陽性信號呈棕黃色顆粒樣，位于細胞質內。觀察全片，按陽性細胞所占百分比及著色程度進行結果判定[2]。按陽性細胞比例判定：陽性細胞≤10%1分，10%～50%2分，＞50%3分；按染色程度判定：陰性為0分，淡黃色1分，中度黃色2分，棕黃色3分。按陽性細胞得分×染色程度得分計總分，總分＜3為陰性，≥3為陽性。

1.5 統計學處理 采用SPSS 17.0統計軟件，計數資料比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 宮頸病變組織中TIMP-1和TIMP-2蛋白的表達 TIMP-1和TIMP-2蛋白在原位癌組及鱗癌組的陽性表達率均較高，與對照組比較差異均有統計學意義（P＜0.05），但鱗癌組與原位癌組比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表1，圖1～6。

2.2 TIMP-1和TIMP-2蛋白的表達與子宮頸鱗癌臨床病理特征的關系 不同臨床分期和病理類型的患者TIMP-1和TIMP-2蛋白的陽性表達率差異無統計學意義（P＞0.05），有無淋巴結轉移的患者TIMP-2陽性表達率差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表1 TIMP-1及TIMP-2在不同宮頸組織中的陽性表達例（%）

圖1 宮頸鱗癌TIMP-1（MaxvisionTM×100）

圖2 宮頸鱗癌TIMP-2(MaxvisionTM×100)

圖3 宮頸原位癌TIMP-1(MaxvisionTM×100)

圖4 宮頸原位癌TIMP-2(MaxvisionTM×100)

圖5 正常宮頸上皮TIMP-1(MaxvisionTM×100)

圖6 正常宮頸上皮TIMP-2(MaxvisionTM×100)

表2 宮頸鱗癌TIMP-1及TIMP-2的免疫組化結果

3 討論

浸潤和轉移是惡性腫瘤的典型特征，是導致腫瘤患者死亡的主要原因。腫瘤的浸潤與轉移是一個動態的、復雜的、多步驟的過程，其中細胞外基質的降解是腫瘤浸潤正常組織及開始轉移的基本途徑，基質金屬蛋白酶為降解細胞外基質的一組最重要的酶，該過程對腫瘤細胞的浸潤以及相繼發生的轉移較為重要。而其中與婦科惡性腫瘤關系較為密切的為MMP-2和MMP-9，同時MMPs活性又受到其抑制劑的調節，MMP-2、MMP-9的特異性組織抑制劑分別為TIMP-2和TIMP-1[3]。有研究表明，對MMPs的適當抑制和調控可以對腫瘤細胞的侵襲和轉移進行控制，阻斷腫瘤血管的生成，從而阻斷腫瘤的生長和發展[4]。本研究表明，TIMP-1和TIMP-2蛋白在鱗癌組和原位癌組的陽性表達率均高于對照組，這表明在細胞發生癌變過程中TIMP-1、2起著重要的作用。但鱗癌組與原位癌組比較差異無統計學意義，可推測在子宮頸鱗癌的發展過程中TIMP-1、2的表達是一早期事件。

宮頸癌的轉移方式主要是淋巴道轉移，臨床上也是以有無淋巴結的轉移來判斷預后和指導臨床治療。有無淋巴結轉移的宮頸鱗癌患者TIMP-2陽性表達率差異有統計學意義，提示TIMP-2在宮頸鱗癌的腫瘤細胞的浸潤和轉移中起抑制作用。在宮頸鱗癌中TIMP-1的陽性表達率較原位癌組低，但有無淋巴結轉移的宮頸鱗癌患者TIMP-1陽性表達率差異無統計學意義。據此推測，TIMP-1對于腫瘤細胞的浸潤和轉移是一雙向調節因子。有報道，TIMP的超表達與惡性腫瘤的侵襲轉移行為呈正相關[5]。也有研究表明TIMP-1對腫瘤的侵襲既有保護作用又有抑制作用，這依賴于腫瘤的TIMP-1的基因型而不是宿主本身[6]。在以后的研究中，筆者要對其進行深入研究，從而進一步確定TIMP-1是否能夠作為治療腫瘤的藥物用于臨床。

[1]樂杰.婦產科學[M].第7版.北京：人民衛生出版社，2008：265-266.

[2]杜華貞，張延新，李維山，等.KISS-l與TIMP-1在胃癌中的表達及臨床病理意義[J].臨床與實驗病理學雜志，2008，24(3)：374-376.

[3]Cruz-Munoz W,Khokha R.The role of tissue inhibitors of metallo?proteinases in tumorigenesis and metastasis[J].Crit Rev Clin Lab Sci,2008,45(3):291-338.

[4]Raffetto JD,Khalil RA.Matrix metalloproteinases in venous tissue remodeling and varicose vein formation[J].Curr Vasc Pharmacol, 2008,6(3):158-172.

[5]Murphy PM.Chemokines and the molecular basis of cancer metasta?sis[J].N Engl J Med,2001,345(11):833-835.

[6]Soloway PD,Alexander CM,Werb Z,et al.Targeted mutagenesis of Timp-1 reveals that lung tumor invasion is influenced by Timp-1 genotype of the tumor but not by that of the host[J].Oncogene, 1996,13(11):2307-2314.