鼻咽癌核心家系成員VCA-IgA抗體檢測結果分析及家系標本庫的建立▲

劉海洲 崔 英 岳惠芬 梁新強 吳冬梅 陳麗霞 朱文良 聶 龍 宛 月 豐大利

(廣西醫科大學附屬腫瘤醫院，南寧市 530021)

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是影響廣西地區人群健康的最主要的惡性腫瘤，在廣西地區其發病率和死亡率都相對較高［1］。目前鼻咽癌的病因學研究已經深入到了分子水平，鼻咽癌核心家系相關基因的研究也逐步成為熱點，但尚未見有鼻咽癌核心家系數據庫及其成員血液標本庫的報道。鑒于此，本研究通過建立廣西254個鼻咽癌核心家系數據庫及成員血液標本庫，并檢測EB-VCA-IgA抗體，為進一步利用以核心家系為基礎的遺傳關聯研究，探討相關基因多態性與鼻咽癌易感性之間的關系打下良好基礎。

1 對象與方法

1.1 研究對象 以廣西近年患病或發現的鼻咽癌患者為先證者;由先證者和其生物學父母構成核心家系，對照組為廣西境內鼻咽癌高發區自然人群。

1.2 研究方法 由專門培訓的調查員，使用統一的調查表，對每個核心家系進行保密的詢問調查，主要內容包括個人基本情況、吸煙史、飲酒史、鼻咽癌病史、家族腫瘤史、個人史等。采集核心家系成員、對照組的靜脈血，離心分離血清，－20℃保存，建立鼻咽癌核心家系樣本庫。采用酶聯免疫方法檢測血清EB-VCA-IgA抗體滴度。EB-VCA-IgA陽性標準為:VCA-IgA≥1∶5。

1.3 血液標本的存放和管理 每個鼻咽癌核心家系包括先證者、先證者父母3份血液樣品，統一編號處理后集中存放于－20℃冰柜。研究人員對存放的鼻咽癌核心家系標本定期監測，記錄入庫時間、存放位置，定期送有條件的實驗室進行后期研究。

1.4 統計學方法 血清學檢測結果采用SPSS 13.0軟件進行統計;調查資料采用EPIDATA軟件錄入，數據庫構建采取ACCESS數據庫。

2 結果

2.1 鼻咽癌核心家系標本庫的初步建立 本數據庫錄入了254個鼻咽癌核心家系，有鼻咽癌先證者254例，其中有鼻咽癌家族史的鼻咽癌核心家系26個，占10.24%;新發現鼻咽癌3例，有1例家系先證者及父母都為鼻咽癌患者，1例家系先證者及母親一方患有鼻咽癌。26個有鼻咽癌家族史的核心家系，其成員EB-VCA-IgA總陽性率為39.7%，先證者陽性率為84.6%，先證者父母為17.3%。數據庫中還包含有鼻咽癌先證者煙酒史、臨床分期及病理結果分型。

2.2 鼻咽癌核心家系數據庫建立完成 本研究的核心家系數據庫含有三個數據表:①先證者數據表，包含字段有先證者ID、姓名、職業、年齡、民族、籍貫、聯系方式、病理分期、臨床診斷等;②先證者父母親數據表，包含字段有先證者ID、與先證者關系、姓名、職業、年齡、民族、籍貫、聯系方式等;③隨訪結果數據表，包含字段有先證者ID、隨訪時間、隨訪次數、更新聯系方式等。在數據表的基礎上，含有數個檢驗單發布報表以及家系成員數據查詢圖，并含有一個數據錄入界面用于后期錄入數據。

2.3 EB-VCA-IgA總體情況比較 核心家系成員父母與自然人群對照組的EB-VCA-IgA總體情況比較見表1。254個鼻咽癌核心家系成員EB-VCA-IgA陽性率為40.3%，成員中先證者EB-VCA-IgA陽性率為88.2%，先證者父母為16.1%;自然人群對照組的陽性率為8.22%，先證者父母EB-VCA-IgA水平高于自然人群對照組，差異有顯著性(P＜0.01)。核心家系成員中先證者父親、母親總的EB-VCA-IgA陽性率是自然人群的2.15倍。

表1 核心家系先證者父母及對照組的VCA-IgA情況比較 ［n(%)］

2.4 EB-VCA-IgA的具體情況比較 鼻咽癌核心家系先證者父親、母親分別與自然人群對照組的EB-VCA-IgA具體情況比較見表1。核心家系先證者父親與對照組男性EB-VCA-IgA情況比較有顯著性差異(P＜0.01);核心家系先證者母親與對照組女性EB-VCA-IgA情況比較有顯著性差異(P＜0.01);核心家系先證者父親、母親的EB-VCA-IgA陽性率分別是對照組男性、女性的2.26倍、2.00倍。

3 討論

3.1 鼻咽癌家族的聚集現象 鼻咽癌是我國南方常見的惡性腫瘤。眾所周知，EB病毒與鼻咽癌發病十分密切［2］，EB病毒抗體(VCA/IgA)陽性人群，其鼻咽癌發病率明顯高于陰性人群［3］，調查表明廣西鼻咽癌患者EB病毒感染率明顯高于健康人群［4］。在本次研究中先證者父母的EB-VCAIgA陽性率明顯高于正常對照人群，顯示了鼻咽癌家族聚集現象確實存在。鼻咽癌患者及親屬EB病毒感染率明顯高于健康人群，相似的生活環境、密切接觸可能是此現象的基礎。

3.2 建立鼻咽癌核心家系標本庫存在的問題及解決方案

3.2.1 鼻咽癌數據庫的建立經驗 以往的基于鼻咽癌核心家系以及高發家系的研究不少，但是關于如何組織這些紛繁復雜的家系資料卻未見報道。在本研究中，采集血液樣品及調查人員按照統一的標準制定鼻咽癌核心家系調查表、鼻咽癌核心家系登記數據庫及鼻咽癌核心家系樣本庫，在數據庫中主要包含的一般信息(姓名、職業、年齡、民族、籍貫、聯系方式等)為家系后期隨訪提供了先決條件;鼻咽癌核心家系樣本庫存儲的血液樣本都在核心家系數據庫中有對應的詳細資料，在數據庫中可以通過先證者血液樣本編號查詢先證者臨床治療信息及聯系方式，并進一步查詢到先證者父母的一般信息。后期的開發還準備將家系圖譜轉變成數字編碼存儲進數據庫，以完善鼻咽癌核心家系標本庫的信息。

3.2.2 家系調查資料的安全性與保密性 鼻咽癌核心家系原始資料來源于區內各大醫院，在調查取樣的同時，應該滿足被調查者的隱私需求，保證全程沒有他人在場，完全由調查者獨立完成，后期體檢結果也由數據庫系統打印，并且密封郵寄給被調查者。所獲取的體檢資料必須由有權限的人員來導出、存檔，完全保障了人群資料的安全性、保密性。

3.2.3 鼻咽癌標本庫建立的質量控制 保證標本庫內樣本資料的真實可靠，一定的質量控制必不可少。①鼻咽癌核心家系標本庫的質量控制有別于其他的調查，首先必須要統一對調查員進行培訓，以提高調查員工作調查結果的真實性，調查人員必須熟知血樣保存、數據庫錄入以及臨床診斷。②標本庫的樣本存放有著嚴格統一的標準，所以必須制定實驗室標準及規范，提高實驗檢測人員的業務能力及熟練程度，以減少人為溶血等技術失誤問題。③對象的選擇必須符合納入排除標準，以保證樣本質量。④登記表格現場錄入，現場核查，及時修改、補充，分析資料再經“雙人雙錄入核查”、邏輯糾錯等控制數據質量。⑤根據廣西壯族自治區壯族居民較多的特點，調查取樣人員需要知道一定的地方方言，以減少與研究對象因語言障礙而帶來的信息偏移。⑥征得每位先證者的知情同意，并使患者充分認識到研究對其個人信息及隱私的絕對保護，以獲得研究對象最大程度的配合。

3.3 鼻咽癌核心家系標本庫建立的前景與展望 標本庫構建完成之后，血液樣本可以提供分子遺傳學篩選鼻咽癌易感位點。自上個世紀30年代以來，人們逐漸意識到癌癥是一種遺傳性疾病［5］。近期我們對PTEN基因發點多態性與鼻咽癌的易感性進行了關聯性研究［6］在一個鼻咽癌家系COX7B2基因中共發現5個新的SNP位點。因此，本研究建立的鼻咽癌核心家系標本庫，通過后期采用PCR-直接測序法篩選基因，為鼻咽癌基于基因的病因學研究提供了基礎。如果后期研究需要對核心家系成員進行隨訪及資料調查，一個規范的數據庫給了實驗室研究人員非常大的便利。本研究證實了血液樣本庫對腫瘤病因學研究的重要性，其數據庫開發、質量控制、標本儲藏、取樣隨訪經驗為后期針對大量鼻咽癌高危人群建立血液標本庫提供了難得的經驗。

綜上所述，本研究建立了一個可供后期鼻咽癌分子病因學研究所需要的血液標本庫，并建立完善了血液標本相關的資料數據庫，在收集資料的同時我們發現核心家系先證者父母EB-VCA-IgA抗體陽性率顯著高于正常對照組人群。

［1］ 趙平主編，孔靈芝.鼻咽癌［M］.中國腫瘤死亡報告－全國第三次死因調查回顧取樣調查.北京:人民衛生出版社，2010:170－187.

［2］ 秦 嶺，李 齡.鼻咽癌遺傳易感性的分子水平研究進展［J］.醫學文選，2002，21(1):82－84.

［3］ 曾 希，王承龍.鼻咽癌血清EB病毒IgA檢測的臨床分析［J］.中國現代醫學雜志，2010，20(6):879－881.

［4］ Lo KW，To KF，Huang DP.Focus on nasopharyngeal carcinoma［J］.Cancer Cell，2004，(5):423－428.

［5］ 薛開先.癌變的體細胞突變理論回顧與挑戰［J］.癌變畸變突變，2007，19(1):1－3.

［6］ 張小愛，周鋼橋，崔 英，等.PTEN基因多態性的相關性研究［J］.解放軍醫學雜志，2008，33(8):943－946.