乙型肝炎表面抗原酶聯(lián)免疫吸附法中包被板的回收與利用

趙志鈞 婁海波 于 倩 (浙江舟山醫(yī)院檢驗中心 316004)

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）測定是診斷乙肝及乙肝病毒攜帶者的主要指標(biāo)和直接證據(jù)之一。而酶聯(lián)免疫吸附試驗，因其快捷、簡便，成為目前各醫(yī)療單位應(yīng)用最多的檢測手段。我們將日常工作中的陰性包被板條經(jīng)過處理，再次用于試驗，結(jié)果滿意，報道如下：

1 材料與方法

1.1 儀器及材料 美國寶特（BIO-TEK）ELX-800自動酶標(biāo)儀。試劑由英科創(chuàng)新廈門科技有限公司生產(chǎn)，批號2010036108。室內(nèi)低值質(zhì)控品（簡稱低值血清），英科創(chuàng)新廈門科技有限公司提供，批號20105101。樣本HBsAg高值345U/ml、中值184.44U/ml、陰性血清0U/ml經(jīng)12000RS發(fā)光儀測定，均來自本院健康檢查者。

1.2 方法

1.2.1 回收板條的收集與保存 酶標(biāo)板顯色完全后，肉眼觀察結(jié)果，不加終止液，收集陰性包被板條，用自來水洗滌5次，洗滌液洗滌1次，甩干，最后電吹風(fēng)吹干，放入塑料袋內(nèi)摁緊咬合條2～6℃保存。

1.2.2 樣本測定 樣本、室內(nèi)低值質(zhì)控品50μl，陽性、陰性各一滴分別加入相應(yīng)的酶標(biāo)板孔內(nèi)，設(shè)空白對照，37℃水浴箱溫育30分鐘，不洗，各加酶結(jié)合物1滴，37℃水浴箱溫育30分鐘，洗滌、顯色同原方法，顯色完全后，加終止液，雙波長比色，讀取吸光度。計算變異系數(shù)(CV)。

1.2.3 操作方法照操作說明書。

2 結(jié)果

2.1 回收板與商品板的重復(fù)性試驗比較結(jié)果 商品板和回收板的高、中、低值血清吸光度接近，且重復(fù)性良好，見表1。

表1 回收板與商品板的重復(fù)性試驗結(jié)果比較

2.2 回收板不同保存時間測定結(jié)果比較 見表2。

表2 中值、低值血清、陰性、陽性、空白對照 （n=3）

3 討論

乙肝表面抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗中包被板上的包被抗體與抗原結(jié)合，再與酶標(biāo)抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物，通過洗滌、分離，加入底物顯色。如果樣品中沒有相應(yīng)的抗原，包被板上的抗體就不會被結(jié)合，仍保留原有的反應(yīng)活性。所以從理論上講，雙抗體夾心法的包被板是可以重復(fù)利用的。表1和表2的數(shù)據(jù)也可以驗證。

本組數(shù)據(jù)顯示，商品和回收板的高、中、低值血清吸光度無明顯差異，重復(fù)性良好，CV值也很好，特別是低值血清，符合定性試驗的要求。在試驗中，發(fā)現(xiàn)高、中值血清的吸光度兩者無顯示梯度變化，而且比較接近，這可能是在濃度達(dá)到一定水平時，酶標(biāo)儀線性范圍比較窄之故，不能與定量分析儀作比較。但能滿足定性試驗的要求。表1中原法高值血清吸光度均值低于中值，這可能是鉤狀效應(yīng)，是由一步法引起的。回收板采用的是二步法，高值血清的吸光度高于中值血清。表1中可以看到三份樣本總體精密度優(yōu)于原方法，同樣可能是由于二步法優(yōu)于一步法所致。表1中回收板陰性管的平均吸光度與商品板陰性管的平均吸光度雖有差異，但不影響結(jié)果判定。

表2選擇中值、低值血清及陰性、陽性對照，旨在了解回收板在不同保存時間的檢測靈敏度及特異性及它們之間的差異程度。表2顯示四種不同保存時間的回收板的吸光度變化不大，而且從陰性和空白對照中未出現(xiàn)非特異性顯色現(xiàn)象，可說明回收再利用的回收板，至少在60天內(nèi)有效。對測定結(jié)果無影響。

通過以上實驗的探討，我們有理由相信：乙肝表面抗原陰性的包被板是可以回收和利用的。