抗癌藥酒抑瘤及對小鼠免疫功能影響的研究

劉淑杰，蔡 兵，郭 婕

（1.北京懷柔中醫院，北京 100000；2.北京生物醫藥研究所，北京 100091；3.北京善緣生門診部，北京 100176）

藥酒即加入中藥的酒，在我國的醫藥史上是傳統劑型之一，是一個獨特的中醫治療方法[1]。近年來我們發現了一個治療癌癥有效的藥酒配方。該藥酒對一些晚期癌癥患者治療效果明顯，能延長癌癥患者的生存期，提高其生活質量。因此我們對其抗癌活性對免疫方面的影響進行了探討。抗癌藥酒是由中藥冬蟲夏草、 靈芝、西洋參、白花蛇草、半枝蓮、蒲公英、大黃、金銀花、茯苓、甘草、夏枯草、柴胡和大薊組成，用56℃北京紅星二鍋頭白酒按1∶3比例浸泡1個月后濾去藥渣收集濾液而成。我們利用小鼠轉移瘤動物模型，觀察了該藥酒的抗癌效果并對藥酒提高免疫力的能力和安全性進行了評價。

1 資料與方法

1.1 試劑

胎牛血清和RP1640購自美國Gibco公司，羧甲基纖維素鈉（CMC）購自Sigma公司。注射用環磷酰胺（CTX），江蘇恒瑞醫藥股份有限公司產品。慈丹膠囊，福州梅峰制藥廠生產。藥酒由北京善緣生門診部提供。抗腫瘤作用的觀察直接使用藥酒，免疫力影響和安全性評價是將藥酒經旋轉薄膜蒸發儀，制成浸膏，低溫冷凍干燥成的粉末，每毫升藥酒制成濃縮粉20 mg。臨用前以1%CMC制成混懸液。

1.2 儀器

超凈工作臺（美國SGE400）；倒置顯微鏡（日本OLYMPUS SK400）；高壓滅菌鍋(日本YAMATO SM52)；二氧化碳培養箱（SANYO MCQ-175）；電子天平（美國SL3000）。

1.3 實驗動物

KM，C57，Balb/c小鼠，均由北京醫科院動物中心提供，動物合格證號：SCXR（京）2005-0013。

1.4 瘤株

肝癌（H22）、路易斯肺癌（Lewis’L.C.）由中國醫科院腫瘤研究所提供。

1.5 方法

1.5.1 抗癌藥酒抗腫瘤作用的觀察

動物移植瘤實驗 將KM小鼠腹水傳代第7～9 d腫瘤制備瘤細胞液（H22），用無菌生理鹽水按1∶3 比例，配制成癌細胞懸液，對實驗小鼠進行造模。每只鼠右前腋下皮下接種0.2 mL/鼠（4×106C），C57小鼠皮下傳代第8～10 d腫瘤制備瘤細胞液（Lewis’L.C.），每只鼠右前腋下皮下接種0.2 mL/鼠（5×106C），以上均在無菌環境中操作[2]。

給藥 取健康小鼠，設5組，即荷瘤對照組，溶劑對照組，陽性藥對照組（環磷酰胺或慈丹膠囊）及藥酒2個劑量組。雌雄各半。每只小鼠右腋皮下接種0.2 mL癌細胞懸液，24 h后隨機分組給藥。對照組給予蒸餾水，溶劑對照組給予20 mL的40°二鍋頭白酒，陽性藥對照組動物腹腔注射或灌胃給藥。給藥組給予 10和20 ml/kg藥酒灌胃，每天1 次，連續給藥10 d。按10 g小鼠質量給0.1 ml比例配制藥物。

測腫瘤抑制率 末次給藥后24 h，小鼠斷頸處死，剝離完整腫瘤組織，電子天平稱量瘤體濕質量，并計算腫瘤生長抑制率。抑瘤率（%）=（1-荷瘤給藥組瘤質量/荷瘤對照組瘤質量）×100%。

1.5.2 抗癌藥酒對小鼠免疫器官的影響 二級BALB/c小鼠，雌性，體質量20～22 g，隨機分4組，對照組和三個給藥組（1 mg，5 mg，10 mg/kg），每組16只。各組每天灌胃給藥，連續給藥10 d，對照組以1%CMC溶液灌胃。末次給藥1 h后稱其體質量，斷頭處死，立即取出脾臟，用精密天平稱重測量臟器系數濕質量，計算脾臟指數。脾臟指數=脾臟重量（mg）/體重（g）[3]。

1.5.3 抗癌藥酒最大耐受量的評價 取健康的KM小鼠40只，體質量26 g左右，雌雄各半。實驗前禁食12 h不禁水, 灌胃給藥后。小鼠自由攝取餌和水。將樣品配制成4.2 g/mL濃度，1 d間隔4 h 2次灌胃，每次給藥容積是0.8 mL，給藥量為18 g/kg。給藥后連續觀察14 d。計算耐受倍數。小鼠的最大耐受倍數＝（每只小數的耐受藥量/小鼠的平均體重）×成人平均體重/成人每日用量[3]。

1.6 統計學分析

2 結果

2.1 抗癌藥酒抗腫瘤的作用

藥酒對小鼠肝癌體內給藥具有明顯療效，口服（10 mL/kg和20 mL/kg，PO×10）抑瘤率分別為43.2%和28.2%，差異具有統計學意義（P＜0.05，10 mL/kg PO×10），對照藥CTX（30 mL/kg，ip×10）抑瘤率為73.0%；證明動物模型成功。對小鼠路易斯肺癌，口服藥酒（10 mL/kg和20 mL/kg，PO×10）抑瘤率達44.26%和32.24%，差異具有統計學意義（P＜0.01，10 mL/kg PO×10），對照藥慈丹膠囊（1.5 g/kg，PO×10）抑瘤率為39.1%。實驗結果見表1，表2。

表1 口服抗癌藥酒對小鼠移植性腫瘤肝癌的作用

表1 口服抗癌藥酒對小鼠移植性腫瘤肝癌的作用

組別 劑量 動物數（n）給藥途經×次數體質量 瘤質量 抑瘤率（%） P給藥前 給藥后模型組 蒸餾水20 mL/kg 8 PO×10 18.7±0.46 30.7±2.99 3.41±1.72 － －對照組 白酒20 mL/kg 8 PO×10 18.7±0.46 27.8±1.86 3.26±1.15 4.2 ＞0.05 CTX組 30 mg/kg 8 iP×10 18.2±0.86 26.5±2.3 0.92±0.32** 73.0 ＜0.01藥酒組 20 mL/kg 8 PO×10 18.4±0.42 28.2±3.36 2.45±0.75 28.2 ＞0.05藥酒組 10 mL/kg 8 PO×10 18.7±0.41 29.4±2.13 1.94±0.82* 43.2 ＜0.05

表2 抗癌藥酒對小鼠移植性腫瘤路易斯肺癌的作用

表2 抗癌藥酒對小鼠移植性腫瘤路易斯肺癌的作用

組別 劑量 動物數（只）給藥途經×次數瘤質量 抑瘤率（%） P給藥前 給藥后體質量模型組 蒸餾水20 mL/kg 10 PO×10 19.3±0.97 21.8±1.22 1.83±0.91 － －白酒對照 白酒20 mL/kg 10 PO×10 19.5±1.06 21.9±1.11 1.75±0.20 4.4 ＞0.05慈丹膠囊 1.5 g/kg 10 PO×10 19.1±0.63 21.5±1.21 1.12±0.79* 38.8 ＜0.05藥酒 20 mL/kg 10 PO×10 18.5±1.94 20.18±1.83 1.24±0.60* 32.24 ＜0.05藥酒 10 mL/kg 10 PO×10 19.7±0.64 21.4±1.14 1.02±0.55** 44.26 ＜0.01

2.2 抗癌藥酒對小鼠脾指數的影響

與對照組比，藥酒的中劑量和高劑量組都能明顯提高小鼠脾指數，與對照組比較差異具有統計學意義（P＜0.05）。實驗結果見表3。

表3 藥酒對小鼠免疫活性（脾指數）的影響

表3 藥酒對小鼠免疫活性（脾指數）的影響

組別 劑量（mL/kg）動物數（只）給藥途經×次數 瘤質量 P溶劑對照組 15 PO×10 3.68±0.33 －低劑量組 1 15 PO×10 3.70±0.25 ＞0.05中劑量組 5 14 PO×10 3.90±0.36* ＜0.05高劑量組 10 15 PO×10 3.90±0.36* ＜0.05

2.3 抗癌藥酒最大耐受量的評價

限于給藥濃度和給藥體積，1 d內給予小鼠的最大量為18 g/kg，14 d內小鼠未出現明顯中毒癥狀及死亡，測得該藥物小鼠口服的最大耐受量為18 g/kg。

3 討論

近幾年，我國惡性腫瘤的發生率和死亡率明顯上升，已成為危害人民健康和生命的主要疾病。惡性腫瘤的化學治療是腫瘤治療的主要手段之一，但化療藥的毒副作用一直是醫務工作者和患者的棘手問題，嚴重影響著患者的生活質量。因此開發有效低毒的中藥抗癌藥是一個熱點。

酒本身就是一種良好的有機溶媒，有良好的穿透性，易于進入藥材組織細胞中，可以把中藥里的有效成分高效地提取出來，更好地發揮出生藥原有的作用。幾年來有很多癌癥患者服用了該藥酒，很大程度地延長了患者生存率，改善了生存質量。但其只是一個驗方，尚未做有關該藥酒的基礎研究。我們對該藥酒的抗癌作用、是否提高免疫力和安全性進行了評價。

通過對小鼠移植性腫瘤的模型觀察，抗癌口服藥酒具有一定的抑瘤作用，對小鼠肝癌抑瘤活性較強，抑瘤率達43.2%（10 mL/kg PO×10）；對小鼠路易斯肺癌抑瘤率達44.26%（10 mL/kg PO×10）。人體免疫功能的異常與癌癥有著密切的關系，該藥酒是否對免疫系統也有影響，我們通過指數來判斷效果。脾臟屬于外周免疫器官，具有重要的免疫調節作用，在維持免疫功能方面發揮重要作用。脾臟重量指數的改變能夠反映機體免疫功能的狀態。本實驗結果表明，該藥酒能夠提高小鼠脾臟重量指數，提高免疫器官的免疫功能，從而在機體抗癌作用中發揮作用。

我們對藥酒的安全性也進行了評價。首先進行了半數致死量（LD50）的實驗。由于該藥酒毒性小，無法測出LD50。我們對其進行了最大耐受量的評價，即1 d內給予動物最大給藥濃度和最大給藥體積來觀察藥物的安全性。限于給藥濃度和給藥體積，1 d內給予小鼠的最大量為為18 g/ kg，14 d內小鼠未出現明顯中毒癥狀及死亡，測得該藥物小鼠口服的最大耐受量為18 g/kg。小鼠的平均體質量為25 g。臨床患者用量為每天100 mL，相當于2 g粉末。按50 kg體質量計算，小鼠的最大耐受倍數（18/25）×（50000/2），為18000。耐受倍數100以上視為安全，表明本藥酒安全性非常好，是一個很有潛力的抗癌方劑。

本文對抗癌藥酒只做了浮淺的評判，有關該藥酒的作用機制等研究尚在進行中。

[1] 戰渤玉,車緒風,尉炳超.中藥酒劑的研究進展[J].中醫藥信息, 2001,27(3):120-122.

[2] 韓 銳.抗癌藥物研究與實驗技術(1版)[M].北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社,1997:370-380.

[3] 陳 奇.中藥藥理研究方法學(1版)[M].人民衛生出版社,1993:112-119;779-780.