惡性黑素瘤組織中Bmi-1及增殖細胞核抗原的表達

龐琳娜,張江安,于建斌,甄 希,徐文博

鄭州大學第一附屬醫院皮膚科鄭州 450052

#通訊作者,男,1962年5月生,博士,教授,主任醫師,研究方向:皮膚腫瘤,E-mail:yjbdoctor@sina.com

干細胞再生因子 Bm i-1是一種轉錄抑制因子,屬于轉錄因子多梳基因家族,在胚胎發育、神經干細胞及白血病干細胞的維持和自我更新過程中發揮關鍵的調控作用[1-3]。近年研究[4-6]表明,Bmi-1的高表達與多種腫瘤干細胞的自我更新及腫瘤的侵襲性關系密切。增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)是真核生物復制復合體的重要成分,具有協調DNA復制、調控細胞周期等多種生物學功能,與腫瘤的發生發展和惡性程度相關[7-9]。作者應用免疫組織化學方法檢測惡性黑素瘤(malignantmelanome,MM)、皮內痣組織中Bmi-1及PCNA蛋白的表達情況,探討二者在MM發生發展中的意義。

1 材料與方法

1.1 標本收集 從鄭州大學第一附屬醫院病理科2007年 1月至 2009年 9月存檔蠟塊中挑選病理診斷明確、臨床資料完整的標本共66例。其中MM 36例[男 19例,女17例,年齡 32～87(61.4±12.9)歲,病程4.0～28.0(15.7±7.1)個月;26例皮膚原發性黑素瘤,10例皮膚及皮外轉移性黑素瘤],皮內痣 30例[男 14例,女 16例,年齡 8～72(25.34± 22.81)歲,病程3.0～58.0(30.9±15.0)個月]。所有病例術前均未行化療或其他治療。

1.2 Bmi-1及PCNA的免疫組化SP法檢測 鼠抗人Bmi-1單克隆抗體(即用型)購自美國Upstate公司,PCNA單克隆抗體(即用型)、SP-9000免疫組化試劑盒和AEC顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。按照說明書步驟操作。用PBS液代替一抗作空白對照,用已知的陽性片作為陽性對照。光學顯微鏡下觀察組織標本的著色程度。Bmi-1與PCNA蛋白陽性表達均定位于細胞核內,呈紅色顆粒狀。高倍鏡下取 4個不同的視野,計數細胞總數及陽性細胞數[10]。按陽性細胞所占的百分比計分:陽性細胞率 ＜10%為 1分,10%～為 2分,50%～為3分,75%～為4分;按染色的強弱程度計分:陰性染色計為 1分,弱染色計為 2分,中等強度染色計為 3分,強染色計為 4分。根據二者的乘積判斷結果,＞4分為陽性表達。

1.3 統計學處理 采用SPSS 16.0進行分析,應用χ2檢驗、Fisher精確概率法比較MM和皮內痣組織中Bmi-1、PCNA蛋白陽性表達率,應用列聯系數rP分析MM組織中Bm i-1與PCNA蛋白表達的關聯性。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 2種組織中Bmi-1及PCNA蛋白的表達 Bmi-

1和PCNA蛋白主要在腫瘤細胞的胞核中表達,見圖1。MM、皮內痣組織中Bm i-1蛋白的陽性表達率分別為61.1%(22/36)、20.0%(6/30),差異有統計學意義(χ2=11.323,P=0.001);PCNA蛋白的陽性表達率分別為80.6%(29/36)、10.0%(3/30),差異有統計學意義(χ2=32.614,P＜0.001)。原發性黑素瘤和轉移性黑素瘤組織中Bmi-1蛋白的陽性表達率分別為57.3%(15/26)和70.0%(7/10)、Bmi-1蛋白的陽性表達率分別為73.1%(19/26)和100.0%(10/10),差 異均無統計學意義(P=0.706和0.155)。

圖1 2種組織中Bm i-1及PCNA蛋白的表達

2.2 MM組織中Bm i-1與PCNA蛋白表達的關聯性 見表1。

表1 MM組織中Bm i-1及PCNA陽性表達的關聯性 例

3 討論

作者的研究結果顯示,MM組織中Bmi-1蛋白的表達高于皮內痣組織,與文獻[11]報道結果一致。原發性黑素瘤和轉移性黑素瘤組織中Bmi-1蛋白的陽性表達率差異無統計學意義,提示 Bmi-1與MM轉移可能沒有直接關系,但由于病例數偏少,尚需進一步證實。另一方面,由于 Bmi-1已作為干細胞標志在多種腫瘤干細胞表達,該課題組前期的研究結果已提示干細胞標志物CD133、Nestin和CD 44以及腫瘤多藥耐藥基因 ABCG2[10-13]均在 MM中高表達,結合該研究再次提示 MM中可能存在腫瘤干細胞。

該研究結果顯示,MM組織中PCNA的陽性表達率高于皮內痣組織,但原發性黑素瘤與轉移性黑素瘤組織間其陽性表達率差異無統計學意義,提示二者之間的細胞增殖程度類似。

另外,該研究結果還顯示MM組織中Bmi-1與PCNA蛋白的表達有關,也即Bmi-1的高表達與腫瘤細胞的增生活躍相一致。因此推測Bmi-1和PCNA參與了MM的發生發展。

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