腦卒中后抑郁癥患者載脂蛋白 E水平檢測*

李 靜,宋景貴#,穆俊林,張朝輝,李文強

1)新鄉醫學院第二附屬醫院神經內科新鄉 453002 2)河南省生物精神醫學重點實驗室新鄉 453002 3)新鄉醫學院第二附屬醫院心身二科新鄉 453002

#通訊作者,男,1962年10月生,博士,教授,研究方向:腦器質性精神障礙,E-mail:songjg62@126.com

腦卒中后抑郁癥(post-stroke depression,PSD)是腦卒中后常見的并發癥之一,是腦卒中后情緒障礙的主要表現形式[1],是以情緒低落、自罪自責和睡眠紊亂等為主要表現的情感障礙性疾病。最新研究[2-4]表明載脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)與心腦血管性疾病相關,是動脈粥樣硬化和腦卒中的危險因素,同時ApoE基因與血管性疾病患者的抑郁情緒有關,許多血管性疾病患者均伴發有抑郁情緒[5],因此推測ApoE影響PSD的發生。該研究旨在了解PSD患者ApoE水平,從而為PSD的臨床治療提供新的客觀依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象 所有病例均為 2009年1月至 10月在新鄉醫學院第二附屬醫院神經內科住院的患者,共 67例,腦卒中診斷均符合文獻[6]診斷標準,均行頭顱CT或MRI檢查證實,抑郁癥的診斷均符合第3版中國精神疾病分類方案與診斷標準(CCMD-3)[7]。PSD組:共32例,1例標本發生溶血,實際入組 31例;男 18例,女 13例;年齡 43～76 (64.2±8.7)歲;病程3.0～50.0(18.6±10.2)d;文化程度:大學 7例,中學 13例,小學 11例。腦卒中非抑郁組:共 35例,2例標本發生溶血,實際入組33例;男19例,女14例;年齡43～78(64.5±11.6)歲;病程2.0～52.0(19.1±11.4)d;文化程度:大學 6例,中學 15例,小學 12例。

1.2 ApoE mRNA的測定 采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-real time PCR)檢測ApoEmRNA表達量。采用Primer 5.0軟件設計人ApoE引物,由大連寶生物工程有限公司合成。序列如下:上游為5'-GGGTCGCTTTTGGGATTACCTG-3',下游為5'-CAACTCCTTCATGGTCTCGTCC-3';GAPDH作為內參照,上游為5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3',下游為5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3'。按RNA提取試劑盒說明書中的操作步驟提取總RNA后逆轉錄為cDNA。逆轉錄反應體系為:莫洛尼鼠白血病病毒緩沖液5μL,普通型dNTP 1.25μL,核酸酶-游離水1.75μL。實時熒光定量PCR反應體系25μL:核酸染料(SYBRII)12.5μL,上、下游引物各1μL,cDNA溶液6μL,去離子雙蒸水4.5μL。反應條件:95℃預變性3min;95℃變性25 s,60℃退火30 s,72℃延伸1min,共40個循環。取目的基因閾值循環數(Ct值)倒數與內參Ct值倒數之比作為目的基因相對表達量。

1.3 血清ApoE蛋白水平測定 儀器采用上海楓嶺生物技術有限公司FTC-2000熒光定量基因擴增儀和芬蘭雷勃MK3全自動酶標儀;試劑盒為武漢中美科技有限公司產人ApoE試劑盒(產品編號: E0704h)。采用酶聯免疫吸附法檢測血清ApoE水平。將血清標本按ApoE酶聯免疫分析試劑盒說明書操作步驟測定,應用酶聯儀在450 nm波長處進行測量。

1.4 統計學處理 采用SPSS 13.0進行分析,數據均進行正態性檢驗和方差齊性檢驗,各組數據均符合正態分布且方差齊,2組間ApoEmRNA和蛋白水平的比較采用兩獨立樣本的 t檢驗,檢驗水準 α= 0.05。

2 結果

PSD組ApoEmRNA表達量低于腦卒中非抑郁組,而PSD組血清ApoE水平則高于腦卒中非抑郁組,見表1。

表1 2組患者ApoE mRNA表達量及血清ApoE水平比較

3 討論

目前對腦血管疾病的發病因素研究成為熱點之一[8]。而 PSD作為腦卒中后常見的精神障礙疾病,不僅給患者帶來了軀體和精神上的痛苦,而且增加了家庭和社會的負擔,增加病死率和卒中復發風險,降低患者回歸社會的比例[9]。因此,關于 PSD的相關研究越來越受到人們關注。

ApoE相對分子量約為34 000,是一個含有299個氨基酸、結合有磷脂的糖蛋白,正常人血漿ApoE水平為0.03～0.05 g/L。同時它是腦組織中最重要的載脂蛋白,由星形細胞和少突膠質細胞合成,存在于腦脊液的高密度脂蛋白樣脂蛋白殘粒中,參與腦組織中脂質/膽固醇的運輸與清除,在細胞膜及神經元網絡的維持、神經組織細胞再生、軸突及突觸修復或重建等方面起著重要作用[10]。有研究[11-12]表明ApoE不僅與血脂代謝及心腦血管疾病有關,而且與軀體疾病伴發的抑郁情緒有關,很多軀體疾病都伴發有不同程度的焦慮抑郁情緒,如ApoEε4等位基因在冠心病患者抑郁情緒的發生中起著不可忽視的作用。

該研究結果顯示:PSD患者外周血清ApoE水平高于腦卒中非抑郁組,而PSD患者ApoE mRNA相對表達量低于腦卒中非抑郁組。證實了 PSD患者ApoE水平存在異常,即外周血清ApoE水平增高,ApoEmRNA表達量降低。可能原因為:當PSD患者外周血清ApoE水平增時,高水平的ApoE可引起機體反射性調節,從而使機體單核細胞中ApoE mRNA表達量降低,進一步證實了ApoE與軀體疾病及其伴發的抑郁情緒有關。

總之,作者認為外周血清ApoE水平增高可為PSD的臨床診治提供參考。關于ApoE如何具體影響PSD的發生機制有待進一步研究探討。

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