EB病毒感染的免疫血清學檢測與生物學測定在鼻咽癌中的臨床應用價值

馬德佳，何新發，李燕妮

（玉林市紅十字會醫院檢驗科，廣西 玉林 537000）

人類皰疹病毒(EB病毒)是一種重要的感染人類的DNA病毒，它通過密切接觸而感染人類，它在全球普遍存在，90%以上的人在3～5歲就感染過EB病毒，它不僅與中國南方鼻咽癌(NPC)有關，還與淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、系統性紅斑狼瘡和免疫功能降低后的淋巴增生性疾病有關[1]，而且正常人群也有一定程度的陽性率，所以多數EB病毒抗體陽性者也未必是NPC患者，且不一定發生NPC[2]。多數學者認為EB病毒可能是惡性淋巴瘤和鼻咽癌的病因[3]。NPC多見于中國南方，全球80%的NPC發生在中國南方和東南亞地區，與EB病毒感染、遺傳及環境因素關系十分密切；EB病毒的血清學特異抗體及生物學EBV-DNA的升高往往在臨床發現腫瘤之前，NPC的早期診斷與臨床分期對放療的療效意義重大，病期越早療效越高。目前用于NPC血清學及生物學輔助診斷與監測的指標較多，但大部分對早期診斷、臨床分期、療效監測和預后判斷應用價值不大。本研究探討和評價4種最常用的EB病毒抗體及EBV-DNA含量單獨檢測以何者為良，以及采用何種優化組合在早期診斷、臨床分期、療效監測、轉移、復發和預后判斷中最實用、最客觀、最具代表性、最有效，以期提高EB病毒血清學及生物學在NPC中的臨床應用價值。

1 材料與方法

1.1 標本 2006～2009年本院收治的168例(其中男133例，女35例，年齡25～74歲，平均45歲)未經治療過的病理確診的NPC患者、124例其他疾病患者(其中鼻息肉40例，慢性鼻咽炎30例，頸部淋巴結炎14例，頭頸部惡性淋巴瘤40例)和174例(男151例，女23例，年齡23～70歲，平均42歲)經全面體檢證實健康的成年人血清和血漿。

1.2 方法 ELISA法檢測EBNA1-IgA、Zta-IgA、VCA-IgA試劑均由廣東省中山生物工程有限公司神農有限公司提供；ELISA法檢測EA-IgA試劑由北京貝爾生物工程有限公司提供；熒光定量PCR法檢測血漿EBV-DNA試劑由中山大學達安基因股份有限公司提供；檢測與測定的操作嚴格按試劑盒說明書進行，檢測儀器為雷杜RT-6000酶標儀、達安PCR分析儀。

1.3 臨界值的確定 根據168例鼻咽癌患者和174例健康成年人血清或血漿在不同相對吸光度值或病毒拷貝數所計算出的靈敏度和特異性繪出兩條曲線，按照交接點的所在確定為臨界值，大于臨界值即為陽性。

1.4 統計學分析 計數資料率的比較用χ2檢驗，使用SPSS12.0統計軟件進行數據的分析統計。

2 結果

2.1 不同人群4種最常用的EBV抗體和EBV-DNA的可疑陽性、陽性人群情況 4種最常用的EBV抗體和EBV-DNA的陽性人群鼻咽癌組分別與鼻息肉組，慢性鼻咽炎組、頸部淋巴結炎組及正常成年人對照組比較差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)；但與頭頸部惡性淋巴瘤組比較差異無統計學意義(P＞0.05)，見表1。

2.2 4種最常用的EBV抗體和EBV-DNA的單項檢測的敏感度(或靈敏度)、特異度、陽性預測值、陰性預測值、陽性似然比和優勢比 血漿EBV-DNA的敏感度為93.1%，特異度為97.6%；血清學的EBNA1-IgA的敏感度為93.0%，特異度為93.1%最高，見表2。

2.3 4種最常用的EBV抗體兩兩與EBV-DNA聯合檢測的敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值、陽性似然比、優勢比 EBNA1-IgA和Zta-IgA與EBV-DNA聯合檢測的敏感度為91.33%，特異度為97.6%，陽性預測值為0.9789，陰性預測值為0.8016，陽性似然比為86.1875，優勢比為826.0000(效果最佳)，見表3。

表1 不同人群4種最常用的EBV抗體和EBV-DNA的可疑陽性、陽性人群情況比較[例(%)]

表2 4種最常用的EBV抗體和EBV-DNA的單項檢測結果

表3 4種最常用的EBV抗體兩兩與EBV-DNA聯合檢測結果比較

3 討論

與EBV感染有關的疾病很多，NPC與EBV感染關系特別密切，多數學者認為EBV可能是惡性淋巴瘤和鼻咽癌的病因。

近年來，隨著診療技術的提高，NPC的診斷和治療有了很大的進展，5年生存率大大提高，但由于早期診斷、臨床分期、療效判斷和預后預測等方面仍不夠理想，而NPC的早期診斷與臨床分期對放療的療效意義重大，病期越早，療效越高，病期越晚，療效越低。近年來的研究表明，與EBV感染相關的免疫血清學與生物學標志產物作為NPC早期篩查、輔助診斷、臨床分期、療效判斷和預后預測有著獨特的優勢。

正常人群EBV的血清學與生物學標志產物有一定程度的陽性率，絕大多數NPC癌細胞內寄居了EBV，所以健康成人與NPC患者不能依靠血清或血漿中是否有EBV抗體或EBV-DNA作為鑒別依據，況且各種EBV抗體存在不同水平的靈敏度和特異度，要看EBV感染的類別和抗體、EBV-DNA水平的高低，甚至鼻咽部惡性淋巴瘤EBV抗體及EBV-DNA也有較高的陽性人群，對EBV的血清學與生物學標志產物陽性率高的要有充分可靠的手段予以確認。

EBV感染B淋巴細胞分為潛伏感染和溶解性感染兩種，潛伏感染有三型，三型感染都表達EBNA1抗原，所以選用EBNA1抗原免疫應答產生的各類抗體作為EBV感染的血清學指標最具代表意義。

EBV感染產生的IgG類抗體因為半衰期長，即使健康成人或EBV被徹底清除也會有較長時間較高滴度的IgG類抗體，在NPC的輔助診斷方面沒什么價值；而IgA類抗體往往水平較高，針對性或特異性較強，所以在臨床中建議NPC的輔助診斷應用IgA類血清學抗體。

1976年Henle等[4]就指出，NPC患者血清中具有多種和較廣的抗EBV抗體譜。血清學的免疫抗體檢測已廣泛的應用于NPC的診斷與篩查[5-6]，由于NPC的主要表現是EBV潛伏感染出現三個時相，首先表達即早期抗原Zta，接著表達早期抗原EA，最后淋巴細胞的核膜破裂，合成表達了衣殼抗原VCA及膜抗原MA，這一過程有部分會出現流產，不產生衣殼抗原及膜抗原，釋放出來的EBV合成完整的病毒顆粒后又吸附和侵入B淋巴細胞及其他細胞，在這一轉化過程中病毒基因組被擴大。由此可見，傳統上選用VCA或MA抗原免疫應答產生的各類抗體作為EBV感染篩查試驗指標有一定缺陷，而選用Zta抗原免疫應答產生的各類抗體可作為EBV從潛伏期感染到溶解性感染轉折點的血清學指標，優于VCA。本研究顯示Zta的敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值、陽性似然比、優勢比均高于VCA。

此外，VCA-IgA抗體和EA-IgA抗體在體內半衰期較長，即使體內EBV被消除，仍有較長時間存在較高滴度，不能實時反映腫瘤的消長情況。尚無證據可顯示，它們作為監測NPC治療后轉移、復發的指標，且與NPC分期無明顯相關[7]。血漿EBV-DNA水平對NPC的診斷、轉移、復發和預后的預測均有一定意義[8]。本研究也顯示EBV-DNA的敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值、陽性似然比、優勢比等臨床應用價值指標均為最高。

因為對EBV病原的測定操作要求高，設備及試劑昂貴等，應用受到限制，EBV感染的免疫血清學檢測仍是目前NPC早期篩查、早期診斷最常用的手段。由于NPC主要表現是EBV潛伏感染伴小量溶解性感染，傳統VCA和EA免疫熒光法或免疫酶法(選用溶解性感染的表達抗原)顯而易見，針對性不強，而且難以確定兩個滴度之間更微小的數值，結果判斷上欠客觀。而新一代的EBV-IgA ELISA試劑盒選用了潛伏感染的主要表達抗原EBNA1，克服了傳統方法及血清學指標的不足，血漿游離EBV-DNA更具優勢，為NPC的早期發現、早期診斷、臨床分期、療效監測和預后判斷提供更高價值的手段。

基于NPC患者EBV血清學及生物學的特點以及方法學的局限性，血清學與生物學指標的單項檢測在正常人群和NPC中存在不同程度的假陽性、假陰性，即不同水平的敏感度、特異性、陽性預測值、陰性預測值，選擇最有效的單項或聯合檢測為臨床提供更有價值的手段尤為必要，檢測EBNA1-IgA、VCA-IgA、EA-IgA、Zta-IgA、EBV-DNA有互補作用[9]。本研究顯示單項的EBNA1-IgA和血漿EBV-DNA定量檢測價值最高，而EBNA1-IgA、Zta-IgA、EBV-DNA定量聯合檢測進一步提高了陽性預測值、陽性似然比和優勢比，這一組合大大地減少漏檢和誤檢，最為客觀，最具代表性且最有效。

[1] Macsween KF,Crawford DH.Epstein-Barr Virus-recent advance[J].Lancet Infect Dis,2003,3(3):131-140.

[2]鄧 洪,曾 毅,鄭裕明,等.自然人群413164人鼻咽癌血清學普查[J].中國癌癥雜志,2003,13(2):109-111.

[3]區寶祥,曾 毅.鼻咽癌病因和發病學的研究[M].北京:人民衛生出版社,1985:2-15.

[4]Henle G,Henle W.EBV-specific IgA serum antibodies as an outstanding feature of NPC[J].Int J Cancer,1976,17:1-7.

[5]李錦添,宗永生.鼻咽癌的病理改變與血清中EBV VCA-IgA抗體滴度的關系[J].中華病理雜志,1986(15)):122-125.

[6]Zong YS,Sham JS,Ng MH,et al.Immunoglobulin A against Viral Capsid antigen of Epsteirr Barr Virus and indirect mirror examination of the nasopharynx in the detection of asymptomatic nasopharyngeal carcinoma[J].Cancer,1992,69:3-7.

[7]Hsh MM,Hsu WC,Sheen TS,et al.Specific IgA antibodies to recombinant early and nuclear antigens of Epsteirr-Barr virus in nasopharyngeal carcinoma[J].Clin otolaryngol,2001,26(4):334.

[8]李寧紅,邵建永,馮惠霞,等.鼻咽癌患者血漿游離EBV-DNA的定量檢測及其臨床意義[J].中國腫瘤臨床,2004,31(8):421-424.

[9]Dardari R,Hinderer W,Lang D,et al.Antibody responses to recombinant Epsteirr-Barr Virus antigens in nasopharyngeal carcinoma:Complementary test of ZEBRA protein and early antigens P54 and P138[J].Clin Microbiol,2001,39(39):3164-3170.