乳腺癌組織中Ki67及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)

劉小青 李 玉 徐光輝 (連云港市第一人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，江蘇 連云港 222000)

乳腺癌是中國(guó)婦女近年來(lái)增長(zhǎng)幅度最大的惡性腫瘤之一。Ki67是較為肯定的核增殖標(biāo)志，其表達(dá)、變化可反映腫瘤的增殖活性〔1〕。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在腫瘤組織血管形成中發(fā)揮重要作用，與腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，本研究用SP免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織及乳腺良性病變中Ki67及VEGF的表達(dá)，探討其與臨床因素之間的相關(guān)性及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本及主要試劑 所有49例標(biāo)本均來(lái)自本院2007年5月至2008年9月住院擬手術(shù)的病人，入院前均無(wú)放化療治療史，并取得患者同意簽署組織樣本使用同意書(shū)。其中Ⅰ期13例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，并設(shè)乳腺良性疾病對(duì)照20例。Ki67、VEGF一抗及SP試劑盒均購(gòu)自Ⅰnvitrogen公司;

1.2 方法 石蠟切片常規(guī)脫蠟，高壓煮沸2 min進(jìn)行抗原熱修復(fù)處理，3%H2O2孵育5 min以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，PBS沖洗 3 min/3次，加入一抗 Ki67、VEGF，4℃過(guò)夜，PBS沖洗3 min/3次加入二抗孵育1 h，PBS沖洗，加DAB顯色，自來(lái)水充分沖洗，梯度酒精脫水，二甲苯透明，封片。陽(yáng)性結(jié)果呈棕黃色或棕褐色顆粒，不同生物學(xué)指標(biāo)在細(xì)胞中的著色部位不同，Ki67及VEGF陽(yáng)性細(xì)胞分別為細(xì)胞核顯色和細(xì)胞質(zhì)顯色，Ki67、VEGF切片隨機(jī)觀察5個(gè)中倍視野(×200)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，將各視野中陽(yáng)性細(xì)胞的平均百分比作為該切片的陽(yáng)性細(xì)胞百分比。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件 χ2檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)分析進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果

2.1 Ki67、VEGF在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá) 見(jiàn)圖1。

2.2 Ki67及VEGF在乳腺組織中的陽(yáng)性表達(dá)情況 49例乳腺癌標(biāo)本，Ki67陽(yáng)性37例，VEGF陽(yáng)性者34例，而在20例乳腺良性病變組織中Ki67及VEGF陽(yáng)性分別為4例及2例，乳腺癌組織中Ki67、VEGF的表達(dá)率與乳腺良性病變組織比較差異顯著(P＜0.01)。

圖1 乳腺癌組織Ki67、VEGF表達(dá)(DAB，×100)

表1 Ki67、VEGF陽(yáng)性表達(dá)與乳腺癌臨床病理的關(guān)系

2.3 Ki67、VEGF的表達(dá)與乳腺癌臨床病理的關(guān)系 見(jiàn)表1，Ki67的表達(dá)與乳腺癌的臨床分期有關(guān)(P＜0.05)，與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況無(wú)關(guān)(P＞0.05)，VEGF與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況均有關(guān)(P＜0.05)。

3 討論

Ki67抗原最早在1983年由德國(guó)學(xué)者Gerdes等在霍奇金淋巴瘤源性細(xì)胞系中，使用鼠單克隆抗體抗核抗原的研究中發(fā)現(xiàn)，隨后以Gerdes所在學(xué)校的名稱(chēng)Kiel Universily命名，Ki67是目前較為肯定的核增殖標(biāo)記物，它在細(xì)胞周期的G1后期開(kāi)始表達(dá)，S期和G2期表達(dá)增加，在M期達(dá)到高峰，有絲分裂結(jié)束后迅速降解，且不表達(dá)于DNA修復(fù)狀態(tài)的細(xì)胞〔2〕。

目前在乳腺癌中關(guān)于Ki67探討的焦點(diǎn)集中在該指標(biāo)能否作為乳腺癌預(yù)測(cè)及預(yù)后判斷的指標(biāo)，既往的多個(gè)研究表明Ki67與多種腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移、及預(yù)后有關(guān)〔3～5〕。Klintman 等〔6〕在2010年研究報(bào)告表明Ki67是雌激素受體陽(yáng)性及組織病理分級(jí)2級(jí)的淋巴結(jié)陰性乳腺癌患者的預(yù)后因素，并提出Ki67也許成為病理分級(jí)的補(bǔ)充指標(biāo)。在本研究中，乳腺癌組織中Ki67的陽(yáng)性率為75.5%，與其他學(xué)者的報(bào)道相近，Ki67在乳腺癌組織與乳腺良性病變組織中的表達(dá)差異顯著，并且本研究還顯示了Ki67的表達(dá)與腫瘤臨床分期呈正相關(guān)，隨著臨床分期的增高，Ki67的陽(yáng)性率明顯增高，表明Ki67與乳腺癌的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)相關(guān)。本研究還顯示了Ki67的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況無(wú)關(guān)，但因本研究樣本例數(shù)較少，還需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步探討。

VEGF是血管生成的主要調(diào)控因子，特異性的作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞的有絲分裂，是近年來(lái)活躍于腫瘤研究中的熱點(diǎn)，抗腫瘤血管生成的分子靶向藥物在不少實(shí)體瘤的治療中取得了較好的效果，這表明腫瘤中VEGF存在異常表達(dá)，本研究中乳腺癌組織中VEGF的陽(yáng)性率為69.4%，VEGF的表達(dá)率與乳腺良性病變組織比較差異顯著，VEGF與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況均有關(guān)。這符合惡性腫瘤發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移的生物學(xué)規(guī)律。更有學(xué)者〔7〕報(bào)道了在乳腺癌中Ki67和VEGF的表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系。

1 Papantoniou VJ，Souvatzoglou MA，Valotassiou VJ，et al.Relationship of cell proliferation(Ki67)to99mTc-(v)DMSA uptake in breast cancer〔J〕.Breast Cancer Res，2004;6(2):56-62.

2 Beresford MJ，Wilson GD，Makris A.Measuring proliferation in breast cancer:practicalities and applications〔J〕.Breast Cancer Res，2006;8:216.

3 Mullerat J，Deroide F，Winslet MC，et al.Proliferation and p53 expression in anal cancer precursor lesions〔J〕.Anticancer Res，2003;23(3C):2995-9.

4 Liu M，Lawson G，Delos M，et al.Predictive value of the fraction of cancer cells immunolabeled for proliferating cell nuclear antigen or Ki67 in biopsies of head and neck carcinomas to identify lymph node metastasis:comparison with clinical and radiologic examinations〔J〕.Head Neck，2003;25(4):280-8.

5 Tut VM，Braithwaite kL，Angus B，et al.Cyclin D1 expression in transitional cell carcinoma of the bladder:correlation with p53，waf1，pRb and Ki67〔J〕.Br JCancer，2001;84(2):270-5.

6 Klintman M，Bendahl PO，Grabau D，et al.The prognostic value of Ki67 is dependent on estrogen receptor status and histological grade in premenopausal patients with node-negative breast cancer〔J〕.Mod Pathol，2010;23(2):251-9.

7 Nakopoulou L，Stefanaki K，Panayotopoulou E，et al.Expression of the vascular endothelial growth factor receptor-2/Flk-1 in breast carcinomas:correlation with proliferation〔J〕.Hum Pathol，2002;33(11):1061-3.