正交試驗法優選芪參咀嚼片藥材提取工藝

陳云

(廣東省雷州市人民醫院，廣東 湛江 524200)

芪參咀嚼片的處方來源于臨床經驗方，由黃芪、西洋參、紅景天等藥材組方，具有益氣固表、斂汗固脫、活血、通脈平喘功效，臨床上用于治療氣虛乏力、中氣下陷、氣虛血瘀、胸痹心痛、表虛自汗等癥，效果滿意。臨床上以湯劑服用，煎藥過程麻煩，耗時長，患者服藥順應性差。處方中黃芪為君藥，黃芪甲苷為其主要活性成分之一。筆者擬將此處方的藥材經過現代提取工藝提取制成芪參咀嚼片，以減小服藥量、創新劑型、提高臨床療效、提高患者順應性，并根據方中藥物的性質和現代藥理學研究結果，以黃芪甲苷的含量及總固體得率為指標，采用正交試驗法優選藥材的提取工藝。

1 儀器與試藥

Waters 2695/2410型高效液相色譜儀。藥材均購自廣州致信中藥飲片有限公司，經檢驗符合我國藥典規定；黃芪甲苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110781－200512)；D101型大孔吸附樹脂(天津南開大學化工廠)；甲醇、乙腈(色譜純，美國Fisher公司)；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 黃芪甲苷含量測定

2.1.1 色譜條件與系統適用性試驗[1]

色譜柱：Kromasil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈－水(38∶62)；流速：1.0mL/min；進樣量：20μL；檢測器漂移管溫度：80℃；載氣壓力：35 psi；柱溫：30℃。在該色譜條件下，黃芪甲苷與其他峰達基線分離，理論塔板數、拖尾因子均符合要求，色譜圖見圖1。

2.1.2 溶液制備[2]

按處方量稱取藥材提取，取提取液并定容至1 000mL量瓶中，量取各樣品溶液約20 mL，用水飽和的正丁醇溶液振搖提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌兩次，每次40 mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5mL使溶解，放冷，通過D101型大孔樹脂柱(內徑1.5 cm，直徑12 cm)，以水50mL洗脫，棄去水液，再以40%的乙醇30mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解，并轉移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，作為供試品溶液。按處方量稱取除黃芪外的其余藥材進行提取，按上述方法制備陰性對照品溶液。精密稱取干燥至恒重的黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.44mg的溶液，搖勻，即得對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.1.3 方法學考察

線性關系考察：精密吸取對照品溶液5，10，15，20，25，30μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積對數lg A為縱坐標、進樣量對數值lg M為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程lg A=9.33+1.46 lg M，r= 0.999 3(n=6)。結果表明，黃芪甲苷進樣量在2.200～13.20μg范圍內與峰面積線性關系良好。

重復性試驗：精密稱取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并測定。結果的 RSD為0.3%(n=6)，表明方法重復性好。

2.1.4 樣品含量測定

分別精密吸取對照品溶液10μL和20μL，以及供試品溶液20μL，注入液相色譜儀中，測定黃芪甲苷峰面積，以外標兩點法對數方程計算黃芪甲苷含量，即得。

2.2 總固體得率測定

精密量取各提取液100mL，置已恒重的蒸發皿內，水浴蒸干，置105℃烘箱中，干燥3 h，取出，置干燥器中，冷卻0.5 h，稱重，置105℃烘箱中，干燥1 h至恒重，計算總固體得率。

2.3 正交試驗設計與結果

2.3.1 正交試驗設計

根據方中藥物的性質和現代藥理學研究結果，以測定黃芪甲苷的含量和總固體得率為指標，加水倍數為因素A，提取時間為因素B，提取次數為因素C，用正交試驗優選芪參咀嚼片提取工藝條件。根據預試驗結果，選取影響提取效果的因素和水平，見表1。

表1 因素水平表

2.3.2 結果分析

正交試驗結果見表2和表3。由方差分析可以看出，影響提取效果因素的大小順序為C＞A＞B。由于提取時間是影響最小的因素，所以提取時間定為0.5 h。比較各因素的極差值，綜合分析結果，確定黃芪等藥材較優的提取工藝條件為A3B1C3，即加水8倍，提取3次，每次0.5h。試驗的數據表明，因素A、因素C的水平值都落在極值上，為考察水平值更大時對提取效果的影響，故進行加水量和提取次數的比較驗證試驗。

2.3.3 比較驗證試驗

按處方量稱取黃芪等藥材，加水，按表4方法提取，濾過，定容至1 000mL，備用。精密量取各樣品溶液20mL，照溶液制備方法操作，測定各提取液中黃芪甲苷的含量；精密量取各提取液100mL，照2.2項下條件測定各提取液中總固體得率。結果見表4。可見，在其他兩個因素不變的情況下，無論是采用加水量為8倍與10倍提取，還是采用3次或4次提取時，總固體得率和黃芪甲苷含量均無顯著差異。綜合考慮到生產成本、提取效率，確定芪參咀嚼片藥材的提取工藝條件為A3B1C3，即加水8倍量，提取3次，每次0.5 h。

表2 正交試驗結果

表3 方差分析結果表

表4 比較驗證試驗方法與結果

3 討論

在考察樣品藥材的提取工藝過程中，預試驗篩選了加水量的考察范圍是4，6，8倍藥材量，提取次數為1，2，3次。因為藥材中有效成分的溶出達到飽和時，已不再受溶劑加水量、提取次數的影響。

目前，中藥復方制劑的提取、精制工藝條件的選擇多以提取、精制前后有效成分含量的改變為指標，根據藥物中有效成分及雜質的理化性質，合理選擇提取、精制方法。這對于基礎研究比較深入、所含成分的理化性質和藥理作用較明確的藥物是可行的。而對于基礎研究相對薄弱、所含有效成分不夠明確的藥物，采用靈敏、特異的藥效指標、有效部位群總量是比較好的選擇。總固體是中藥制劑發揮療效的物質基礎，在起活性的物質基礎未知的情況下，并不是說總固體越少就越好，因此筆者以總固體得率為篩選提取工藝的一個指標。本試驗通過系統地研究芪參咀嚼片的提取工藝，建立了操作簡單、合理可行的提取工藝，這為其提供了一種生產周期短、生產成本較低、操作簡便且無需增加企業設備投資的工藝參考。

[1]劉 曄，吳 樂.RP－HPLC法測定黃芪中黃芪甲苷的含量[J].中草藥，1998，29(S)：83.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：化學工業出版社，2005：212－213.