3種單糖對大鱗副泥鰍精子活力的影響

蘇應兵（長江大學動物科學學院，湖北 荊州434025）

廖詠玲（中國水產科學研究院長江水產研究所，湖北 荊州434000）

楊代勤，林 洋（長江大學動物科學學院，湖北 荊州434025）

大鱗副泥鰍 （Paramisgurnusdabryanus）屬鯉形目 （Cypriniformes）鰍科 （Cobitidae）副泥鰍屬（Paramisgurnus），其體型酷似泥鰍，體色多為黃色或黃褐色，鱗片較泥鰍的大。因肉質細嫩、味道鮮美、營養豐富、生長較快，目前在國內外市場廣受歡迎[1]。隨著養殖的發展，苗種需求量與日劇增，特別是人工繁殖的優質苗種緊缺，不能滿足市場需求，為此不少學者對大鱗副泥鰍的人工繁殖進行了研究[2-8]，但至今對大鱗副泥鰍精子活力的研究報道較少。在大鱗副泥鰍的人工繁殖中還發現雄鰍的數量明顯少于雌鰍，這給批量人工繁殖大鱗副泥鰍苗帶來不便[2]。本研究探討了3種單糖 （葡萄糖、半乳糖和果糖）對大鱗泥鰍精子的激活效果，以選出最佳激活劑及最適激活濃度，為規模化苗種的人工繁殖、人工授精及雜交育種提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

雄性大鱗副泥鰍來源于長江大學水產養殖基地，體長15～25cm，體重30～60g，體質健壯，腹大柔軟，富有彈性，有透明感，膚色微紅。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗溶液配制

各試驗溶液濃度梯度設置詳見表1。

表1 試驗溶液濃度梯度配置

1.2.2 精子的采集

催產后殺死泥鰍，取其左側精巢 （左精巢飽滿、易搗碎，同時在等量的精液中，左精巢精子數目亦較右精巢多[9]），搗碎后用定性濾紙吸去水分和血液，用冰低溫保存待用，觀察試驗應在20～30min內做完。

1.2.3 精子活力的測定

取干燥潔凈載玻片，吸取1滴試驗液于玻片上，置于10×40倍顯微鏡下，用潔凈探針挑取少量精液均勻涂于試驗液中，即刻用秒表計時。每個梯度做3次平行，取平均值作為觀測數據。精子活動等級參考吳清毅等[10]的方法。本研究只觀測精子快速運動時間和壽命時間。

1.3 數據處理

采用Excel 2003和SPSS 12.0軟件進行統計分析。試驗所得數據以平均值±標準差表示。以Duncan法進行多重比較以檢驗其差異顯著性，顯著水平為0.05。

2 結果與分析

2.1 葡萄糖溶液對大鱗副泥鰍精子活力的影響

由表2可知，葡萄糖溶液濃度從0.1%～0.8%變化時，大鱗副泥鰍精子快速運動時間呈上升趨勢，在0.8%時達到最大，為62s，與其他組差異顯著。濃度高于0.8%時精子快速運動時間隨濃度增大而縮短。當葡萄糖濃度在3.0%時精子快速運動時間為0，若滴加不同量的蒸餾水后，一些精子被激活，出現慢速運動或原地顫動，直至死亡。精子壽命的變化趨勢和精子快速運動時間基本一致，在葡萄糖溶液濃度為0.8%時達到最大，為95s，以后也隨濃度增大而縮短。

2.2 半乳糖溶液對大鱗副泥鰍精子活力的影響

由表3可知，當半乳糖溶液濃度為0.1%～0.5%時，精子快速運動時間隨濃度增加而上升，濃度為0.5%時大鱗副泥鰍精子快速運動時間達到最大，為70s，與其它組差異顯著，大于在葡萄糖溶液中的最長快速運動時間62s。當葡萄糖濃度在3.0%時精子快速運動時間為0，若滴加不同量的蒸餾水后，一些精子被激活，出現慢速運動或原地顫動，直至死亡。精子壽命的變化趨勢和精子快速運動時間基本一致，在半乳糖溶液濃度為0.5%時達到最大，為102s，以后隨濃度增大而縮短。

表2 不同濃度葡萄糖溶液下大鱗副泥鰍的精子活力

表3 不同濃度半乳糖溶液下大鱗副泥鰍的精子活力

2.3 果糖溶液對大鱗副泥鰍精子活力的影響

由表4可知，果糖溶液濃度由0.1%上升到0.3%時，精子快速運動時間也由37s上升到最大，為51s。當濃度繼續增加，大鱗副泥鰍精子快速運動時間表現出緩慢縮短的趨勢。果糖溶液濃度為0.5%時，精子快速運動時間比0.3%濃度組有所下降，但無顯著性差異。精子壽命的變化趨勢和精子快速運動時間基本一致，在果糖溶液濃度為0.3%時達到最大，為88s，以后也隨濃度增大而下降。當濃度在3.0%時精子活力完全被抑制，若滴加不同量的蒸餾水后，一些精子被激活，出現慢速運動或原地顫動，直至死亡。

3 討論

精漿中的碳水化合物主要是一些單糖，如葡萄糖、果糖、半乳糖等[11]。Gardiner[12]認為，體外受精魚類精子具有三羧酸循環代謝的能力，可以通過氧化作用利用細胞外源性碳水化合物，尤其是葡萄糖、半乳糖和果糖[13]。而且這3種單糖是精子活動存活的可選擇和次級的能源[14]。已有研究發現適宜濃度的葡萄糖可以明顯地延長虹鱒 （Oncorhynchusmykiss）[12]、 白斑狗魚 （Esoxlucius）[15]、丁魚歲 （Tincatinca）[16]、烏原鯉 （Procyprismterus）[10]、 鯉魚（Cyprinuscarpio）[11]、 團頭魴（Megalobramaamblycephala）[11]、彩鯽（Cruciancarp）[17]、泥鰍 （Misgurnusanguillicaudatus）[18]精子活動時間；適宜濃度的葡萄糖和果糖可以明顯地延長中華鱘 （AcipensersinensisGray）[19]、凹目白鮭 （Coregonusautumnalis）[20]精子運動時間。本研究結果顯示，大鱗副泥鰍精子快速運動和壽命在3種單糖溶液中均表現出相似的變化趨勢，即適宜濃度的葡萄糖、半乳糖、果糖可以使精子快速運動時間和壽命明顯延長，說明單糖在維持精子活力中的作用非常顯著，這與上述研究結果一致。本研究結果還表明，在這3種單糖溶液中，大鱗副泥鰍精子快速運動和壽命的時間均以在0.5%半乳糖溶液中為最長，說明大鱗副泥鰍精子對這3種單糖的吸收、利用存在差別。

表4 不同濃度果糖溶液下大鱗副泥鰍的精子活力

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