高效液相色譜定量分析的誤差來源與消除

石曉光

浙江匯能動物藥品有限公司，浙江 杭州 310013

要提高分析結果的準確度，必須考慮在分析過程中可能產生的各種誤差，采取有效措施，將這些誤差減到最小。

1 樣品處理過程中誤差的來源

1.1 樣品的前處理

樣品的處理包括稱量、溶解到標記稀釋等步驟。樣品處理要盡量減少操作者的技術問題帶來的誤差，樣品的稀釋次數、稀釋工具都是誤差的來源[1]，見表1、表2。

表1 溶液的制作

表2 目標成分稀釋到容器上的可能性

1.2 手動進樣誤差的來源

作為進樣主力，仍是手動進樣器。如果使用方法不當，會引起色譜圖問題，標準曲線無線性，重復性差。定期對進樣閥清洗和保養，可避免由進樣閥引起的污染和堵塞，排除干擾峰，提高準確性。進樣量要大于定量環的3倍以上，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導致定量分析的誤差[2]。

2 儀器系統誤差的來源

2.1 輸液泵

在分析中因輸液泵的故障[3]。而引起分析結果的不準確是很常見。如塵埃、垃圾等污染物進入輸液流道內，引起配管堵塞，單向閥污染引起壓力不穩，密封墊損壞導致系統漏液，柱塞干損壞引起無流動相流出，壓力波動。保證輸液泵的穩定和正常運行對分析結果的準確性、降低誤差是非常重要的。

2.2 檢測器

用強溶劑清洗檢測器，消除污染和堵塞[3]。流動相脫氣后使用，防止基線噪音，但氧氣在流動相中的溶解度，跟流動相溶劑組成變化、溫度上升、壓力降低等因素的變化而析出，使流路內產生氣泡，向檢測器施加背壓防止氣泡的產生，見表3。

表3 檢測器與耐壓

2.3 流動相

引起流動相組成變化：配置引起的誤差、線上混合泵失靈引起的比例誤差、放置后組成的變化。例如使用揮發性溶劑，真空脫氣引起揮發性成分的損失；流動相吸收空氣中二氧化碳引起PH改變[4]。流動相組成變化對tR值大的組分影響最大。反相溶劑微小的變化，會引起保留時間相當大的變化。

2.4 溫度的變化

柱上沒有恒溫裝置，通常會因溫度引起保留時間的變化，應使用柱溫箱，另外保持室內最小溫差。

2.5 色譜柱

流動相對色譜柱進行沖洗30min后，每隔10min～20min重復進相同的樣品，如保留時間不變表明以平衡。應注意，柱可能對某一組分平衡，而對其它組分尚未平衡。因此只有對所有的組分都平衡，才能正式分析樣品。

2.6 分離

液相色譜分離引起的誤差可用標準色譜圖對照鑒別。有時樣品本身發生變化，雜質干擾。處理時應注意基線的噪音和漂移、峰間的分辨率、峰形（拖尾、展寬等）。

3 結論

提高操作技能，工作認真謹慎，仔細觀察可以控制的誤差，盡量把能控制的誤差減小到最低，分析結果的準確度將更高。

[1]劉珍.化驗員讀本[M].4版.化學工業出本社.上冊:1-3：55-59.

[2]陳靜，薛峰.液相色譜的故障分析與維修[J].Equipment Manufactring Technology，2007，7:142，156.

[3]趙立平.液相色譜儀器的維護與故障消除[J].現代儀器，2004，2:56，58.

[4]吳方迪.色譜儀器維護與故障排除[M].化工工業出版社，2001:186-187.