多靶位FISH技術在膀胱癌診治中的應用進展

余 義，黃紅衛

(南昌大學第二附屬醫院，南昌330006)

膀胱癌是泌尿系最常見的惡性腫瘤，由于膀胱癌發病率高以及需要對腫瘤術后復發的監測，它已經成為治療花費最高的腫瘤之一［1］。尿細胞學分析為診斷膀胱癌的主要實驗室檢查，其特異性強，但敏感性較低。最近研究表明尿細胞學檢查實際上只發現了71%的G3級腫瘤，診斷低級別腫瘤的敏感性則很更低［2］。此外，膀胱腫瘤抗原、核基質蛋白-22等標記物檢查也可用于膀胱癌的診斷，但其敏感性和特異性均不很理想。研究表明［3］多靶位熒光原位雜交(FISH)技術對于膀胱癌具有高度的敏感性和特異性，可以用于早期診斷膀胱腫瘤及其預后評估。現將多靶位FISH在膀胱癌診治中的應用綜述如下。

1 FISH技術的原理及特點

FISH是一種非放射性分子細胞遺傳學技術，其基本原理是通過標記的DNA探針與細胞核內的DNA靶序列雜交，獲得細胞內多條染色體(或染色體片段)或多種基因狀態的信息，用已知的熒光素標記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行特異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因此探針可以直接與染色體進行雜交，從而將特定的基因在染色體上定位。多靶位FISH即利用FISH技術，通過多種熒光標記的DNA探針，以及定位p16抑癌基因的9p21位點特異探針對膀胱癌相關遺傳學改變進行檢測。與傳統的放射性標記原位雜交相比，多靶位FISH具有安全、快速、靈敏度高、檢測信號強、雜交特異性高、能同時顯示多種顏色等優點，不但能顯示細胞中期分裂相，還能顯示間期核［4］。

2 多靶位FISH的應用

隨著人們對疾病與染色體基因改變之間的研究不斷深入，檢測與疾病發生和進展相關的染色體及基因改變成為某些疾病早期診斷、風險評估、療效監測過程中重要的分子水平檢測方法。多靶位FISH技術是基因檢測，與形態學檢測相比，可以更早的發現細胞異常，降低漏診率，且該技術為快速無創的檢測技術，僅用患者的尿液或膀胱沖洗液檢測腫瘤脫落細胞，24 h內即可獲得檢測結果。

2．1 多靶位FISH在血尿檢查中的應用 血尿是大部分膀胱癌患者的最初臨床表現 ，但卻不是膀胱癌的特異性表現［5，6］。Sarosdy 等［3］發現，對血尿患者行 FISH 和尿細胞學檢查，其膀胱癌的診斷率分別為69%和38%，除外TaG1膀胱癌，其診斷率分別升高至83%和50%，前者對膀胱癌檢出率明顯高于后者。如果對血尿患者直接進行膀胱鏡檢查，則會給患者帶來一些不必要的痛苦，并可能漏診一些微小或不典型病灶，導致早期診斷的延誤和最佳治療時機的錯失，這就極大地影響了患者的存活率［7］。因此，對血尿患者行膀胱鏡檢查前應用多靶位FISH進行篩查。

2．2 多靶位FISH在尿細胞學檢查中的應用 對于血尿患者尿細胞學檢查結果不明確在臨床很常見。有數據表明有＜50%尿細胞學檢查不明確者在隨訪過程中發現了腫瘤［8］。而有研究結果［9］表明，對尿細胞學檢查結果不明確者行多靶位FISH檢查，其陽性率為91%，這些患者在隨后的首次活檢中發現了腫瘤，FISH檢查陰性的患者中未發現腫瘤，這說明FISH是一種可以檢測細胞學不明確患者是否患有腫瘤的方法。尿細胞學檢查結果不明確，而FISH檢查漏診的腫瘤多為膀胱乳頭狀瘤，后者行膀胱鏡容易發現［9］，因此對尿細胞學檢查結果不明患者宜采用多靶位FISH技術與膀胱鏡聯合檢查，以提高其診斷率。最近，有學者研究發現FISH有助于判斷尿細胞學檢查及膀胱鏡檢查不明確或陰性的患者的情況［10］。

2．3 多靶位FISH在膀胱癌復發預測中的應用 多靶位FISH檢查陽性但膀胱鏡或尿細胞學檢查陰性的膀胱癌(治療后)患者被稱作預測陽性患者［11］。臨床中常見如下情況:膀胱鏡診斷膀胱癌復發前，FISH檢查即為陽性;約有27%尿細胞學檢查陰性或不典型，且膀胱鏡檢查陰性的治療后的膀胱癌患者FISH呈陽性，而這些患者在隨訪的29個月中有近65%的患者膀胱癌復發［12］。這進一步提示FISH檢查可以預測膀胱癌復發。

2．4 FISH在膀胱灌注治療中的應用 早期、中分化的膀胱癌患者多采用卡介苗(BCG)膀胱灌注治療，而后者導致的膀胱黏膜嚴重炎性反應紅斑，在膀胱鏡和尿細胞學檢查時，其與原位癌均不易鑒別。有學者研究發現［13］膀胱灌注BCG治療不會影響FISH檢查結果，且發現FISH檢查陽性患者，其膀胱癌復發及進展為肌層浸潤的可能性分別是FISH檢查陰性患者的4．6倍和9．4倍。因此，對膀胱灌注BCG治療結束后的膀胱癌患者，進行FISH檢查可評估其治療效果，預測其復發性。

綜上所述，多靶位FISH在膀胱癌的診斷和治療中具有極其廣闊的應用前景，但目前膀胱癌的FISH結果只停留在陽性與陰性的判斷上，對于FISH陽性細胞比率(定量)與膀胱癌診斷、治療及預后的關系有待于進一步研究。

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