肉色杯傘菌絲生物學特性研究

李彩萍，聶建軍，谷曉濱

（1.山西省農業科學院農業環境與資源研究所，山西太原030006；2.山西省農業科學院農業資源與經濟研究所，山西太原030006）

肉色杯傘（Clitocybemaxima（Fr）Kumm）是生長在山西省管涔山一帶著名的野生食用菌，多發生在夏末秋初季節。該菌體大，肉厚，香味濃郁，子實體肉紅色，因此，當地又稱之為“紅銀盤”，極具開發利用價值[1]。目前，國內外尚未見該菌人工馴化栽培的報道。2009年在管涔山云杉與闊葉樹的混交林內采到2個碩大的肉色杯傘子實體，其菌蓋直徑28.7～32.5 cm，菌柄粗2.1～3.2 cm，單個質量達453～470 g。通過組織分離，獲得該菌的純化菌株[2]。為此，本試驗研究了該菌菌絲生長的適宜培養基、酸堿度及培養溫度，旨在為進一步開展肉色杯傘馴化栽培奠定基礎。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試菌株 肉色杯傘菌株Cm01是從采自管涔山的野生子實體組織中分離純化培養后所得到。

1.1.2 供試配方 一級種培養基采用2種配方，即配方1：葡萄糖25 g，蛋白胨3 g，磷酸二氫鉀2 g，硫酸亞鐵 0.1 g，1%硫酸鋅 5mL，瓊脂 25 g，水1 000mL。配方2：腐殖土浸出液（腐殖土浸出液的制備：先取野生肉色杯傘采集地的腐殖土100 g于鋁鍋中加1 000mL水煮10min，澄清后取清液過濾，再加入5 g CaCO3即成）100mL加入到900mL水中定量成1 000mL，其他成分與配方1培養基相同。二級種培養基配方：主料為木屑與玉米芯，輔料為麩皮、腐殖土和石膏，組成6個配方（表1）。

1.2 試驗方法

1.2.1 生長指標 以肉色杯傘菌絲生長勢（菌絲萌發情況、粗細度、色澤等）和菌絲體日均生長速度為評價指標，統計分析不同處理肉色杯傘菌絲的生長情況[3]。

表1 二級種培養基配方 %

1.2.2 氮源選優試驗 分別用酵母膏、牛肉膏、豆餅粉代替一級種培養基配方1和配方2中的蛋白胨，分析不同氮源在2種培養基中對肉色杯傘菌絲生長的影響。

1.2.3 碳源選優試驗 分別用蔗糖、麥芽糖、乳糖、淀粉、麥麩代替一級種培養基配方1和配方2中的葡萄糖，觀測不同碳源在2種培養基中對肉色杯傘菌絲生長的影響。

1.2.4 一級種培養基優化試驗 根據不同碳、氮源在配方1和配方2培養基中對肉色杯傘菌絲生長影響的試驗結果，選擇最佳碳、氮源及其適宜的加入量，篩選出最佳培養基配方。

1.2.5 酸堿度梯度試驗 通過加入檸檬酸調整pH 值，共設 6 個處理，即 pH 值為 4，5，6，7，8，9，觀測不同pH值對肉色杯傘菌絲生長的影響。

1.2.6 溫度梯度試驗 設置12～14，15～17，18～20，21～23，24～26，27～29 ℃培養溫度，觀測不同溫度條件下的菌絲生長情況。

1.2.7 二級種培養基選優試驗 按表1配方組合分別配制培養基，培養基含水量為65%，pH值為6.5。腐殖土取自野生肉色杯傘采集地林間地表層，篩去枯枝爛葉，暴曬風干后按比例加入。每個配方配制500mL菌種瓶10瓶，高壓滅菌后，無菌條件下接入肉色杯傘二級菌種，24～26℃下培養。

1.2.8 變溫培養 設24～26℃的常溫區與4～6℃的低溫區，肉色杯傘菌絲在24～26℃常溫條件下培養7 d后，于4～6℃冰箱中保藏1，2，3，4，5，6，7，8，9 d，取出后繼續在 24～26 ℃培養，與未經低溫保藏的肉色杯傘菌絲生長量（對照）進行比較。

2 結果與分析

2.1 氮源選優試驗結果

由表2可知，肉色杯傘菌絲在配方2培養基中的生長要優于配方1培養基，在這2種培養基中均以酵母膏為氮源的培養基最有利于菌絲生長，表現為菌絲粗壯，菌絲日均生長速度快，在配方1培養基中菌絲日均生長速度為1.5mm/d，在配方2添加了腐殖土浸出液的培養基中日均生長速度為1.8mm/d，均顯著高于其他氮源，且生長差異達到了顯著水平。

表2 不同氮源對肉色杯傘菌絲體生長的影響

2.2 碳源選優試驗結果

試驗結果（表3）表明，供試碳源在2種培養基中的菌絲長勢均以麥麩表現最好；但從菌絲日均生長速度來看，以葡萄糖生長最快，在配方1培養基中日均生長速度為1.6mm/d，在配方2培養基中日均生長速度為1.7mm/d，且與其他碳源生長差異顯著。

2.3 肉色杯傘菌絲生長適宜的一級種培養基優化配方

通過肉色杯傘菌絲體在不同碳、氮源的2種培養基上的優選試驗，從表2，3結果還可以看出，麥麩、葡萄糖和酵母膏為最佳碳、氮源，而且在添加了腐殖土浸出液的配方2培養基中生長要優于配方1。因此，對配方2優化后的培養基配方為：葡萄糖 25 g、麥麩 50 g、瓊脂 25 g、酵母膏3 g、磷酸二氫鉀2 g、硫酸亞鐵0.1 g、1%硫酸鋅5mL。

進一步試驗表明，在優化后的配方2培養基上，肉色杯傘菌絲萌發后沿培養基伸展能力更強，長勢更好，日均生長速度達到1.9mm/d。

表3 不同碳源對肉色杯傘菌絲體生長的影響

2.4 肉色杯傘菌絲生長的適宜pH值

培養基的酸堿度直接影響細胞酶的活性[4]。本試驗表明，肉色杯傘菌絲生長的適宜pH值為6～7。pH＜6，菌絲萌發力弱，菌絲僅在菌塊周圍形成團狀的菌落；pH＞7，菌絲萌發后生長勢逐漸減弱，滿管度降低，菌絲生長無力，先端菌絲纖細灰白，接著好象“扎”入培養基，不再向前擴展。

2.5 肉色杯傘菌絲生長的適宜溫度

真菌生長繁殖適宜溫度范圍為20～30℃[5]。本試驗表明，肉色杯傘菌絲生長的溫度范圍為6～30℃，最適溫度為24～26℃。在適溫下，菌絲生長均勻一致；高于26℃，菌絲萌發快，但纖細，沿培養基伸展能力差；高于28℃，菌絲生長受到抑制；低于18℃，菌絲萌發、生長較慢，培養周期延長，易造成培養基斜面脫水，不利于菌絲的生長。

2.6 不同二級種培養基對菌絲生長的影響

肉色杯傘菌絲在6個供試的二級種培養基上均可生長，在1號培養基上菌絲生長最快，在3號培養基上菌絲生長勢最強，菌絲濃白粗壯（表4），1，2，3號之間培養基菌絲生長速度差異不顯著，因此，3號培養基應為最適培養基。

表4 不同二級種培養基對菌絲生長的影響

2.7 變溫培養對肉色杯傘菌絲生長的影響

通過常溫（24～26℃）與低溫（4～6℃）變溫培養，與持續常溫培養的對照相比，經低溫（4～6℃）處理后的菌絲生長勢逐漸增強，生長點的先端菌絲變得濃白粗壯，在試管斜面上菌落增厚。結果（圖1）表明，在低溫處理后的前3 d作用不明顯，3 d后菌絲的生長能力開始增強，7 d后菌絲日均生長速度達到了2.1mm/d，但低溫處理8，9 d后日均生長速度差異不大。相反，未經低溫處理的對照，菌絲日均生長速度變化不大，基本維持在1.5～1.6mm/d，與經低溫處理對應第7天菌絲日均生長速度2.1mm相差0.5～0.6mm。

3 討論

肉色杯傘菌絲在加入取自野生肉色杯傘采集地林間地表層腐殖土的腐殖質浸出液培養基中生長較好，腐殖液的成分較為復雜，其綜合作用可能與其促進了菌絲對碳、氮源的利用，增強了菌絲的抗逆能力相關[6]。

本試驗中，低溫處理促進了肉色杯傘菌絲的生長，在之前我們對一些野生菌（如白雷蘑）的馴化培養中，也觀測到了低溫處理促進菌絲生長的現象。從有關的研究來看，這可能與肉色杯傘在低溫下誘導產生了新的代謝途徑有關。如張懵等[7]研究發現，草菇在低溫下會產生新的誘導蛋白，從而產生新的代謝途徑。但是，肉色杯傘在低溫下是否有新的酶類蛋白產生而改變了代謝途徑，還有待深入研究。

本研究在人工基質上實現了對肉色杯傘菌絲的純培養。試驗結果證明，選擇適宜的培養基是菌絲培養的前提，而培養出生長健壯的菌絲又是出菇的前提。本試驗觀測到了培養基表面有菌絲球團狀的隆起[8]，但是沒有分化出完整的子實體，因此，對該菌的出菇馴化仍需進一步研究。

［1］賈定洪，郭勇，鄭林用，等.野生香蘑屬菌株的ITS序列分析[J].食用菌，2010（1）：21-23.

［2］班立桐，谷榮祥，高燕，等.平菇津平90特性及栽培技術[J].天津農業科學，2001，7（2）：36-37.

［3］郭向華，班立桐，王永莊，等.杏鮑菇對不同碳氮營養源的利用[J].天津農業科學，2002，8（3）：4-6.

［4］齊振祥，孫軒，張麗，等.用木屑袋式反季節栽培滑子菇技術[J].內蒙古農業科技，2008（2）：111-113.

［5］曹日亮，楊晉青，梁興龍，等.CY發酵醋糟的最佳條件[J].山西農業科學，2003，31（2）：81-84.

［6］王保川.蕈菌側耳屬品比試驗 [J].山西農業科學，2009，37（11）：15-17.

［7］張懵，賈新成，陳明杰.草菇低溫誘導蛋白的初步研究[J].食用菌學報，2000，7（1）：56-58.

［8］劉波，朱玫，范黎.山西大型食用真菌[M].太原：山西高校聯合出版社，1991：62.