酸性染料比色法測定千里光總生物堿含量

張麗虹，楊玉萍，陳小花，肖婷婷，肖培云

（大理學院藥學與化學學院，云南大理 671000）

酸性染料比色法測定千里光總生物堿含量

張麗虹，楊玉萍，陳小花，肖婷婷，肖培云*

（大理學院藥學與化學學院，云南大理 671000）

目的：研究測定千里光中總生物堿含量的方法。方法：以氧化苦參堿為對照品，采用酸性染料比色法，在422 nm波長處測定千里光中總生物堿含量。結果：氧化苦參堿在6.75~135μg與吸光度呈良好的線性關系（r=0.999 2），平均回收率100.0%（RSD=1.54%）。結論：該方法簡便、準確，可用于千里光中總生物堿的測定。

酸性染料比色法；千里光；總生物堿

千里光（Senecio scandens Buch.-Ham.）為菊科千里光屬植物的干燥地上部分〔1〕。本品以千里光之名始載于《本草拾遺》，味苦、辛，性寒，具有清熱解毒、明目退翳、殺蟲止癢之功效。主治流感、上呼吸道感染、肺炎、急性扁桃腺炎、腮腺炎、急性腸炎、菌痢、黃疸型肝炎、膽囊炎、急性尿路感染、目赤腫痛翳障、癰腫癤毒、丹毒、濕疹、干濕癬瘡、滴蟲性陰道炎、燒燙傷〔2〕。文獻報道千里光屬的大部分植物均含有吡咯里西啶生物堿、萜類、黃酮、有機酸等化學成分〔3〕。生物堿生理作用主要有抗腫瘤、有益神經系統、抗菌、抗瘧。千里光中生物堿類的含量測定未見報道。本實驗采用酸性染料比色法，以氧化苦參堿為對照品測定千里光中總生物堿的含量〔4〕。

1 儀器與試藥

1.1儀器TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限公司）；梅特勒電子天平AE240（梅特勒儀器有限公司）；DZKW-4電子恒溫水浴鍋（上海科析實驗儀器廠）；超聲波清洗器（上海科導超聲儀器公司）；RE-3000旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）；FYB5型萬能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限責任公司）；LD4-2型離心機（北京醫用離心機廠）；pHS-25C型數字酸度計（梅特勒儀器有限公司）試劑均為分析純。

1.2藥品與試劑氧化苦參堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，含量測定用，批號：110780-200004），溴甲酚綠和其它試劑均為分析純。千里光藥材于2010年8月至12月采自云南省大理市蒼山東坡（經大理學院藥學院生藥學教研室段寶忠老師鑒定）。

2 方法與結果

2.1 pH=5.0檸檬酸-磷酸緩沖溶液的配制0.1 mol/L磷酸二氫鈉和0.1 mol/L檸檬酸按1∶1混合，酸度計校正為pH=5.0。

2.2 0.6%溴甲酚綠溶液的配制稱取0.6 g溴甲酚綠，加入檸檬酸-磷酸緩沖液（pH=5.0）溶解，并定容至100 mL，得溴甲酚綠緩沖液。

2.3對照品溶液的制備精密稱取氧化苦參堿對照品13.5 mg，加70%乙醇溶解并定容至100 mL，作為對照品儲備溶液（0.135 mg/mL）。

2.4供試品溶液的制備按文獻〔5~6〕提取工藝，精密稱定千里光藥材5 g，加10倍量70%乙醇回流提取2次，每次1.5 h，過濾，合并提取液，回收乙醇，得浸膏。加3倍量2%鹽酸至浸膏中，超聲溶解，加適量石油醚分2次進行脫脂，脫脂后的酸水液加氨水調pH=10，用氯仿萃取2次，合并氯仿液，加蒸餾水洗滌氯仿液，回收氯仿得千里光總堿。精密稱定，精密加入70%乙醇10 mL超聲溶解千里光總堿，冷卻，補重，作為千里光樣品儲備溶液。

2.5測定波長的選擇精密移取氧化苦參堿對照品溶液1.0 mL，置具塞試管中，加入氯仿10.0 mL。另取10.0 mL氯仿，置另一具塞試管中，制備空白液。分別加入pH5.0的0.6%溴甲酚綠緩沖液1.0 mL，密塞，劇烈振搖3 min，移入分液漏斗中，靜置10 min，分取氯仿層。精密吸取氯仿液5 mL，無水乙醇定容至10 mL，搖勻。在400~800 nm波長范圍內掃描，結果最大吸收波長為422 nm。

2.6溴甲酚綠緩沖液用量的選擇精密量取對照品溶液4份，每份1 mL，加入氯仿10.0 mL，再分別精密加入溴甲酚綠緩沖液1.0、1.5、2.0、2.5 mL，空白溶液同法操作，按“2.5”項方法顯色，于422 nm下測定溶液吸光度。結果表明溴甲酚綠緩沖液用量為1.0 mL時有較明顯的吸光值，空白吸收較小，故選擇溴甲酚綠緩沖液用量為1.0 mL。

2.7標準曲線的繪制分別精密吸取氧化苦參堿對照品溶液 0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0 mL按“2.5”項操作，取氯仿層于422 nm波長處測定吸光度值，以對照品量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線，得到線性方程：Y=70.009x+0.168 4，r= 0.999 2。結果表明，氧化苦參堿在6.75~135μg范圍內吸光度值與對照品用量呈良好的線性關系。

2.8精密度考察同一樣品液于422 nm波長處連續測定6次，得吸光度的RSD=0.076%（n=6）。

2.9重復性考察精密稱取千里光藥材6份，每份5 g，按“2.4”項方法制備樣品儲備液，精密取上述溶液1.0 mL，按“2.5”項下方法顯色，于422 nm處測定吸光度，計算含量。結果樣品平均含量為0.054 5 mg/g，RSD=1.56%（n=5）。結果表明重復性較好。

2.10穩定性試驗取供試品和對照品溶液，按“2.5”項顯色，并在0、5、10、15、20、25、30、35 min分別測定吸光度，結果表明在35 min內基本穩定，樣品RSD=2.14%（n=8），對照品RSD=0.15%（n=8）。

2.11加樣回收率實驗精密稱取適量千里光藥材，共9份，按表1分別精密加入氧化苦參堿對照品溶液（0.135 mg/mL），每個梯度平行操作3份，按“2.4”項方法制備樣品儲備液，精密取上述溶液1.0 mL，“2.5”項操作，在422 nm波長處測定吸光度，計算回收率，結果見表1。

表1 回收率實驗結果

2.12樣品含量測定取大理境內不同月份采集的不同部位千里光藥材，按“2.4”項方法制備樣品儲備液，精密取上述溶液適量，“2.5”項操作，測定總生物堿的含量，結果見表2。

表2 不同月份不同部位千里光總生物堿含量測定（mg/g）

3 討論

本實驗對千里光不同月份不同部位的總生物堿含量分別進行了測定，從結果中可以看出，不同采收期、不同部位千里光總生物堿的含量有顯著變化，葉里的含量明顯較其它部位高，11月份采收的千里光葉總生物堿含量最高，其次是12月份。這是由于千里光在11月份生長發育到成熟階段，為開花茂盛期，植物體內總生物堿含量較高，所以從實驗結果可以看出11月份為最佳采收期。

千里光地上部分總生物堿含量明顯大于地下部分，含量依次為葉>花>莖>根。

采用酸性染料比色法測定中藥中總生物堿的含量〔7-8〕，是根據一定pH值條件下，生物堿鹽的陽離子和酸性染料的陰離子定量結合生成有色的絡合物（即離子對），此離子對可以定量的被某種有機溶劑萃取的原理，通過測定萃取液的吸光度，來測定中藥中總生物堿含量的方法。此方法簡便、快速、可靠、易行，適合千里光總生物堿含量測定，以控制其質量。

〔1〕國家藥典委員會.中華人民共和國藥典〔S〕.2010版一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：32.

〔2〕國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草〔M〕.上海：上海科技出版社，1999：1390.

〔3〕胡軍.千里光屬植物化學成分的研究進展〔J〕.中成藥，2007，29（4）：567-570.

〔4〕高江國，李巖.千里光總生物堿的富集工藝及Adonifoline的分離純化〔J〕.上海中醫藥雜志，2009，43（2）：72-74.

〔5〕高淑云，焦燦.麻葉千里光中生物堿的提取及測定分析〔J〕.食品科學，2009，30（18）：261-266.

〔6〕王玉芹.峨眉千里光生物堿乙醇提取工藝研究〔J〕.中成藥，2004，26（10）：2-3.

〔7〕蔣愛芳，楊義芳，黃文武.酸性染料比色法測定總生物堿的研究進展〔J〕.中草藥，2006，37（S）：359-362.

〔8〕萬進，方建國.酸性染料比色法測定荷葉總生物堿含量〔J〕.醫藥導報，2010，29（5）：671-673.

*通信作者：肖培云，副教授.

（責任編輯 毛本勇）

Determination of Total Alkaloids Content in Senecio Scandens Buch.-Ham.by Acid Dye Colorimetry

ZHANG Lihong,YANG Yuping,CHEN Xiaohua,XIAO Tingting,XIAO Peiyun*
（School of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To determine the total alkaloids content in Senecio scandens Buch.-Ham.Methods:Using the oxymatrine as standard,acid dye colorimetry was used to determine the total alkaloids content in S.scandens at the wavelength of 422 nm.Results: The concentration of oxymatrine showed good linearity in the range of 6.75-135μg（r=0.999 2）,the average recovery was 100.0%（RSD=1.54%）.Conclusion:The method is simple,reliable and can be used for determination of the total alkaloids in S.scandens.

acid dye colorimetry;Senecio scandens Buch.-Ham.;total alkaloids

R286；R917

A

1672-2345（2011）12-0030-02

大理學院大學生科研基金（DXSKYX201012）

2011-04-28

2011-09-17

張麗虹，大理學院藥學與化學學院本科生.