高效液相色譜法測定黃藤素注射液中葡萄糖含量

張慧 孟憲生 羅國安

(1.遼寧中醫藥大學藥學院 大連 116600;2.清華大學分析中心 北京 100084)

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100 series高效液相色譜儀(包括低壓二元梯度泵,Alltech ELSD 2000 檢測器,Agilent柱溫箱,浙大N2000化學工作站),鼓風干燥機(天津市泰斯特儀器有限公司101-1 AB型),Milli-Q Synthesis超純水純化系統(美國Millipore公司),天平(德國賽多利斯BT125D,十萬分之一)。

色譜柱:COMOSIL Packed column sugar-D(4.6mm×250mm)。

1.2 試劑

乙腈(J.T.Baker,色譜純),乙酸銨(北京第二化工廠,分析純),水為MilliQ-超純水。

樣品:黃藤素注射液(昆明興中制藥廠)。

批號:100305、100313、100312。

對照品:D-(+)-葡萄糖標準品(J＆K CHEMICAL 批號234317)。

2 方法與結果

2.1 黃藤素注射液中葡萄糖含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱:COMOSIL Packed column sugar-D(4.6mm×250mm)。流動相:A相為10M冰醋酸-水溶液-乙腈(25∶75),流速1.0mL/min。柱溫為30℃,ELSD檢測器N2流速為2.1mL/min,溫度為85℃,在上述色譜條件下,葡萄糖與其他干擾成分能得到很好的分離,理論塔板數按葡萄糖計算,不低于1500,分離度均＞1.5。

2.1.2 供試品溶液 取注射液稀釋1mL,置50mL容量瓶中,定容到刻度。取適量過0.45μm濾膜,備用。

2.1.3 對照品溶液 稱取葡萄糖標準品25.00mg置100mL容量瓶中,定容至刻度。備用。

2.1.4 陰性對照溶液 取3次過濾水過0.45μm微孔濾膜作為陰性對照溶液。

2.1.5 線性關系考察 稱取葡萄糖標準品25.00mg水定容到100mL,分別稀釋到原來的1、2、4、8、10、20、40倍進HPLC。得線性回歸方程,y=8.64×10-8-0.0061,r=0.9999,結果表明,在2.50～0.0625mg/mL范圍內對照品D-(+)-葡萄糖進樣量與峰面積值呈良好的線性關系。

2.1.6 精密度實驗 分別精密吸取濃度為3.20mg/mL葡萄糖對照品溶液20μL,進樣,重復6次,峰面積的RSD為2.65%,表明儀器精密度良好。

2.1.7 重復性實驗 取批號為100305樣品按“2.1.2”方法配成6份供試品溶液,分別進樣20μL,得峰面積的RSD為3.75%。

2.1.8 穩定性試驗 取批號為100304的按“2.1.2”方法配成供試品溶液,分別在放置0、2、4、6、8、12h后,進樣做色譜分析,進樣量為20μL,結果葡萄糖的RSD為3.85%。說明供試品溶液在12h內穩定。

2.1.9 加樣回收率實驗 取100305批注射液按“2.1.2”供試品方法處理,精密吸取1mL加濃度為0.10mg/mL標準品溶液1mL,連續進6針HPLC測定含量。

2.2 樣品中葡萄糖含量測定(表1)

表1 葡萄糖的樣品含量

3 討論

目前,測定葡萄糖的方法多為HPLC法、苯酚-硫酸法[1]、蒽酮-硫酸法和3,5-二硝基水楊酸(簡稱DNS)法等,且HPLC法方法準確、易操作,所以本實驗采用了HPLC法測定黃藤素注射液中葡萄糖含量。本實驗試用了不同水相添加劑,發現酸對葡萄糖出峰時間和峰面積影響較大,所以選擇了有緩沖作用的醋酸銨作為水相的添加劑,使HPLC法測定葡萄糖穩定。

[1]王瑞明,李先榮.黃芪地上部分(莖、葉)多糖含量測定[J].中成藥,1999,21(5):254～255.