反相離子對高效液相色譜法測定復方苯海拉明滴鼻液中鹽酸苯海拉明和鹽酸麻黃堿的含量

劉煒，曾蔚欣，劉禮斌，唐宛晨，孫路路（首都醫科大學附屬北京世紀壇醫院，北京市 100038）

復方苯海拉明滴鼻液為北京中醫藥大學附屬護國寺中醫醫院的傳統制劑，其質量標準中無主要成分的含量測定方法。為更好地控制該制劑質量，本研究采用反相離子對高效液相色譜（HPLC）法，同時測定復方苯海拉明滴鼻液中鹽酸苯海拉明和鹽酸麻黃堿的含量。結果表明，該方法專屬性強，結果準確、可靠，可用于測定復方苯海拉明滴鼻液中鹽酸苯海拉明和鹽酸麻黃堿的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100 HPLC儀、紫外-可見分光光度儀（美國安捷倫科技有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸苯海拉明對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號:110728-200806，含量:99.9%）；鹽酸苯海拉明原料藥（遼源市百康藥業有限公司，批號:100401，含量:99.5%）；鹽酸麻黃堿原料藥及對照品（赤峰艾克制藥科技股份有限公司，批號:081027，含量:99.2%）；硫酸卡那霉素注射液（天津藥業焦作有限公司，批號:10030521，規格:0.5 g∶2mL）；羥苯乙酯（臺山新寧制藥有限公司，批號:20100304）；氯化鈉原料藥（江蘇省勤奮藥業有限公司，批號:20091207）；復方苯海拉明滴鼻液（北京中醫藥大學附屬護國寺中醫醫院，批號:20110314、20110517、20110520，含量:鹽酸苯海拉明0.125%、鹽酸麻黃堿1%、硫酸卡那霉素0.5%）；水為純化水，乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（150mm×4.6mm，0.5 μm）；流動相:0.02 mol·L－1十二烷基硫酸鈉水溶液（用85%磷酸溶液調節pH值至2.85）-甲醇-三乙胺＝52∶48∶0.5，流速:1.0mL·min－1；紫外檢測波長:256 nm；柱溫:30 ℃；進樣量:20μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 鹽酸苯海拉明對照品貯備液。精密稱定鹽酸苯海拉明對照品約24.9mg置于100mL容量瓶中，加水適量，完全溶解后，加水至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 鹽酸麻黃堿對照品貯備液。精密稱定鹽酸麻黃堿約200mg置于100mL容量瓶中，加水適量，完全溶解后，加水至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 鹽酸苯海拉明與鹽酸麻黃堿混合貯備液。分別精密稱定鹽酸苯海拉明對照品約25mg、鹽酸麻黃堿約200mg，置于同一100mL容量瓶中，加水適量，完全溶解后，加水至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 空白樣品溶液。按處方制備不含鹽酸麻黃堿和鹽酸苯海拉明的空白樣品溶液100mL，備測。

2.2.5 供試品溶液。按處方制備樣品100mL。精密吸取樣品溶液2.0mL，置于25mL容量瓶中，加入純化水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 系統適用性考察

分別精密吸取“2.2”項下制備的所有溶液，進樣分析，比較保留時間（tR），確定色譜峰的專屬性，結果見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.鹽酸麻黃堿對照品；B.鹽酸苯海拉明對照品；C.鹽酸苯海拉明+鹽酸麻黃堿；D.空白樣品；E.供試品；1.鹽酸麻黃堿；2.鹽酸苯海拉明；3.雜質（羥苯乙酯）Fig 1 HPLC chromatogramsA.ephedrine hydrochloride control；B.diphenhydramine hydrochloride control；C.ephedrine hydrochloride+diphenhydramine hydrochloride；D.blank sample；E.test sample；1.ephedrine hydrochloride；2.diphenhydramine hydrochloride；3.impurity（ethylparaben）

圖1結果表明，鹽酸苯海拉明、鹽酸麻黃堿及其他成分之間分離良好，空白樣品溶液在各對照品溶液相應的保留時間處無吸收峰，說明鹽酸苯海拉明、鹽酸麻黃堿的檢測不受干擾。按鹽酸麻黃堿色譜峰計，理論板數均值5355，RSD為1.8%（n＝6）；按鹽酸苯海拉明色譜峰計，理論板數均值10646，RSD＝1.4%（n＝6）。

2.4 標準曲線的制備

精密量取“2.2.3”項下鹽酸苯海拉明與鹽酸麻黃堿混合貯備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置于5mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，得一系列濃度溶液。過濾后，分別取20μL進樣、測定。以峰面積（y）為縱坐標，進樣量（x）為橫坐標，繪制標準曲線，擬合回歸方程，得鹽酸苯海拉明回歸方程y＝96.591x+8.1007（r＝0.9998，n＝6）；鹽酸麻黃堿回歸方程y＝954.667x+234.12（r＝0.9994，n＝6）。結果表明，鹽酸苯海拉明、鹽酸麻黃堿進樣量線性范圍分別為0.5002～5.0020、4.0058～40.0580μg。

2.5 重復性試驗

精密吸取“2.2.3”項下鹽酸苯海拉明與鹽酸麻黃堿混合貯備液1.0mL，置于5mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，過濾。取濾液20μL，重復進樣6次，測定。結果，鹽酸苯海拉明含量的RSD＝1.3%，鹽酸麻黃堿含量的RSD＝1.1%，說明方法重復性良好。

2.6 回收率試驗

分別精密稱定鹽酸苯海拉明對照品約25mg、鹽酸麻黃堿對照品約200mg，置于同一100mL容量瓶中，加水適量，完全溶解后，加水至刻度，搖勻。精密吸取2.0mL至5mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，作為回收率試驗待測溶液。同法制備9份，濾過后，分別取20μL進樣，測定，外標法以峰面積計算回收率，每份樣品測3次，回收率試驗結果見表1。

表1 回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.7 樣品含量測定

精密吸取樣品2.0mL，分別置于25mL容量瓶中，加入純化水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取對照品混合溶液（每1mL含鹽酸苯海拉明0.1mg、含鹽酸麻黃堿0.8mg），分別經0.45 μm微孔濾膜過濾后，各精密量取20μL注入色譜儀，記錄色譜。按外標法，分別以鹽酸苯海拉明、鹽酸麻黃堿色譜峰面積計算含量。3批樣品（批號:20110314、20110517、20110520）含量測定結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）

3 討論

反相離子對色譜系統中流動相的pH值對峰的保留時間有明顯影響[1]。有文獻[2]報道，當調節流動相pH值為4.0時，鹽酸麻黃堿出峰時間為4min，鹽酸苯海拉明出峰時間為9min左右。但筆者在試驗中發現，當pH≥3時，鹽酸苯海拉明出峰時間延長至11min；當pH低于2.8時，出峰時間雖然縮短，但峰形不好，拖尾嚴重。在參考文獻[3，4]基礎上曾選用0.02 mol·L－1十二烷基硫酸鈉水溶液-甲醇-三乙胺體系（52∶48∶0.5，用磷酸調pH至5.0）為流動相，結果鹽酸麻黃堿在2.67min左右出峰，鹽酸苯海拉明出峰時間約為17.741min，雖然其他成分對測定不干擾，但鹽酸苯海拉明出峰時間太晚。故最終選擇0.02 mol·L－1十二烷基硫酸鈉水溶液（用85%磷酸溶液調節pH值至2.85）-甲醇-三乙胺（52∶48∶0.5）為流動相，結果表明該流動相可行。

本品處方含有羥苯乙酯及其他輔料，均在256 nm波長處有吸收，尤其羥苯乙酯吸收較強。在本文色譜條件下（見圖1D、E），羥苯乙酯色譜峰（tR為2.6min）與鹽酸麻黃堿基線分離（分離度R＝9.13），說明羥苯乙酯及其他輔料完全不干擾鹽酸麻黃堿的測定。

鹽酸麻黃堿、鹽酸苯海拉明均有胺基側鏈，顯堿性，在水溶液中為陽離子，而當流動相中加入十二烷基硫酸鈉（陰離子）后，可以與之形成離子對，從而達到改變保留時間、改善峰形、提高分離度的作用。但要嚴格控制其濃度，當低于0.02 mol·L－1時峰形不好；濃度過高，又會損害色譜柱[4]。

原標準中并未對本品的主成分進行含量控制，而用本法可以同時測定鹽酸麻黃堿、鹽酸苯海拉明的含量，且結果準確、可靠，可用于復方苯海拉明滴鼻液的質量控制。

[1]傅若農主編.色譜分析概論[M].第1版.北京:化學工業出版社，2000:176-178.

[2]程輝躍.HPLC法同時測定百喘朋中鹽酸麻黃堿和鹽酸苯海拉明的含量 [J].中國藥房，2001，12（10）:622.

[3]顏 挺.反相離子對高效液相色譜法測定中藥橡膠膏中鹽酸苯海拉明的含量[J].藥物分析雜志，2008，28（3）:437.

[4]張 濤.HPLC法測定復方苯海拉明麻黃堿糖漿麻黃堿、苯海拉明的含量[J].中國醫藥導報，2009，6（21）:42.