GC法檢測氟康唑原料藥中的有機溶劑殘留量

吳春麗，雷 偉，李 幸，吳洪銀（鄭州大學藥學院，鄭州市 450001）

氟康唑（Fluconzole）化學名為2-（2，4-二氟苯基）-1，3-雙（1H-1，2，4-三唑-1-基）-2-丙醇，能強烈而持續地抑制真菌中的甾醇合成，由于其廣譜、高效的抗真菌活性，尤其是具有對深部真菌抑制作用較強并能透過血腦屏障的顯著特點，在治療曲霉菌、全身性念珠菌以及隱球菌感染方面應用廣泛，是抗深部真菌感染的首選藥物[1]。由于氟康唑原料藥的生產過程中使用了丙酮、乙酸乙酯、甲苯等有機溶劑，為確保藥品的安全、有效和質量可控，根據《中國藥典》殘留有機溶劑測定法[2]和人用藥品注冊技術要求國際協調會（ICH）制定的藥品中有機溶劑殘留量檢測的指導原則[3]，本研究采用毛細管氣相色譜法[4～6]，定量檢測氟康唑原料藥中的有機溶劑殘留量，結果表明所建立的方法簡便、靈敏、準確。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N氣相色譜儀、HP6890化學工作站、氫火焰離子化（FID）檢測器（美國安捷倫科技有限公司）；AL104電子分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）。

氟康唑原料藥（批號分別為20081201、20081202、20081203，含量分別為99.3%、99.2%、99.4%）均由河南普瑞制藥有限公司提供；丙酮、乙酸乙酯、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺（Dimethyl formamide，DMF）均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:DB-17毛細管柱（固定相為50%苯基+50%甲基聚硅氧烷，30 m×0.25mm，0.25μm）；柱溫:初始溫度60℃，保持3min后，以70℃·min－1升溫至240℃再保持25min；進樣口溫度:200 ℃；載氣:N2，流速:1.0mL·min－1；分流比:10∶1；FID檢測器溫度:270 ℃；H2流速:30mL·min－1，空氣流速:300mL·min－1；進樣量:1μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 貯備液:分別精密稱定丙酮255.5mg、乙酸乙酯258.9mg、甲苯53.0mg，置于同一個50mL容量瓶中，加DMF稀釋制成每1mL中含丙酮5.110mg、乙酸乙酯5.178mg和甲苯1.060mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.2 對照品溶液:精密量取“2.2.1”項下貯備液5mL，置于50mL容量瓶中，加DMF稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 丙酮溶液:精密稱定丙酮54.9mg，置于100mL容量瓶中，加DMF稀釋制成每1mL中含丙酮0.549mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.4 乙酸乙酯溶液:精密稱定乙酸乙酯49.9mg，置于100mL容量瓶中，加DMF稀釋制成每1mL中含乙酸乙酯0.499mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.5 甲苯溶液:精密稱定甲苯21.3mg，置于100mL容量瓶中，加DMF稀釋制成每1mL中含甲苯0.213mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.6 供試品溶液:精密稱定氟康唑原料藥0.2 g，置于2mL容量瓶中，加DMF溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性試驗:分別取“2.2.2”、“2.2.6”項下的溶液及空白溶液（DMF）各1μL注入氣相色譜儀。結果，丙酮、乙酸乙酯、甲苯保留時間分別為4.949、5.514、7.471min，氣相色譜詳見圖1。

圖1 氣相色譜圖A.對照品溶液；B.空白溶液；C.供試品溶液Fig 1 GC chromatogramsA.reference substances solution；B.blank solution；C.test solution

2.3.2 線性考察試驗:精密量取“2.2.1”項下的貯備液5.0、2.5、1.0、0.5、0.25mL分別置于10mL容量瓶中，加DMF稀釋至刻度，搖勻，即得系列對照溶液。照“2.1”項下的色譜條件，分別精密量取1μL注入氣相色譜儀，記錄色譜，各組分濃度溶液平行進樣2次，測得平均峰面積。以各組分濃度（c，μg·mL－1）為橫坐標，各組分峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸，結果見表1。

表1 線性范圍及回歸方程（n＝5）Tab 1 Linear ranges and regression equations（n＝5）

2.3.3 精密度試驗:精密量取對照品溶液1μL，注入氣相色譜儀，重復進樣6次，記錄色譜，測得峰面積，考察其精密度。結果丙酮、乙酸乙酯、甲苯的RSD分別為2.3%、1.3%、1.5%。

2.3.4 最低檢測限試驗:取“2.2.3”、“2.2.4”、“2.2.5”項下的溶液分別逐級稀釋，照“2.1”項下的色譜條件分別進樣1μL，記錄色譜，以信噪比3∶1確定檢測限，以信噪比10∶1確定定量限。結果，丙酮、乙酸乙酯、甲苯檢測限分別為11、7.1、0.6 ng，定量限分別為27.5、33.3、2.7 ng。

2.3.5 重復性試驗:取同一批氟康唑原料藥（批號:20081202）0.5 g，精密稱定，共6份，分別置于5mL容量瓶中，加DMF溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取溶液各1μL，照“2.1”項下的色譜條件分別注入氣相色譜儀，記錄色譜。同時測定“2.2.2”項下對照品溶液1次。按外標法以峰面積計算。結果，丙酮、乙酸乙酯和甲苯RSD均為0，表明本方法重復性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗:精密稱取同一批氟康唑原料藥（批號:20081201）0.5 g，共6份，分別置于5mL容量瓶中，精密加入“2.2.1”項下貯備液0.5mL，加DMF稀釋至刻度，搖勻。精密量取溶液各1μL，照“2.1”項下的色譜條件分別注入氣相色譜儀，記錄色譜。同時測定“2.2.2”項下對照品溶液。根據峰面積計算加樣回收率。結果，丙酮、乙酸乙酯、甲苯的加樣回收率分別為98.1%、98.0%、97.5%，詳見表2。

表2 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab 2 Results of recovery tests（n＝6）

2.4 樣品中有機溶劑殘留量測定

分別稱取3批氟康唑原料藥0.2 g，精密稱量，按“2.2.6”項下方法制備成供試品溶液。分別取1μL按照“2.1”項下的色譜條件注入氣相色譜儀。同時取“2.2.2”項下對照品溶液1μL進樣。結果，3批氟康唑原料藥樣品中均未檢出丙酮、乙酸乙酯、甲苯，符合《中國藥典》規定。

3 討論

《中國藥典》及《美國藥典》[7]均規定，丙酮、乙酸乙酯為第三類受控毒性溶劑，甲苯為第二類受控毒性溶劑，根據ICH制定的控制指標[3]，結合實際測定結果，認為原料藥中的丙酮不得超過0.5%，乙酸乙酯不得超過0.5%，甲苯不得超過0.089%。本研究檢測結果表明，3批樣品的有機溶劑殘留量均符合規定。

本品控制的丙酮、乙酸乙酯、甲苯3種有機溶劑的沸點和極性雖均有不同程度的差異，但采用DB-17毛細管色譜柱，方法的檢測限、定量限、精密度和準確度試驗均能滿足分析要求，故該方法能夠有效分離和準確檢測氟康唑原料藥中的有機溶劑殘留量。

[1]平素玲，沙 瑋.氟康唑治療深部真菌感染10例報告[J].蘇州醫學院學報，1995，15（3）:551.

[2]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄Ⅷ.

[3]周海鈞.藥品注冊的國際技術要求·質量部分[M].北京:人民衛生出版社，2000:87.

[4]吳春麗，張俊霞，史云濤，等.頂空毛細管氣相色譜法測定來曲唑原料藥中有機溶劑殘留量[J].中國藥房，2010，21（17）:1601.

[5]吳春麗，張俊霞，史云濤，等.毛細管氣相色譜法測定扎托洛芬中有機溶劑的殘留量[J].鄭州大學學報（醫學版），2010，45（1）:134.

[6]李珂珂，譚豐蘋.毛細管氣相色譜法測定拉米夫定中有機溶劑的殘留量[J].中國藥房，2007，18（19）:1502.

[7]The United States Pharmacopeial Convention，Inc.The United States Pharmacopeia[S].30th edi.Rochville MD:the United States Pharmacopeial Convention，Inc.，2007:467.