復方銀翹散對五種常見耐藥菌的體外敏感性研究

欒耀芳，孔祥山，吳 斌，李金星

(山東中醫藥大學附屬醫院，濟南250011)

全國產β-內酰胺酶(ESBLs)大腸埃希菌大腸感染率為56.5%、甲氧西林耐藥的金黃色葡萄球菌(MRSA)感染率為52.7%［1］，且除糖肽類抗生素外，幾乎對其他抗生素均耐藥。2010年11月，我們觀察了復方銀翹散對五種臨床常見耐藥菌株的抑制作用及敏感性，以期為臨床抗細菌感染治療提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料 分離自我院臨床送檢標本并經實驗室確認的ESBLs(+)大腸埃希菌菌株30株，ESBLs(-)大腸埃希菌菌株30株，MRSA菌株30株，甲氧西林敏感的金黃色葡萄球菌(MSSA)菌株30株，泛耐藥銅綠假單胞菌30株(剔除同一患者相同部位的重復菌株);全自動微生物鑒定儀，JEM-1200EX電 鏡;質 控 菌 株 為 ATCC25922、ATCC25923、ATCC27853;瓊脂，ESBLs確診紙片，頭孢西丁紙片;復方銀翹散原藥。

1.2 復方銀翹散藥液制備 稱取連翹15 g、雙花15 g、桔梗9 g、薄荷9 g、竹葉6 g、生甘草8 g、荊芥穗6 g、淡豆豉8 g、牛子9 g，加水適量(以浸過藥材1～2cm為宜)浸泡10min，文火煮開20min后倒出藥液，過濾，分裝，高壓滅菌備用。用前將定量藥液稱重、干燥，計算藥物濃度，并采用二倍稀釋法分別配制供試藥液，根據要求加入M-H瓊脂，傾注平板［2］。

1.3 菌液制備及復方銀翹散抑菌作用檢測 常規培養上述五種菌株，挑取培養18～24 h的純菌落，制成0.5麥氏單位，濃度相當于(1～1.5)×108cfu/ml的菌懸液，備用。將1.2中每個平板分成若干份，編號。取10 μl菌懸液按編號加至平板表面，35℃培養，記錄24 h內細菌超微結構變化;以48 h無菌生長之最低藥物濃度為復方銀翹散最低抑菌濃度(MIC)。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0軟件進行統計學處理。計量資料采用±s表示，組間比較行t檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 細菌超微結構 復方銀翹散作用前MRSA和MSSA菌株形態完整，胞體光滑無缺損，內部結構清晰;作用后菌株大小不一，細胞壁缺損，胞質膜層次不分明，部分細胞質內含物消失，細胞質內包含體和染色體模糊不清。復方銀翹散作用前大腸埃希菌結構完整，胞體均勻光滑，胞質充盈無溢出;作用后細菌胞體膨大、形態不規則，細胞質內包含體和染色體結構破壞嚴重，胞膜與胞質分離，細胞質內含物大量流失甚至成空泡。因實驗條件所限，泛耐藥銅綠假單胞菌超微結構變化未觀察。

2.2 復方銀翹散對五種菌株的MIC 復方銀翹散的MIC在金黃色葡萄球菌＞泛耐藥銅綠假單胞菌＞大腸埃希菌，見表1。

3 討論

ESBL(+)大腸埃希菌和MRSA是目前臨床上最常見的感染菌，而近幾年陸續出現的大量泛耐藥銅綠假單胞菌和鮑氏不動桿菌嚴重影響了臨床抗感染治療。中藥治療是我國傳統醫學的一部分，其與抗生素類藥物相比抑菌效果弱，但具有全面調理作用，且對細菌不易產生耐藥性。體外抑菌作用研究顯示，中藥抑菌機制主要有三個方面:①干擾微生物酶系，破壞其正常的新陳代謝，抑制酶活性。②使微生物蛋白酶凝固和變性，干擾其生存和繁殖。③改變細胞膜通透性，使其酶類和代謝產物逸出而失活［3］。復方銀翹散是具有清熱解毒、辛涼解表作用的復方中藥代表方，多數文獻資料中對其實驗藥液的終質量濃度以1mg/ml生藥計，此在實際的操作中很難掌握，其加水量、浸泡時間、煎煮時間可直接影響藥液濃度，故不同學者之間的研究無法橫向比較，對臨床的指導作用顯著降低。本研究將復方銀翹散藥液濃度進行了定量，有利于實驗的標準化、規范化，更具科學性和推廣性;結果顯示，復方銀翹散對五種菌株均有較強的抑菌作用，其中金黃色葡萄球菌＞泛耐藥銅綠假單胞菌＞大腸埃希菌;且對于金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌，無論是否產酶抑菌作用相似。本研究還顯示，金黃色葡萄球菌經復方銀翹散作用后細胞壁缺損嚴重，但大多數細菌內含物無流失，說明細胞膜尚完整，因此造成細菌死亡的原因可能與破壞細胞壁合成有關;而作用后的大腸埃希菌胞體膨大，細胞質內包含體和染色體結構破壞嚴重，胞膜與胞質分離，細胞內含物大量流失甚至成空泡，說明細菌不僅細胞壁破壞，細胞膜通透性亦發生改變，致使體內酶類和代謝產物逸出導致死亡。至于具體是復方銀翹散中何種有效成分使細菌失去活性尚有待深入研究。

表1 復方銀翹散對五種菌株的MIC(±s)

表1 復方銀翹散對五種菌株的MIC(±s)

注:與MRSA及MSSA比較，*P＜0.01;與泛耐藥銅綠假單胞菌比較，#P＜0.01

菌株 MIC(mg/ml) t值 P值大腸埃希菌ESBL(+) 74.67±34.99*#-1.022 0.315 ESBL(-) 82.13±34.32*#金黃色葡萄球菌MRSA 27.73±20.64 MSSA 21.33±19.58 1.454 0.157泛耐藥銅綠假單胞菌 43.73±15.68*

綜上所述，復方銀翹散對金黃色葡萄球菌、泛耐藥銅綠假單胞菌、大腸埃希菌均有較強的抑制作用，機制可能為破壞細菌細胞壁、細胞膜及細胞內含物等。

［1］汪復，朱德妹，胡付品，等.2009中國CHINET細菌耐性監測［J］.中國感染與化療雜志，2010，10(5):325-334.

［2］劉玉慶，李曄，車程川，等.大腸桿菌對中草藥敏感性試驗及其方法研究［J］.中獸醫醫藥雜志，2003，22(1):3-5.

［3］何明，張永跟.中藥抑菌作用現狀［J］.北京中醫藥大學學報(中醫臨床版)，2007，14(6):44-46.