Ezrin蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達及意義

歐英富，林黎娟，蔡英蘭，金 政，王 研，林貞花*

(1遼東學院醫(yī)學院，遼寧丹東118002;2延邊大學醫(yī)學院)

結(jié)腸癌發(fā)病率較高，但目前對于其發(fā)生、發(fā)展相關(guān)基因的研究非常有限。研究表明，Ezrin蛋白與多種人類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系［1］，但國內(nèi)有關(guān)其在結(jié)腸癌組織中表達的的相關(guān)報道較少。2011年4月，我們利用高通量組織芯片技術(shù)檢測了Ezrin蛋白在結(jié)腸癌及癌旁良性組織中的表達情況，旨在進一步探討結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展機制。

1 材料與方法

1.1 材料 隨機選取遼寧省丹東市中心醫(yī)院胸外科2007年4月～2010年10月期間行手術(shù)切除的結(jié)腸癌標本共69份，患者男42例，女27例;年齡32～75歲，平均49.5歲。術(shù)后均經(jīng)病理檢查確診，其中高分化35例、中等分化23例、低分化11例;腫瘤直徑≤5cm者41例，＞5cm者28例;伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例，侵及漿膜32例。所有患者術(shù)前均未經(jīng)化療，無遠處臟器轉(zhuǎn)移;69例患者癌旁良性組織及23例患者的轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織被同時納入研究。

1.2 Ezrin蛋白與Ki-67蛋白表達檢測 取上述標本的組織芯片，脫蠟、水化，檸檬酸鹽抗原修復(fù)液修復(fù)，PBS漂洗，置入30 ml/L H2O210min，正常血清37℃孵育15min，加入一抗(抗Ezrin和Ki-67單克隆抗體，1∶50稀釋;空白對照以PBS代替一抗)4℃冰箱孵育過夜，加入二抗(生物素標記抗IgG抗體及辣根過氧化物酶標記抗IgG抗體)37℃孵育60min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染細胞核，中性樹膠封片。結(jié)果判斷:Ezrin陽性著色在細胞質(zhì)或細胞膜，Ki-67陽性著色在細胞核。按染色強度和陽性表達細胞數(shù)比例，參考Mathew等［2］的分級標準，無著色細胞為(-)，著色細胞數(shù)＜50%或染色較淺為(+)，著色細胞數(shù)＞50%且染色較深為(++)，(+)和(++)均視為陽性表達。

1.3 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學處理。不同類型組織中Ezrin蛋白表達的關(guān)系、結(jié)腸癌組織中Ezrin蛋白表達與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系用Chi-square檢驗或Fisher's精確檢驗，結(jié)腸癌組織中Ezrin蛋白與Ki-67蛋白表達的關(guān)系用Spearman相關(guān)性分析，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Ezrin蛋白及Ki-67蛋白表達 Ezrin蛋白及Ki-67蛋白在不同組織中的表達見表1。

表1 Ezrin蛋白在結(jié)腸癌與癌旁良性組織、淋巴結(jié)組織中的表達

2.2 Ezrin蛋白表達與結(jié)腸癌臨床病理學特征的關(guān)系 見表2。

表2 Ezrin蛋白表達與結(jié)腸癌臨床病理學特征的關(guān)系

2.3 Ezrin蛋白表達與Ki-67表達的關(guān)系 Ezrin蛋白和Ki-67蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達呈顯著正相關(guān)，P ＜0.05(r=0.317)。

3 討論

Ezrin屬于ERM家族成員，編碼基因為Villin2，定位于染色體6q25.2-q26，該家族包括4種結(jié)構(gòu)相近的蛋白，分別是 Ezrin、Redixin、Moesin、Merlin。目前研究表明，ERM蛋白是連接細胞皮質(zhì)層肌動蛋白細胞骨架與質(zhì)膜上整合膜蛋白的橋梁分子。通過介導(dǎo)細胞質(zhì)膜與肌動蛋白細胞骨架的連接，ERM蛋白在細胞生長、運動、遷移、有絲分裂以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮重要作用，在多種惡性腫瘤中被認為是預(yù)測不良結(jié)局的分子標志物［3，4］。文獻報道，Ezrin蛋白表達是結(jié)直腸癌患者獨立的預(yù)后影響因子，且與CD44表達呈正相關(guān)［5］;CD44分子過表達可引起Ezrin蛋白功能激活，從而導(dǎo)致骨肉瘤細胞系轉(zhuǎn)移能力增強［6］;在脫水細胞和腫瘤細胞中，PIP2磷酸化的Ezrin增多，可通過促進RhoA活化等途徑促進細胞遷移［7，8］;Ezrin蛋白可阻斷整合素傳導(dǎo)通路，導(dǎo)致循環(huán)和新微環(huán)境內(nèi)腫瘤細胞生存時間延長(抑制其表達可縮短骨肉瘤細胞生存期)［9］。以往研究表明，Ki-67是與DNA拓撲酶Ⅱ相似的核蛋白，在細胞周期G1、S和G2期均有表達，是一個可靠的測量增生活性的標記物，對非小細胞肺癌預(yù)后判定具有潛在價值［10］。

本研究顯示，Ezrin蛋白在結(jié)腸癌組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的陽性表達率均明顯高于癌旁組織，且其在結(jié)腸癌組織中的表達與組織分化程度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、漿膜侵犯有關(guān);Ezrin蛋白與Ki-67蛋白表達呈顯著正相關(guān)。說明Ezrin蛋白與結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展及臨床預(yù)后密切相關(guān);Ezrin蛋白表達異常可能與細胞增殖程度有關(guān)，其可能與Ki-67蛋白協(xié)同參與了結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展。

總之，Ezrin蛋白在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展中起重要作用;此為結(jié)腸癌的分子靶向治療提供了依據(jù)。

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