PCNA,MMP-2在PR陽性的乳腺癌組織中的表達及意義

刁巖 任宏濤 王西京 馬小斌 代志軍

乳腺癌是一種嚴重威脅婦女健康的常見病和多發病。近年來，我國乳腺癌的發病率呈逐年上升趨勢，在大城市，乳腺癌已位居女性惡性腫瘤發病率之首，且年齡有明顯提前趨勢。乳腺癌導致死亡的主要原因是全身轉移，如肝轉移、肺轉移、腦轉移等。PCNA是增殖細胞合成DNA所必需的核蛋白，PCNA表達反映細胞增殖活性，一般增殖活性高的細胞由于細胞間張力增大，粘附性降低，更易于脫離原發灶向遠處擴散、轉移。MMP-2是一類與腫瘤的侵襲和轉移密切相關的蛋白降解酶。通過降解基底膜及細胞外基質,為血管內皮的遷移和新生血管的延伸創造了必要條件。本試驗通過免疫組化法檢測PCNA、MMP-2在PR陽性的乳腺癌中的表達，分析它們之間及它們與其他臨床病理參數的關系，探討PCNA、MMP-2在乳腺癌中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

隨機抽取西安交通大學醫學院第二附屬醫院腫瘤外科2004年1月至2007年6月手術切除的存檔蠟塊40例。全部病例均經手術和病理證實,為孕激素受體陽性的乳腺浸潤性導管癌。手術方式均為保留胸大肌和胸小肌的乳腺癌改良根治術。40例標本均取自女性。患者年齡37～71歲，平均52歲。臨床TNM分期按第五版美國癌癥聯合委員會（AJCC）分期系統進行。TNM分期：Ⅰ期13例；Ⅱ期21例；Ⅲ期6例。40例浸潤性導管癌中腋窩淋巴結轉移情況：無淋巴結轉移27例，淋巴結轉移1～3個5例，≥4個8例。全部標本入選條件：①臨床資料完整。②手術后病理確診。③術前未行放化療及內分泌治療。④乳腺癌患者無其他惡性腫瘤病史。檢測試劑盒購自武漢博士德公司，免疫組化（Streptavidin-Peroxidase）SP試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2 方法

免疫組織化學SP法（鏈霉素親和生物素蛋白——過氧化物酶法）測定乳腺癌組織標本中PCNA、MMP-2的表達。染色步驟按試劑說明書，抗原修復采用微波修復法，孵育條件為37℃,用二氨基聯苯胺和過氧化氫顯色，蘇木素復染。

1.3 結果判斷

PCNA陽性細胞為細胞核染色，MMP-2為胞漿染色。(-):整個切片未見陽性染色，(+):細胞數≤25%，(++):細胞數為26%～50%，(+++):細胞數51%～75%，(++++):細胞數＞75%。(+～++)為低表達,(+++～++++)稱為高表達或過度表達[1]。

1.4 統計學處理

所有試驗數據采用SPSS13.0 for windows統計軟件包進行統計學分析：x2檢驗及Fisher Exact Test將各組試驗結果進行統計學檢驗，判定有無統計學意義。

2 結果

2.1 PCNA的表達結果

按腫瘤大小分組中：原發腫瘤大小≤2cm，PCNA陽性表達率為42.9%，＞2cm組為92.3%，其差異有統計學意義（x2=11.87，P＜0.01）。

按TNM分期中，PCNA的陽性表達率在Ⅰ期為46.2%，在Ⅱ、Ⅲ期為88.9%，其差異有顯著統計學意義（x2=10.06，P＜0.02）。

表1 PCNA表達和臨床病理指標的關系

腋窩淋巴結轉移陰性組PCNA陽性表達率為70.4%，而腋窩淋巴結轉移陽性組為84.6%，轉移陽性組雖高于陰性組，但差異無統計學意義（x2=0.95，P＞0.05）。在腋窩淋巴結轉移1～3個組，PCNA≥＋＋的表達率為62.5%，在腋窩淋巴結轉移大于等于4個組，表達率為100%，其差異有統計學顯著意義（P=0.04）（見表1）。

2.2 MMP-2的表達結果

按腋窩淋巴結狀況分組中，腋窩淋巴結轉移陰性組MMP-2陽性表達率為63.0%，而腋窩淋巴結轉移陽性組為100.0%，差異有顯著統計學意義（P=0.01）（見表2）。

表2 MMP-2表達和臨床病理的關系

3 討論

通常把乳腺癌腋窩淋巴結轉移，腫瘤大小，雌、孕激素受體等因素看作是乳腺癌的預后標準，但是結果不是十分滿意。近年來國外一些研究表明PCNA與多種腫瘤的預后關系密切，有關PCNA與乳腺癌預后關系的研究也有少量的報道，認為PCNA表達與乳腺癌淋巴結轉移及預后有關。PCNA表達與淋巴結轉移相關，提示乳腺癌中增殖活性高的癌細胞浸潤性轉移的可能性大，預后較差。Takashima[2]檢測了112例有4枚以上淋巴結轉移的乳腺癌標本，認為在有淋巴結轉移的乳腺癌患者中，PCNA表達低者預后較好。PCNA與腫瘤的臨床行為密切相關，瘤細胞增殖活性高者，PCNA高表達，就易發生淋巴結轉移，說明PCNA過度表達增加了瘤細胞轉移趨勢的危險性[3]，故認為PCNA表達可以作為判斷乳腺癌預后的可靠指標。

本研究發現PCNA在乳腺癌中存在高表達，且腫瘤越大，分期越晚，細胞增殖越活躍，惡性程度越高。PCNA陽性表達的高低能反映乳腺癌細胞的增殖狀態和惡性程度，不直接反映腫瘤細胞的侵襲性。本研究發現PCNA的表達與淋巴結轉移無關，但在腋窩淋巴結轉移1～3個組，PCNA≥＋＋的表達率為62.5%，在腋窩淋巴結轉移大于等于4個組，表達率為100%，其差異有統計學顯著意義。而淋巴結轉移與否是關系到患者預后的重要指標。關于PCNA表達與淋巴結轉移之間的關系，各家報道不一[4]，本研究得出此結論，我們認為可能是因為PCNA與細胞增殖有關，而不直接表腫瘤組織的侵襲性，所以腫瘤體積越大PCNA表達越強，但不斷的生長和增殖是腫瘤細胞侵襲和轉移的前提，當多個腋窩淋巴結轉移時，PCNA過表達較明顯，因此仍可作為判斷乳腺癌預后的重要指標。

乳腺癌組織的研究表明，MMP-2活性增強，基質水解蛋白酶增加，是乳腺癌細胞侵襲行為的生化機制。Nakopoulou[5]研究了135例浸潤性乳腺癌，發現 MMP-2與腫瘤體積（Φ≥2cm）有明顯相關性。Li HC[6]研究了270例淋巴結陰性的乳腺癌病人，發現MMP-2陽性表達與組織學分級顯著相關（P＜0.001），與腫瘤體積相關（P＜0.05）。

本試驗陽性表達率為75%。按腋窩淋巴結狀況分組中，腋窩淋巴結轉移陰性組MMP-2陽性表達率為63.0%，而腋窩淋巴結轉移陽性組為100.0%，差異有顯著統計學意義（F=0.01）。這與眾多已知的實驗結果吻合，說明MMP-2可能通過降解細胞外基質、破壞基底膜，使腫瘤細胞更易于浸潤淋巴管，加速腫瘤向淋巴結轉移。

此次實驗數據表明在孕激素受體陽性的乳腺癌中，PCNA與MMP-2與一些相應的臨床相關參數有關，而這些指標都對乳腺癌的治療預后判斷有指導意義，PCNA與MMP-2有希望成為指導乳腺癌治療，評價乳腺癌預后的分子生物學指標。PCNA，MMP-2在乳腺癌浸潤轉移中的作用及其表達的意義，使其有望成為預測乳腺癌內分泌治療效果和預后的指標，為乳腺癌的個體化治療提供重要參考。

[1]牛昀,郎榮剛,傅西林,等.乳腺浸潤性小葉癌中PCNA和P53蛋白表達及臨床意義[J].中國腫瘤臨床,1999,26(12):889-891.

[2]Takashima T,Onoda N,Ishikawa T,et al.Proliferating cell nuclear antigen labeling index and p53 expression predict outcome for breast cancer patients with four or more lymph node metastases[J].Int J Mol Med,2001,8(2):159－163.

[3]朱亞明,袁剛.結腸癌中p53蛋白、PCNA表達與預后的探討[J].當代醫學，2009，15(30):1-2.

[4]蘇文利，熊斌.增殖細胞核抗原在大腸癌中的表達及其臨床意義[J].中國腫瘤臨床與康復，2004,11(6):501-502.

[5]Nakopoulou L,Tsirmpa I,Alexandrou P,et al.MMP-2 protein in invasive breast cancer and the impact of MMP-2/TIMP-2 phenotype on overall survival[J].BreastCancer Res Treat,2003 Jan,77(2):145-155.

[6]Li HC,Cao DC,Liu Y,et al.Prognostic value of matrix metalloproteinases(MMP-2 and MMP-9) in patients with lymph node negative breast carcinoma[J].Breast Cancer ResTreat,2004 Nov,88(1):75-78.