梅毒患者血清抗核抗體的檢測及意義

封建凱 馬端葉 姜正德 陳世峰 陳靜 金文文

梅毒是由Tp（treponema pallidum，梅毒螺旋體）感染引起的一種慢性、系統性性傳播疾病，近年來，我國梅毒發病率同全球一樣，呈快速上升趨勢[1]，對公共衛生構成嚴峻挑戰。梅毒潛伏期長、傳染性強、自然病程中臨床表現復雜，特別是晚期梅毒可累及皮膚粘膜、骨骼、眼睛、神經及心血管內臟系統，嚴重者可危及生命。但Tp感染機體后的免疫學損傷機制至今尚未闡明，我們通過對梅毒患者血清中ANA的檢測，研究Tp感染后機體產生自身抗體的情況，從自身免疫學角度闡述梅毒臨床表現復雜多變的可能原因，同時為研究梅毒的免疫學損傷機制提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選擇2010年3月～2011年5月我院皮膚性病門診確診的梅毒患者212例為研究對象，梅毒血清學確證試驗TPPA檢測均陽性，男66例，女146例，年齡16～68歲，平均（29.6±9.4）歲，其中160例TRUST試驗陽性，52例TRUST試驗陰性。臨床均無自身免疫性疾病癥狀和其他性傳播疾病。另選正常對照組136例，均為我院健康查體者新鮮血清標本，男90例，女46例，年齡17～74歲，平均（35.1±13.1）歲，TPPA和乙肝表面抗原檢測均陰性，本試驗在所有研究對象知情同意并經醫院醫學倫理委員會批準后進行。

1.2 試劑和儀器

TPPA檢測試劑盒為日本富士瑞必歐株式會社產品，TRUST診斷試劑盒購自上海榮盛生物藥業有限公司，ANA檢測試劑盒購自歐盟醫學實驗診斷有限公司；熒光顯微鏡為蔡司Axiostar plus。

1.3 研究方法

1.3.1 項目檢測 取所有研究對象及正常對照組血清標本（均無溶血或脂血現象）進行ANA檢測，ANA采用間接免疫熒光法，基質為Hep-2細胞和猴肝，試驗同時設立陰陽性對照，具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3.2 結果判定 各種核型的結果均以定性研判。

1.3.3 統計學處理 應用統計學軟件SPSS16.0對各組中ANA的陽性率進行x2檢驗。

2 結果

212 例梅毒患者血清ANA的檢測結果見表1，其陽性率（44.8%）顯著高于正常對照組（16.2%），差異具有顯著統計學意義，P＜0.01。

表1 梅毒患者ANA結果

在212例梅毒患者中，有52例TRSUT試驗呈陰性反應，根據TRUST試驗結果將研究對象分組，結果見表2。TRUST試驗陽性的梅毒患者ANA陽性率分別高于TRUST試驗陰性的梅毒患者（P＜0.05）和正常對照組（P＜0.01），差異均具有統計學意義。而TRSUT試驗陰性的梅毒患者ANA陽性率與正常對照組比較差異無統計學意義，P=0.645。

表2 TRUST結果不同的梅毒患者ANA陽性率

3 討論

TPPA 是用無生物活性的明膠顆粒做抗原載體吸附從兔睪丸中提取的梅毒螺旋體粉碎物抗原，檢測梅毒螺旋體特異性抗體，屬于Tp感染的確證試驗[2]，對各期梅毒檢測的敏感性可達98.3%[3]，特異性達100%[4]。TRUST 是以膽固醇晶粒為載體，包被上心磷脂和卵磷脂構成VDRL抗原顆粒，當抗原與患者血清中反應素以一定比例相互作用時出現凝集即為陽性，此試驗方法所包被抗原并非Tp自身成分，因此，檢測出的反應素為非梅毒特異性抗體，一般用于梅毒的初篩檢查。

ANA是用間接免疫熒光法以Hep-2細胞結合猴肝臟組織為基質檢測血清中自身抗體，基質中約有120～150種抗原成分，在自身免疫性疾病的初篩診斷中應用廣泛，具有重要的臨床意義。ANA陽性往往預示著機體中存在針對自身器官或組織的抗體，盡管ANA無器官和種屬特異性[5]，大約5%的ANA陽性個體可無相應的臨床癥狀[6]，但抗體的持續存在和滴度的持續增高將會對機體產生慢性免疫損傷，最終導致某些器官或組織的病理變化。早期認為，自身免疫性疾病患者體內可能存在與TRUST包被抗原產生交叉反應的抗體，但曹文苓等[7]對33例各種自身抗體陽性患者的血清進行檢測，未發現與TRUST試驗出現交叉反應的假陽性病例。

自然病程中，Tp感染2年后，甚至長達l0～15年，病變可波及全身組織和器官，病損部位Tp少但破壞性大，若侵害心血管和中樞神經系統，可危及生命。多年來，國內外學者從體液免疫和細胞免疫等多方面入手對梅毒螺旋體感染后的免疫損傷機制進行研究[8-9]，獲得了大量的寶貴資料，但是至今仍未能圓滿解釋Tp感染機體后自然病程中表現出的多樣化特征。我們的研究發現，TRUST陽性的梅毒患者其ANA的陽性率顯著高于TRUST陰性的感染者（P＜0.01），而TRUST陰性的梅毒感染者其ANA陽性率與正常對照組比較無統計學意義。據此推測，梅毒臨床表現復雜多變可能與患者機體中產生自身抗體有關，機體在Tp的刺激下器官組織損傷，釋放自身免疫原性成分，誘導機體對自身成分發生免疫應答，產生自身抗體，在自然病程中出現慢性、系統性器官組織損傷表現。晚期梅毒患者體內Tp減少，特異性抗體滴度降低，但臨床癥狀反而嚴重的現象，也許正是由于自身抗體對宿主組織器官長期免疫損傷的結果。對Tp侵入機體后最初如何造成組織損傷釋放自身免疫原性物質的機制尚未完全闡明，但有研究表明[8,11]Tp的外膜脂蛋白是梅毒感染期間的主要促炎癥介質，在激發機體免疫反應中起重要作用，其中Tp0751重組蛋白可通過TLR2和C14途徑激活MAPKs/p38和NF-κB，誘導THP-1表達CKs，其可能是Tp的一個重要的致病因子。

TRUST檢測屬于非特異性試驗，所檢測出的非特異性抗體對機體無保護作用，經過治療后，抗體可以逐漸減少直至轉為陰性。因此，可以用以療效觀察及判愈[10,12]。在《2010年美國疾病控制中心梅毒治療指南》中對梅毒的治療隨訪及療效評價中指出，如在治療后6個月內血清滴度未有4倍下降，應視為治療失敗或再感染。結合我們的研究，梅毒患者產生自身抗體的幾率顯著升高，因此，在對ANA陽性梅毒患者的治療中，能否將ANA的檢測作為一項指導療效的參考指標值得深思，當然其在預防晚期梅毒并發癥中的積極作用還有待進一步研究。

總之，Tp感染宿主后的發病機制復雜，臨床表現多變，治療效果及評價不確切，因此，對梅毒進行更加全面深入的研究，進一步明確該病的發病機制、制定預防措施和治療方案，為公共健康提供有力的保障，任重道遠。

[1]Chen ZQ, Zhang GC, Gong XD, et a1.Syphilis in China: Results of a national surveillance programme[J].J Lancet,2007,369(9556): 132-138.

[2]王興金,吳學美,周曉民,等.梅毒血清檢測方法探討[J].當代醫學,2011,17(1):155.

[3]Aktas G, Young H, Moyes A, et al.Evaluation of the fluorescent treponemal antibody absorption test for detection of antibodies (immunoglobulins G and M) to Treponema pallidum in serologic diagnosis of syphilis[J].Int J STD AIDS,2007,18(4):255-260.

[4]Castro R, Prieto ES, Joao Aguas M, et a1.Evaluation of the Treponema pallidum partiel agglutination technique(TPPA)in the diagnosis of neurosyphilis[J].J Clin Lab Anal，2006，20(6)：233-238.

[5]Damoiseaux JG, Tervaert JW.From ANA to ENA: how to proceed?Autoimmun Rev,2006,5(1):10-17.

[6]Rahman A, Isenberg DA.Systemic Lupus Erythematosus[J].The New England Journal of Medicine, 2008,358:929-939.

[7]曹文苓，宋衛忠，畢超，等.六種梅毒初篩試驗試劑的評價[J].國際檢驗醫學雜志，2010，31（2）：129-130.

[8]劉雙全，汪世平，吳移謀，等.梅毒螺旋體Tp0751重組蛋白誘導人單核細胞表達前炎癥細胞因子的研究[J].中國科學：生命科學，2010，40（1）：48-54.

[9]Brinkman MB, Mc Gill MA, Pttersson J, et al.A novel Treponema pallidum antigen, TP0136, is an outer membrane protein that binds human fibronectin[J].Infect Immun,2008,76(5):1848-1857.

[10]曹文苓，梁艷華，葉興東，等.廣州市性病實驗室室間質量評價結果分析[J].中華檢驗醫學雜志，2008，31(2)：209-210.

[11]Cameron CE, Kuroiwa JM, Yamada M, et al.Heterologous exprssion of the Treponma pallidum laminin-binding adhesin Tp0751 in the culturable spirochete Treponema phagedenis[J].J Bacteri ol,2008,190(7):2565-2571.

[12]Brown DL, Frank JE.Diagnosis and managemnt of syphilis[J].Am Fam Physician,2003,68(2):283-290.