東莞地區婦女人乳頭狀瘤病毒感染情況的分析

馬秋林 郭義紅 劉彥慧

20世紀90年代中期，大量的流行病學和分子生物學研究發現，人乳頭狀瘤病毒（Human papilloma virus，HPV）與宮頸癌的發生有密切的關系。現已研究證實HPV是一種嗜人體皮膚和黏膜組織細胞的DNA病毒，可廣泛感染人類皮膚及生殖道、呼吸道上皮組織，目前已知有100多個基因型，大部分亞型對人體無害，少部分亞型對人體致病，根據其致病性危險程度分為高危型和低危型，同時，高危型HPV和低危型HPV感染對人類的影響也存在明顯不同，前者與90%以上的宮頸癌有關，而后者則主要引起尖銳濕疣[1]。且有報道HPV病毒陽性孕婦可以垂直傳播給胎兒[2]。另外，不同年齡階段的人群對HPV敏感性也存在差異。而宮頸癌是少數幾個明確病因并且早期發現治愈率極高的腫瘤，所以進行HPV分型檢測對預防與早期發現治療宮頸癌非常有必要，同時對于流行病學調查以及以后疫苗應用都有非常重要的意義，本文即探討東莞地區HPV亞型分布情況以及各年段感染率情況。

1 對象和方法

1.1 對象

本醫院作為專科醫院，婦科門診量大，有著豐富的調查對象，包含各個年齡段，對本院2010年5月～2011年6月間1193例進行HPV分型檢測的標本進行統計分析，年齡分布為15～57歲，分成≤20歲、21～30歲、31～40歲、41～50歲、≥51歲5個年齡段，由于時間跨度大，調查對象豐富，年齡分布合理，統計結果具有代表性。

1.2 儀器與試劑

采用ABI9700基因擴增儀，奧盛K30b恒溫金屬浴，Eppendorf離心機等，試劑由廣州達安基因公司提供。

1.3 檢測方法

采RDB(反向點雜交)技術，具有簡便快速、靈敏度高的特點，本試劑盒能檢測19個亞型，包括16個高危型（16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，亞型CP8304型）和3個低危型（6，11，43型）。用專用的標本采集拭子，由熟練的婦產科醫生采集。采集來的標本在PCR室作下如下處理：將棉拭子上的細胞或組織洗脫于1mL生理鹽水中，擠干棉拭子，將洗脫液置于1.5mL離心管中，12000rpm離心10min，吸去上清液，重復以上步驟（洗去雜質），在離心管的沉淀中加50μLDNA提取液充分混勻，放在金屬浴上100℃保溫10min，隨后離心5min，取5μL模板加入到試劑盒提供的反應體系中，6000rpm瞬時離心3s，試劑附帶的陰陽質控品同標本處理，進行質量控制。最后放到擴儀上，按以以下程序擴增：93℃ 3min預變性，然后按93℃ 40s→55℃ 40s →72℃ 40s擴增，共40個循環，最后72℃延伸7min，隨后對擴增產物嚴格按照標準操作程序進行雜交、洗膜，顯色。

1.4 統計學處理

應用SPSS13.0統計軟件處理數據，計數資料用x2檢驗。

2 結果

根據膜條上預先設置的探針點，當檢測出某個亞型，即在相應的探針位點顯示紫藍色的圓點。

2.1 HPV感染率及亞型分布情況

在1193例送檢樣本中，檢出HPV陽性病例296例，陽性率為24.8%，而HPV感染有地區差異，據報道，沈陽地區HPV陽性檢出率為21.63%，貴州地區為25.9%，這兩個地區檢出的主要亞型按順序為16、52、58、11、51 5種，與報道的檢出亞型一致[3-4]，見表1，而且檢出了試劑合能檢測全部亞型。因我們是婦幼專科醫院的關系，只做女性HPV檢測，對性男性感染率，本文并沒有作統計。在296例陽性標本中，發現多重陽性標本46陽性，占陽性標本15.5%，且主要是二重感染，296例陽性標本中檢驗亞型366例，排在前5位的亞型如下分別為16、52、58、11、51，陽性例數分別為60、44、36、34、32例，分別占16.3%、12.0%、9.8%、9.2%、8.7%。

2.2 HPV感染與年齡的關系

檢出296例陽性標本，統計各年齡段陽性檢出率，本文統計年齡的跨度為16～57歲，把年齡段分為5個檔次，各年齡段HPV感染率差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 各年齡組HPV陽性檢出情況

2.3 各年齡段亞型分布情況

對于各年齡段HPV亞型分布情況，分別統計各年齡段每個亞型的檢出例數，發現各年齡段HPV亞型分布差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 各年齡段亞型的分布情況

3 討論

HPV是一種誘發女性宮頸癌及生殖器病變的主要病原體，HPV致病作用與HPV DNA的整合有關，病毒核酸整合到宿主細胞內，使宿主細胞內染色體發生突變，導致腫瘤的發生，主要是HPV轉錄翻譯成的E6、E7蛋白，蛋白與細胞內腫瘤抑癌基因P53與Rb基因結合，從而干擾細胞周期的調節，使細胞永生化，而E6、E7蛋白主要由高危型HPV表達，所以十分有必要對HPV進行分型[4-5]。對各年齡段的感染率統計發現≤20歲和≥51歲兩個年齡段感染率明顯高于其它年齡段，HPV感染有年輕化的趨勢，跟婚前性行為有關，須引起重視，在≥51歲偏高跟婦女年齡增高身體免疫力以及更年期后身體激素變化相關，更應該在這兩個年齡段加強預防HPV感染和宮頸癌篩查知識的宣傳[6]。

本文也對各年齡段感染亞型進行統計整理發現≤20歲年齡段51型為主要亞型，41～50歲年齡段33型為主要亞型，其余幾個年齡段，差異不大，16型依然占主要亞型，這提示我們以后區別對待各年齡段的HPV防治。

HPV疫苗也在進行二期臨床階段，而疫苗也主要針對E6、E7作為靶抗原，這種疫苗不是針對所有的亞型，所以有必要普查各地區亞型分布情況，優先接種感染率高亞型，不同地區根據亞型分布情況，以及各年齡段亞型分布情況，區別對待，接種相應亞型疫苗，對于預防HPV感染意義重大。2006年6月，美國食品與藥品管理局(FDA)正式批準Gardasil宮頸癌預防性疫苗上市，是世界上第一個腫瘤疫苗，標志著宮頸癌防治已進入了一級預防。此疫苗為二價疫苗，主要針對HPV16、18型，而HPV型別分布存在明顯的地區差異，在我國尚缺乏系統的、全面的、科學的HPV型別地區分布情況數據，HPV型別檢測可為中國的HPV疫苗研究提供數據資料，HPV感染有地區性差異，我國及亞州其他國家52、58占據次要位置，所以針對這種情況，要著力研究在中國出現比較多的亞型、以及多重疫苗。就東莞地區來說，將來如果有多種疫苗上市選擇，應優先接種16、52、58型疫苗，如果是≤20歲和41～50歲年齡段可以分別優先接種51、33亞型。

在296例檢出標本中，發現46例多重感染病例，其中發現有16亞型的40例，占86.9%，二重感染38例，占86.2%，這些使臨床治療更為復雜。由于不同亞型HPV其編碼外殼蛋白的基因變異很大。不同亞型HPV之間基本上沒有交叉保護抗體，容易造成不同高危型 HPV多重感染或者交叉感染。而Lee等[7]進一步研究了多重HPV感染與宮頸癌的關系，結果發現單一HPV感染使宮頸癌的患病風險增加19.9倍，而多重HPV感染使該風險增加到31.8倍，對多種感染患者在物理治療和藥物治療方面采取相應的措施，效果會更好。綜上所述，對HPV基因分型的檢測在宮頸癌的早期診斷和防治有重要意義。

[1]Helay S.human papilloma virus:beware the infection you can not see[J].Aust Fam Physician，2003，32(5):311-315.

[2]Burd EM.human papillmoma virus and cervical cancer[J].Clin Microbiol Rev，2003，16(1):1-7.

[3]李彥，肖瑜.導流雜交法檢測人乳頭狀瘤病毒的結果分析[J].遵義科技，2009，32(4):36-39.

[4]劉立鴻，江凱，張富春.人乳頭瘤病毒（HPV）致癌機制研究進展[J].生命科學，2008，20(2):295-299.

[5]鄭華生，鄭迪楠，李劍民，等.2663例普通女性HPV感染調查及其亞型分布[J].當代醫學，2011，17（21）：20-21.

[6]高玉華，高巖.2104名體檢婦女高危型HPV-DNA檢測情況的分析[J].醫藥與保健，2010，18(1):124-125.

[7]Lee SA，Kang D，Seo SS，et al.Multple HPV infection in cervical cancer screened by HPV DNA chip[J].Cancer Lett，2003，198(2):187-192.