高效液相色譜法測定人血漿中地西泮和咪達(dá)唑侖含量

余學(xué)軍，陳琴華，李 鵬，楊 曼

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院藥劑部，湖北 十堰 442008)

地西泮(diazepam)和咪達(dá)唑侖(midazolam)均屬苯二氮類(benzodiazepines)藥物，由于毒性小、臨床用途多，已逐漸替代巴比妥類藥，成為當(dāng)前臨床應(yīng)用最廣的鎮(zhèn)靜催眠藥，在臨床麻醉中作為麻醉前用藥、輔助用藥和復(fù)合全身麻醉的組成部分[1-2]。臨床上地西泮常用于控制肌痙攣和抽搐，如破傷風(fēng)、癲癇發(fā)作、局部麻醉藥中毒等，其個體差異大、治療范圍小，且典型毒性并不一致，濫用或誤用常引起中毒，且中毒程度與血藥濃度密切相關(guān)[3-4]。咪達(dá)唑侖具有水溶性和消除半衰期短的特點，主要用于麻醉前、全身麻醉誘導(dǎo)和維持、局部麻醉和部位麻醉輔助以及重癥監(jiān)護患者的鎮(zhèn)靜等，監(jiān)測咪達(dá)唑侖的血藥濃度、合理調(diào)整用藥劑量，是減少其不良反應(yīng)、提高療效的直接手段之一[5-6]。臨床上常見這兩種藥物同時使用。筆者建立了同時測定地西泮和咪達(dá)唑侖血藥濃度的高效液相色譜法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

CP 225 D型十萬分之一分析天平(Sartorius);Waters 2695-2996型高效液相色譜儀;WH-1型微型旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠有限公司);2-16型超速離心機(Sigma)。地西泮對照品(批號為 171225-200302)、咪達(dá)唑侖對照品(批號為171250-200401)均由中國藥品生物制品檢定所提供;乙腈、甲醇為色譜純，水為純化水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Waters C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 -水(55∶45);流速:1.0 mL/min;檢測波長:220 nm;柱溫:30 ℃;進樣量:20 μL。色譜圖見圖1，咪達(dá)唑侖和地西泮的保留時間分別為 7.2 min和 9.7 min。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 對照品溶液制備

分別精密稱取地西泮和咪達(dá)唑侖對照品10.0 mg，置10 mL量瓶中，以甲醇溶解并稀釋至刻度即得質(zhì)量濃度為1.0 g/L的對照品貯備液，置冰箱備用。臨用前混合，并以甲醇稀釋;混合對照品溶液中地西泮和咪達(dá)唑侖質(zhì)量濃度均為100 μg/mL。

2.3 樣品預(yù)處理

取空白血漿0.3 mL，置2 mL具塞試管中，加0.1 mL甲醇，旋渦混勻，再加乙腈0.6 mL，旋渦混旋1 min，10 000 r/min高轉(zhuǎn)速離心10 min，精密吸取上清液，進樣20 μL。

2.4 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:取空白血漿0.3 mL，精密加入一定量混合對照品溶液，置2 mL具塞試管中，配成含地西泮和咪達(dá)唑侖分別為0.05，0.1，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 μg/mL 的系列血漿樣品溶液，照2.3項下樣品預(yù)處理方法處理后測定峰面積。以峰面積(A)對血漿質(zhì)量濃度(C)進行線性回歸，得回歸方程咪達(dá)唑侖 A=132 565 C+1 235.8(r=0.999 8);地西泮 A=118 097C+17 508(r=0.999 0)。地西泮和咪達(dá)唑侖質(zhì)量濃度均在0.05～10.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，最低檢測質(zhì)量濃度均為5 ng/mL(S/N＞3)。

回收率和精密度試驗:取人空白血漿0.3 mL，精密加入質(zhì)量濃度分別為0.1，5.0，10.0 μg/mL的混合對照品溶液，按2.3項下方法處理樣品，作為質(zhì)控樣品，每個質(zhì)量濃度質(zhì)控樣品各制備5份，進樣分析，結(jié)果用藥物峰面積表示，帶入回歸方程計算回收率。同時考察1 d內(nèi)制備的3種質(zhì)量濃度質(zhì)控樣品，每個樣品測定5次，計算日內(nèi)精密度的 RSD;另在同1周內(nèi)不同天內(nèi)分別測定，計算日間精密度的 RSD。結(jié)果見表1。

表1 咪達(dá)唑侖和地西泮在人血漿中的回收率和精密度試驗結(jié)果

穩(wěn)定性試驗:分別制備3種質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣品各10份，分為2組，一組在25℃下保存2 h，一組在-20℃下保存1個月，按2.1項下色譜條件進樣分析，將測得值與第1天的值比較。結(jié)果見表2。

表2 咪達(dá)唑侖和地西泮在人血漿中的穩(wěn)定性試驗結(jié)果

3 討論

文獻介紹的大多是堿化后乙醚提取的樣品處理方法，處理步驟復(fù)雜、費時。本試驗采用乙腈沉淀蛋白，取上清液直接進樣的方法，去蛋白效果良好，回收率高，且簡便、穩(wěn)定性好。另外，多數(shù)試驗以緩沖鹽作流動相，不利于儀器的保養(yǎng)與維護。本試驗以乙腈-水(55∶45)為流動相，通過優(yōu)化試驗條件，使地西泮和咪達(dá)唑侖以及內(nèi)源性物質(zhì)達(dá)到了良好分離。

[1]李 螈，袁 汀，段 旭，等.高效液相色譜法測定地西泮中毒患者血漿與尿中地西泮濃度[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2007，26(12):1 415-1 417.

[2]李子剛，湯慧芳，陳季強.地西泮與咪達(dá)唑侖對離體大鼠子宮平滑肌收縮功能的影響[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2006，20(5):372-376.

[3]黃士新，張文剛，李丹妮，等.超高效液相色譜-質(zhì)譜法測定血漿和尿樣地西泮[J].飼料研究，2009(2):49-51.

[4]劉冬嫻，賀江南.GC-ECD法檢測血漿中地西泮及去甲西泮[J].西北藥學(xué)雜志，2005，20(2):51-52.

[5]田志松.高效液相色譜法同時測定人血漿1’-羥基咪達(dá)唑侖與咪達(dá)唑侖含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2006，25(5):404-405.

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