高效液相色譜法測定潤降利膈顆粒中柚皮苷含量＊

董軍偉 ，王華新，李國川，彭安堂，張桂俠 ，吉朝鋒

(1.河北省石家莊市中醫院制劑室，河北 石家莊 050051;2.河北省石家莊市第一醫院藥劑科，河北 石家莊 050011;3.河北醫科大學中醫學院，河北 石家莊 050091)

潤降利膈丸是石家莊市中醫院的注冊制劑(注冊號為冀藥制字Z20051118)，具有養陰益胃、順氣開郁的功效，對胃陰不足、肝氣犯胃所致胃氣上逆、吞咽不利、胸悶燒心、胃噪雜、反胃、腹脹等有良好的治療效果，用于治療食道炎、胃炎效果顯著。為更加方便患者應用，已將劑型改進為顆粒劑，但原制劑質量標準中無含量測定項目。為進一步控制制劑質量，筆者采用高效液相色譜法測定了潤降利膈顆粒中柚皮苷含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-10AT型高效液相色譜儀，SPD-10A型紫外檢測器，N2010色譜工作站。潤降利膈顆粒由石家莊市中醫院提供;柚皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110722-200309);乙腈、甲醇、濃磷酸均為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:KromasilC18柱(200mm×4.6 mm，5 μm);柱溫:室溫;流速:1.0 mL/min;流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)，等度洗脫;檢測波長:283 nm;進樣量:20 μL。理論板數按柚皮苷計不低于3 000，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備[1－2]

精密稱取柚皮苷對照品6.61mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，得每1 mL含264.50 μg的對照品溶液。精密稱取樣品5.014 g，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇50 mL，回流提取2h，取出放冷，離心，取上清液濃縮至5mL，移至25mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，靜置，過 0.22 μm微孔濾膜，即得供試品溶液。取不含枳殼的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察[3-4]:取對照品溶液，以甲醇溶液分別配制成質量濃度為 264.50，132.25，66.13，33.06，26.45，13.23 μg/mL 的對照品溶液，各進樣20 μL。以進樣質量濃度為橫坐標(X)、峰面積積分值為縱坐標(Y)繪制標準曲線，得回歸方程 Y=14 477.828 7 X+25 249.230 5，r=0.999 5(n=6)。結果表明，柚皮苷質量濃度在13.23～264.50 μg/mL范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液20 μL，連續重復進樣，記錄峰面積。結果的 RSD為2.372 5%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，按照上述色譜條件在0，2，4，6，8 h時進樣測定峰面積，結果的 RSD值為1.789 8%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內穩定。

重現性試驗:取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并測定含量。結果的 RSD為1.513 7%(n=6)，表明方法重現性良好。

加樣回收試驗:精密稱取同一批樣品粉末2.502 1 g，共6份，加入一定量柚皮苷對照品，按照供試品溶液制備方法制備溶液，進樣測定。結果見表1。

表1 柚皮苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取樣品3批，依法制成供試品溶液，精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μL，按2.1項下色譜條件測定，照外標法計算樣品中柚皮苷含量。結果批號為20100416，20100417，20100418的3批樣品中，柚皮苷含量分別為 0.464 5，0.465 0，0.463 9 mg/g(n=3)。

3 討論

在對本制劑的提取中發現，超聲提取1 h和回流提取2 h效果差別較大，甲醇超聲結果不太明顯，而回流提取效果較好。因此，確定以甲醇回流提取2 h為樣品提取方法。參照文獻報道，取柚皮苷對照品溶液適量，在200～400 nm波長范圍內掃描，結果在283 nm波長處有最大吸收，故選283 nm波長作為檢測波長。用本法測定潤降利膈顆粒中柚皮苷的含量作為定量指標，方法相對簡便、快速、準確可靠。

[1]董 玄，高文遠，李鳳閣，等.RP-HLPC法測定枳殼藥材中的柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷[J].中草藥，2009，12(40):283-284.

[2]饒春意，張 旋.HPLC法測定金雞虎補丸中柚皮苷的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2009，20(6):258-260.

[3]涂文升，黃其春.HPLC測定心通口服液中柚皮苷的含量[J].中國藥師，2009，12(12):1 840-1 842.

[4]林 葳，胡健敏，陳恩瑜.HPLC測定接骨丹片中柚皮苷的含量[J].海峽藥學，2009，21(12):96-97.