核桃仁抗小鼠皮膚衰老的實驗研究

姚媛媛 陳 勤

安徽大學生命科學院，安徽合肥 230039

延緩衰老、青春永駐是古今中外人類的夢想。皮膚因暴露于外界環境，并受情緒、生活方式、年齡等影響，故易表現衰老外觀，影響美觀、社交等。抗皮膚衰老一直是醫學界懸而未決的課題。核桃仁是中醫傳統良藥，《本草綱目》記述其有“補氣養血，溫肺潤腸”等功效[1]。但有關核桃仁抗皮膚衰老的研究尚未見實驗報道。本實驗考察了核桃仁對皮膚衰老的延緩作用，為進一步開發提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料儀器

昆明種健康小鼠（皖醫動準字01號），體重20～30 g，由安徽醫科大學動物中心提供。核桃仁（購于合肥大藥房）加水浸泡30 min，煎熬3次后過濾，合并濾液濃縮成1 g/mL，4℃冰箱放置。儀器有WFZ UV-2100型紫外分光光度計，德國Leica石蠟切片機等。

1.2 試驗方法

小鼠隨機分為正常組、模型組及治療組，每組10只。模型組與治療組均于皮下注射D-半乳糖1g/（kg·d）造模。第11天開始治療組用核桃仁水提液8 mL/（kg·d）灌胃治療，持續30 d。第41天水合氯醛麻醉處死。硫化鈉液脫去背部毛發，剝離約3 cm×3 cm皮膚放入Bouin液中固定[2]，HE染色觀察。取適量皮膚小塊，105℃烘干，參考王紅麗[3]等的方法測皮膚中羥脯氨酸（Hyp）含量。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 HE染色

正常組表皮結構完整厚度正常，細胞分層清晰，具明顯的表皮突及真皮乳頭，真皮層可見波浪狀纖維組織。模型組表皮變薄，表皮與真皮交界不清晰，膠原纖維變細卷曲，說明本實驗成功建立小鼠皮膚衰老模型。治療組表皮結構較規則厚薄不甚均勻，有表皮突及真皮乳頭，真皮層較厚，表皮與真皮界線清晰。見圖1。

圖1 HE染色（×100）

2.2 皮膚Hyp含量

正常組Hyp含量明顯高于模型組，且差異有高度統計學意義（P＜0.01），治療組與模型組比較，Hyp含量提高，且差異有統計學意義（P＜0.05），說明核桃仁具有良好促進皮膚Hyp含量增加的作用。見表1。

表1 核桃仁對皮膚Hyp影響

3 討論

正常人皮膚潤澤有彈性，表皮與真皮界線清晰，表皮規則，真皮層較厚，細胞層數較多，很少皺紋，結構完整。衰老時則皮膚變薄皺紋增多，缺乏光澤和彈性，表皮不規則真皮皺縮厚薄不均[4]。本實驗觀察到模型組皮膚表皮欠規則，真皮膠原顯著變薄，與衰老皮膚形態相似，就組織形態學變化而言，D-半乳糖皮下注射的小鼠皮膚已經出現老化的基本改變，可認為造模成功。

羥脯氨酸是合成膠原蛋白特有的氨基酸，約占其總氨基酸殘基的13.4%，它的含量可間接反映真皮內膠原蛋白含量的變化。隨年齡增長，膠原蛋白分子交聯老化，使真皮組織失去彈性形成皺紋，表現出衰老狀態[4]。故測定皮膚中Hyp含量可作為判定受試動物皮膚衰老程度的一個特殊而敏感的指標。本研究通過測定衰老皮膚中Hyp含量，發現各組皮膚老化程度的差別，驗證了核桃仁可有效促進皮膚Hyp含量增加，從而促進膠原蛋白生成，達到抗皮膚衰老的作用。

通過本研究，筆者初步推斷核桃仁中某些物質能夠提高Hyp含量，從而發揮抗衰老作用。但由于條件限制，究竟是何種物質發揮主要作用需進一步研究。

[1]顧成鵬，徐霞，潘科，等.核桃仁的功能特性及其藥理研究進展[J].試驗研究，2009，（9）：53-54.

[2]謝玲，崔紅晶 .皮膚切片制作的體會 [J].實用醫技雜志，2007，14（36）：5078-5079.

[3]陳勤.抗衰老研究實驗方法[M].北京：中國醫藥科技出版社，1996：609-610.

[4]張藝，揚恬 .皮膚抗衰老研究進展[J].中國老年學雜志，2001，7（21）：320-321.