α-硫辛酸、前列腺素E對糖尿病膀胱病變大鼠線粒體氧自由基損傷的保護作用

陳愛武

沈陽市于洪區人民醫院泌尿外科，遼寧沈陽 110141

神經源性膀胱（diabetic neurogenic bladder，DNB）是常見的糖尿病外神經病變，其發病率高達25%，是糖尿病神經病變在泌尿系統的主要表現，患者常出現尿潴留、尿失禁、排尿不盡、泌尿系感染、腎積水、膀胱造瘺。近年來國內外學者采用抗氧化劑治療DNB，但關于聯合抗氧化作用的協同作用尚未見報道，本文通過鏈脲佐菌素（STZ）誘導DC大鼠模型，觀察α-硫辛酸、前列腺素E對膀胱肌線粒體氧自由基損傷的保護作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 中國醫科大學實驗動物中心提供清潔級SD大鼠共60只，雄性，210～240 g。隨機取50只（空白對照組給予生理鹽水）大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ），劑量為65 mg/kg。注射后2周監測血糖，均確認為糖尿病。

1.1.2 分組 空白對照：注射生理鹽水；陽性對照組：鏈脲佐菌素；鏈脲佐菌素+α-硫辛酸組；鏈脲佐菌素+維生素E（15 mg/kg）；鏈脲佐菌素+維生素 E（60 mg/kg）；糖尿病+α-硫辛酸組+維生素 E，試驗第8周取大鼠提取線粒體測量相應指標。各組大鼠均為10只。α-硫辛酸（德國史達德公司）50mg/kg，2次/d腹腔注射。

1.1.3 線粒體提取 將禁食大鼠斷頭，取出肝臟剪成碎塊，反復沖洗后將肝組織碎塊制成勻漿，650 g離心5 min，留上清平衡后10 000 g離心25 min取中層制成混懸液測量指標。

1.2 指標測定

1.2.1 大鼠肝臟線粒體丙二醛（MDA）含量測定 以考馬司亮藍法定蛋白，設定緩沖體系為以0.1 mol/L HIS溶液溶于氯化鉀0.25 mol/L中 （pH=7.5），加入各組糖尿病大鼠線粒體，水浴45 min后加入25%TCA 1.0 ml終止反應，冷卻后加NBA和乙醇混合液4.0 ml，用力振搖45 s，離心取上面正丁醇層，525 nm波長比色，用硫代巴比妥酸法測定MDA。

1.2.2 大鼠肝臟線粒體琥珀酸脫氫酶的測定 硫酸甲酯吩嗪（PMS）反應法測量線粒體琥珀酸脫氫酶活性，SDH活性計算：（標準-測定）/標準=μmol/（min·mg）。

1.3 統計學處理

采用SPSS 14.0統計軟件分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用 t檢驗。

2 結果

用藥后線粒體MDA和琥珀酸脫氫酶活性的變化見表1。

表1 各組大鼠線粒體MDA和琥珀酸脫氫酶活性變化Tab.1 Mitochondria of rats in each group MDA and SDH changes

3 討論

糖尿病膀胱是糖尿病常見并發癥之一，多發生于血糖控制比較差的患者。因發病隱蔽，出現尿頻、尿不盡時癥狀已經比較嚴重，采用營養神經治療多無法控制癥狀。研究表明糖尿病膀胱功能障礙的主要原因之一是缺血/再灌注損傷[1-2]。研究表明[3]糖尿病膀胱張力的變化產生缺血再灌注會使氧自由基的生成數量明顯增加，脂質分子中的不飽和脂肪酸在氧自由基氧化生成過氧化脂質丙二醛（MDA）等小分子代表性產物，導致線粒體膜的損傷，阻斷其鏈式反應可能會控制糖尿病膀胱功能障礙[4]。

α-硫辛酸是一種雙硫化合物，它的抗氧化能力是葡萄糖的5～10倍，兼具脂溶性與水溶性的特性?？梢栽谌硗ㄐ袩o阻，到達任何一個細胞部位。美國加州大學柏克萊分校的派克博士（Dr.Lester Packer）發現硫辛酸不像別的抗氧化劑在體內只有一項特定的任務，它具“自由體”的身份，能在其他抗氧化劑短缺時為之“代行職責”，體內缺乏維生素E或C，硫辛酸將暫時接手它們的工作。它具有400倍的維生素C和E的抗氧化作用，而且硫辛酸還能大大增強維生素C和E的作用。德國早在20世紀80年代即開始應用α-硫辛酸治療糖尿病外周神經病變，取得了較好的臨床療效[5]；近年國內外學者研究提示α-硫辛酸治療糖尿病外周神經病變可能是通過抗氧化作用[6-7]。

維生素E是脂溶的抗氧化劑，降低線粒體細胞結構的多價不飽和脂肪酸免受自由基的損害，研究表明線粒體高濃度維生素E，減少過氧化反應產生的丙二醛，并且明顯提高收縮反應[8]。金濱等[9]研究表明，維生素E對膀胱功能的保護作用是通過抗氧化和維持鈣穩態的雙重機制實現的。

本研究采用小劑量維生素E對糖尿病大鼠膀胱功能進行保護，大鼠線粒體MDA和SDH與對照組比較，差異均無統計學意義；大劑量維生素E對糖尿病大鼠膀胱功能進行保護，大鼠線粒體MDA和SDH與對照組比較，差異有統計學意義。因此推測，維生素E在劑量較大時通過維持鈣穩態對膀胱功能起保護作用，在劑量比較小時通過抗氧化對膀胱功能起保護作用。小劑量維生素E對線粒體MDA和SDH的影響無保護作用，這與Levin等[4]的研究結果一致。本文采用小劑量維生素E組+α-硫辛酸聯合應用保護線粒體，療效優于單獨應用α-硫辛酸組，考慮為硫辛酸增強維生素E的抗氧化作用。

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