膽鹽對附紅細(xì)胞體活力影響試驗*

龔大春,錢 微,史小娜

附紅細(xì)胞體病是由附紅細(xì)胞體寄生于人、動物的紅細(xì)胞表面、血漿及骨髓內(nèi)所引起的以發(fā)熱、貧血、黃疸為主要臨床特征的人獸共患傳染病[1]。附紅細(xì)胞體病的出現(xiàn)在我國雖然只有30年的歷史[2]。但近年附紅細(xì)胞體病在人、動物呈逐年上升的趨勢,而其傳播方式還不十分清楚,據(jù)報道[3]附紅細(xì)胞體可能經(jīng)吸血昆蟲、節(jié)肢動物、血源、垂直和接觸等方式傳播,至于經(jīng)消化道傳播研究較少,消化道的主要活性物質(zhì)膽鹽對附紅細(xì)胞體的影響尚未見報道,為此開展了本試驗。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 選擇確診患附紅細(xì)胞體病,無并發(fā)癥且未用任何藥物治療,鏡檢RBC的附紅細(xì)胞體感染率在75%以上的病豬,無菌靜脈采血,按1∶10加入3.8%的檸檬酸鈉抗凝劑,混勻分裝置于4℃冰箱中暫存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 主要試劑儀器 豬膽鹽,規(guī)格25g,北京雙旋微生物制品廠;pH計(PB-10),電子天平,北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司;顯微鏡,恒溫培養(yǎng)箱,稱量瓶等。

1.2 方法

1.2.1 膽鹽對附紅細(xì)胞體活力的影響 電子天平稱取適量的豬膽鹽用滅菌生理鹽水配成0.003%、0.03%、0.1%、0.2%、0.3%、3%豬膽鹽溶液。分別取3 mL上述6種溶液于6個潔凈的稱量瓶中,再在每瓶中加 1 mL的附紅細(xì)胞體菌種混勻,置于37℃培養(yǎng)箱中,連續(xù)觀測6 h,每1 h觀測1次,在24 h時最后觀察1次,同時設(shè)生理鹽水對照。

1.2.2 附紅細(xì)胞體活力的判定標(biāo)準(zhǔn) 其活性按下列標(biāo)準(zhǔn)判定,附紅細(xì)胞體絕大多數(shù)吸附在紅細(xì)胞上,少數(shù)游離在血漿中的附紅細(xì)胞體前沖后撞的記為“5+”,在血漿中呈靈活自如的上下、左右、前后閃動,旋轉(zhuǎn),振擺的記為“4+”,旋轉(zhuǎn)、振擺和閃動較弱的記為“3+”,僅能見到滾動或擺動的記為“2+”,活動很微弱的記為“+”,未發(fā)現(xiàn)附紅細(xì)胞體活動的記為“-”。

2 結(jié) 果

膽鹽對附紅細(xì)胞體活力的影響見表1。

表1 膽鹽在不同時間對附紅細(xì)胞體活力的影響Table 1 The effect of cholic acid sodium salt on Eperythrozoon vigor

表1顯示,3%的膽鹽在2 h內(nèi)能顯著刺激附紅細(xì)胞體活力,2 h后活力下降,至6 h時活力喪失。0.3%和0.2%的膽鹽在4 h內(nèi)刺激附紅細(xì)胞體活力,4 h后活力下降,到24 h時其活力微弱。0.1%的膽鹽保持24 h附紅細(xì)胞體活力,其中在3-4 h活力增強。0.03%和0.1%膽鹽對活力的影響基本相同;0.003%的膽鹽在3 h內(nèi)對其活力無影響,3 h后其活力減弱。

3 討 論

試驗結(jié)果顯示,0.1%的膽鹽能保持附紅細(xì)胞體的活力,且在作用3-4 h時其活力增強;高濃度的膽鹽短時間作用可以刺激附紅細(xì)胞體的活力,長時間作用可以致死附紅細(xì)胞體;低濃度的膽鹽短時間作用對附紅細(xì)胞體的活力無影響,長時間作用能抑制附紅細(xì)胞體的活力,但不能將附紅細(xì)胞體致死;低于0.1%的膽鹽長時間作用后能抑制附紅細(xì)胞體的活力。

據(jù)文獻(xiàn)報道[4-7]人體小腸環(huán)境膽鹽的濃度為0.03%～0.3%,而關(guān)于動物小腸環(huán)境膽鹽濃度還未見相關(guān)報道。因此本試驗設(shè)計的膽鹽濃度范圍比較寬廣,為0.003%～3%。從理論上分析,人和動物十二指腸膽鹽濃度不會相差太遠(yuǎn),本試驗?zāi)扄}的濃度范圍應(yīng)該覆蓋了動物十二指腸膽鹽的濃度。據(jù)文獻(xiàn)報道[8]膽鹽對細(xì)菌有抑制作用,而對附紅細(xì)胞體的影響未見報道。本試驗顯示,膽鹽濃度在0.03～0.3%范圍內(nèi),對附紅細(xì)胞體的活力有不同程度的影響,在0.1%時能保持附紅細(xì)胞體的活力,在其它濃度對附紅細(xì)胞體活力有不同程度的抑制作用。

膽汁是由水、無機鹽、膽汁酸、膽固醇、膽色素、脂肪酸、卵磷脂等組成。在動物體內(nèi)膽鹽是由膽汁酸與甘氨酸或?；撬峤Y(jié)合形成的,市售膽鹽是膽汁酸的鈉鹽或鉀鹽。膽鹽的主要抑菌物質(zhì)是牛磺膽酸、甘氨酸和去氧膽酸等,對革蘭陽性桿菌有很強的抑制能力,而對革蘭陰性桿菌僅有輕微的抑制能力。膽鹽的抑菌機理主要是使細(xì)菌的細(xì)胞膜損壞或者菌體裂解,對某些細(xì)菌有溶解作用,而對附紅細(xì)胞體的作用機理尚需進(jìn)一步探討。

[1]蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)[M].4版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2002:141-143.

[2]許耀成.紅皮豬血液內(nèi)發(fā)現(xiàn)大量附紅細(xì)胞體初報[J].獸醫(yī)科技雜志,1982,(2):3.

[3]趙曉薇.附紅細(xì)胞體病的研究進(jìn)展[J].中國人獸共患病學(xué)報,2007,23(10):1047-1049.

[4]趙瑞香,李剛,牛生洋,等.微生態(tài)菌株 Lactobacillus acidophilus在模擬人體胃與小腸蛋白酶環(huán)境中抗性的研究[J].中國食品學(xué)報,2006,6(4):19-23.

[5]汪川,張朝武,劉益山,等.從人胃腸道源乳桿菌株中初步篩選耐酸耐膽鹽優(yōu)良株[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志,2006,18(1):19-20.

[6]陳欣,潘素華,胡黎黎,等.人源乳酸桿菌耐酸耐膽鹽能力的測定和鑒定[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2006,33(3):278-279.

[7]趙瑞香,孫俊良,李元瑞,等.嗜酸乳桿菌抗酸抗膽汁鹽能力的研究[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2004,32(2):58-60.

[8]周藹怡,郭永文,蔡芷荷,等.膽鹽中膽汁酸含量測定的探討[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2009,19(6):1427-1428.