應(yīng)用NCCLS EP9-A文件對(duì)街頭半自動(dòng)生化分析儀ALT測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比對(duì)

王學(xué)剛 孫國(guó)棟 李艷艷 魏淑梅

在無(wú)償獻(xiàn)血采血前進(jìn)行快速初篩丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，將極大降低采血后不合格率，提高采集效率，避免不合格血的采集，從而節(jié)約采集及檢驗(yàn)成本，具有良好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益［1］。但是在ALT初篩工作中，如何加強(qiáng)該項(xiàng)目的全面質(zhì)量管理，保證初篩結(jié)果與站內(nèi)檢驗(yàn)結(jié)果的一致性，成為血站檢驗(yàn)工作面臨的一項(xiàng)新的課題。筆者嘗試采用美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)EP9-A2文件［2］對(duì)街頭半自動(dòng)生化分析儀與站內(nèi)全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行ALT測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比對(duì)及偏差評(píng)估，以期了解NCCLS EP-9A方法在該項(xiàng)工作中的適用性，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器 Vital scientific生產(chǎn)的microlab 300半自動(dòng)生化儀2臺(tái)。OLYMOUS AU640全自動(dòng)生化分析儀。

1.2 試劑及質(zhì)控品 寧波美康生物科技公司生產(chǎn)的ALT檢測(cè)(單試劑法)試劑盒，批號(hào)20100811;OLYMOUS提供的檢測(cè)(雙試劑法)，批號(hào)1022;Roche公司生產(chǎn)的生化全項(xiàng)質(zhì)控品:低值批號(hào)10651257，高值批號(hào)10651265。

1.3 標(biāo)本 河北省邯鄲市中醫(yī)院和河北省邯鄲市中心血站日常檢驗(yàn)標(biāo)本。

1.4 測(cè)定及分析方法［3－5］(1)每天選取8份檢驗(yàn)標(biāo)本分別用3臺(tái)儀器按1→8進(jìn)行測(cè)定，再按相反順序8→1重復(fù)測(cè)定。連續(xù)測(cè)定 5 d。(2)記錄測(cè)定結(jié)果(X1i，X2i和Yi)X1i，X2i分別為2臺(tái)實(shí)驗(yàn)儀器microlab 300的測(cè)定結(jié)果，Yi為比較儀器AU640的測(cè)定結(jié)果，i為標(biāo)本編號(hào)(1～40)，計(jì)算每個(gè)標(biāo)本測(cè)定結(jié)果的均值標(biāo)本重復(fù)測(cè)定值間差值的絕對(duì)值(Dx1i，DX2i和Dyi)及2臺(tái)半自動(dòng)生化與比較方法——AU640測(cè)定結(jié)果均值間的差值(Yi－X1i和Yi－X2i)。(3)以Yi對(duì)X1i和X2i分別作散點(diǎn)圖。(4)以對(duì)X1i和X2i分別作偏差圖。(5)目測(cè)離群點(diǎn)。計(jì)算:計(jì)算樣本重復(fù)測(cè)定結(jié)果均值間差值)的平均數(shù)。判斷:超出上述平均數(shù)4倍時(shí)檢驗(yàn)結(jié)果視為無(wú)效。

1.5 數(shù)據(jù)處理［3－5］

1.5.1 離群點(diǎn)檢驗(yàn)(儀器內(nèi)):分別對(duì)3臺(tái)儀器測(cè)定的所有點(diǎn)進(jìn)行離群點(diǎn)檢驗(yàn)。根據(jù)下列公式計(jì)算比較儀器AU640(Y)與實(shí)驗(yàn)儀器microlab 300(X)2次測(cè)定結(jié)果差值的絕對(duì)值的均值:

若microlab 300與AU640內(nèi)部各樣本的2次測(cè)定結(jié)果的差值絕對(duì)值小于4倍差值絕對(duì)值的均值，則認(rèn)為儀器內(nèi)部無(wú)離群點(diǎn)。如果超出4倍均值，需計(jì)算相對(duì)的差值絕對(duì)值(Dxi’，Dyi’)的均值:

若儀器內(nèi)部各標(biāo)本的2次測(cè)定結(jié)果的差值絕對(duì)值小于4倍相對(duì)差值絕對(duì)值的均值，則認(rèn)為儀器內(nèi)部無(wú)離群點(diǎn)。反之則認(rèn)為該點(diǎn)為離群點(diǎn)。如果只有1個(gè)離群點(diǎn)，可將這個(gè)點(diǎn)刪除，繼續(xù)下述分析。如果離群點(diǎn)超過(guò)2個(gè)以上，需分析原因，若找到明確原因，重新測(cè)定這些樣本，并記錄原因。然后再進(jìn)行離群點(diǎn)檢驗(yàn);若未能找到明確原因，必須重新收集樣本。如果未能找到明確原因而且并非收集標(biāo)本錯(cuò)誤，也并未超過(guò)儀器檢測(cè)范圍。必須停止實(shí)驗(yàn)。檢測(cè)儀器狀態(tài)。

1.5.2 繪制散點(diǎn)圖:2臺(tái)microlab 300的測(cè)定結(jié)果分別為X1、X2，AU640測(cè)定值為Y，i為標(biāo)本編號(hào)(i=1～40)，j為測(cè)定次序(j=1或2)繪制2種散點(diǎn)圖?？芍庇^觀察到離群點(diǎn)、線性程度、偏倚等。①分別繪制2臺(tái)microlab 300均值與AU640均值)的散點(diǎn)圖;②分別繪制AU640均值與2臺(tái)microlab 300與AU640的均值差的散點(diǎn)圖。

1.5.3 線性相關(guān)的目測(cè)檢查:通過(guò)觀察前一種散點(diǎn)圖，可直接目測(cè)microlab 300與AU640之間的線性關(guān)系，如果是線性的，進(jìn)入下述分析。如果是非線性的，需先確定是否存在超過(guò)檢測(cè)項(xiàng)目濃度范圍的極端值，剔除后再進(jìn)行線性測(cè)定;如果是線性的，進(jìn)入下述分析:如果還是非線性的，需停止試驗(yàn)，檢測(cè)儀器狀態(tài)。增加標(biāo)本含量重新進(jìn)行比對(duì)。

1.5.4 X值適合范圍檢驗(yàn):通過(guò)相關(guān)系數(shù)r或r2評(píng)價(jià)比較儀器microlab 300與AU640納入數(shù)據(jù)范圍是否適合。若r≥0.975或r2≥0.95認(rèn)為納入數(shù)據(jù)范圍足夠?qū)?。r2＜0.95，需要拓寬數(shù)據(jù)范圍。增加標(biāo)本含量。

1.5.5 計(jì)算回歸方程:選擇EXCEL統(tǒng)計(jì)軟件得出80組(40×2)數(shù)據(jù)的microlab 300與AU640之間回歸方程Y=a+bX。

1.5.6 計(jì)算方法間的系統(tǒng)誤差:根據(jù)臨床使用要求，將各個(gè)項(xiàng)目給定的醫(yī)學(xué)決定水平濃度Xc代入回歸方程，計(jì)算實(shí)驗(yàn)方法(Y)與比較方法(X)之間的系統(tǒng)誤差(SE)。

2 結(jié)果

2.1 2臺(tái)microlab 300測(cè)定均值分別與AU640測(cè)定均值數(shù)據(jù)散點(diǎn)圖(圖1，2)。

圖1 1號(hào)設(shè)備對(duì)AU640散點(diǎn)圖

圖2 2號(hào)設(shè)備對(duì)AU640散點(diǎn)圖

2.2 2臺(tái)microlab 300ALT測(cè)定均值分別與AU640測(cè)定均值偏倚圖(圖3，4) 方法內(nèi)及方法間離群值檢查:EP9-A文件允許從分析數(shù)據(jù)中刪除2.5%的離群值，有一樣本2次測(cè)定的差值超過(guò)允許范圍為離群點(diǎn)，在方法內(nèi)離群值檢查中2臺(tái)microlab 300半自動(dòng)生化分析儀最初各有3和4個(gè)離群點(diǎn)，我們又對(duì)相應(yīng)的樣本進(jìn)行了重新測(cè)定，最終3個(gè)系統(tǒng)內(nèi)部均無(wú)離群點(diǎn)，但是2臺(tái)microlab 300半自動(dòng)生化系統(tǒng)分別與AU640全自動(dòng)生化系統(tǒng)間仍各有1個(gè)離群點(diǎn)，從數(shù)據(jù)中刪除。

圖3 1號(hào)設(shè)備對(duì)AU640偏差散點(diǎn)圖

圖4 2號(hào)設(shè)備對(duì)AU640偏差散點(diǎn)圖

2.3 2臺(tái)microlab 300與AU640測(cè)定ALT的相關(guān)系數(shù)和回歸方程 測(cè)定結(jié)果的相關(guān)性:以AU640系統(tǒng)作為目標(biāo)檢測(cè)系統(tǒng)，兩半自動(dòng)系統(tǒng)與其進(jìn)行相關(guān)與回歸分析。各檢測(cè)系統(tǒng)間的相關(guān)系數(shù)均大于0.975，說(shuō)明回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距可靠，可以用它們?nèi)ス烙?jì)不同檢測(cè)系統(tǒng)間的系統(tǒng)誤差。見(jiàn)表1。

表1 2臺(tái)半自動(dòng)生化系統(tǒng)的相關(guān)系數(shù)及直線回歸方程

2.4 根據(jù)上述線性方程，2臺(tái)microlab 300與AU640測(cè)定ALT間在不同Xc上的預(yù)期偏差和相對(duì)偏差，以方法學(xué)比較的系統(tǒng)誤差＜1/2 CLIA'88的允許誤差范圍為臨床可接受性能的判斷標(biāo)準(zhǔn)。兩半自動(dòng)生化系統(tǒng)在給定醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)的預(yù)期偏差除了在20 U時(shí)設(shè)備1在允許偏差界線上以外，其余各醫(yī)學(xué)決定水平上2臺(tái)半自動(dòng)生化分析系統(tǒng)ALT的測(cè)定結(jié)果在比較范圍內(nèi)與AU640全自動(dòng)生化分析系統(tǒng)具有可比性。見(jiàn)表2。

表2 2臺(tái)microlab 300系統(tǒng)與AU640間在不同Xc上的預(yù)期偏差和相對(duì)偏差

3 討論

我們依據(jù)NCCLS的標(biāo)準(zhǔn)化文件EP9-A對(duì)測(cè)定ALT的2種設(shè)備(半自動(dòng)和全自動(dòng))進(jìn)行了比較，EP9-A文件為臨床實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的使用者及生產(chǎn)廠家提供了對(duì)評(píng)價(jià)測(cè)同一被測(cè)物的2種方法之間偏倚的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。對(duì)于使用者，評(píng)價(jià)的目的在于確定2種方法在允許范圍內(nèi)能否得到相同的結(jié)果。在臨床實(shí)驗(yàn)室中，經(jīng)常會(huì)進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)，EP9-A為臨床實(shí)驗(yàn)室工作者提供了采用患者樣本進(jìn)行方法學(xué)比較的標(biāo)準(zhǔn)化途徑［6］。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，使用microlab 300半自動(dòng)生化分析儀配國(guó)產(chǎn)單試劑系統(tǒng)與AU640全自動(dòng)生化分析儀與儀器廠家配套試劑(雙試劑)測(cè)定患者血清樣本ALT濃度時(shí)，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏倚在線性范圍內(nèi)能被接受，其結(jié)果的可比性良好。但是，鑒于半自動(dòng)生化分析系統(tǒng)與全自動(dòng)生化分析系統(tǒng)的差異，事先使用商品化的標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)半自動(dòng)生化分儀的系數(shù)進(jìn)行調(diào)整和操作人員的操作規(guī)范性培訓(xùn)是取得良好檢測(cè)結(jié)果的保證。

使用半自動(dòng)生化分析儀和速率法對(duì)血液ALT項(xiàng)目進(jìn)行初篩，經(jīng)檢測(cè)，其精密度可達(dá)到CV＜6%;使用全自動(dòng)生化分析儀和速率法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行ALT的復(fù)檢，經(jīng)檢測(cè)，其精密度可達(dá)到CV＜5%。且兩設(shè)備定期使用ALT定值血清進(jìn)行校準(zhǔn)，并使用室內(nèi)質(zhì)控品對(duì)精密度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，仍然有大量的珍貴血液因ALT不合格而報(bào)廢。我們通過(guò)對(duì)ALT報(bào)廢血液進(jìn)行調(diào)查和分析，發(fā)現(xiàn)這部分血液使用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)，90%為41～45 U的標(biāo)本，100%為＜50 U的標(biāo)本，而這部分血液初篩檢測(cè)值80%以上為35～40 U的標(biāo)本，100%為30～40 U的標(biāo)本。而獻(xiàn)血者健康檢查標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定ALT＞40 U/L，即為不合格。由于初篩標(biāo)本為末梢血標(biāo)本，而復(fù)檢標(biāo)本為靜脈血標(biāo)本，本身存在差異，且初篩使用設(shè)備、試劑與復(fù)檢使用設(shè)備、試劑不同，這可能導(dǎo)致兩設(shè)備準(zhǔn)確與精密度均符合要求，卻因設(shè)備本身不精密度的疊加及標(biāo)本本身差異造成初篩合格，而復(fù)檢不合格的情況發(fā)生，導(dǎo)致珍貴的血液資源被浪費(fèi)。因此為減少血液浪費(fèi)，加強(qiáng)初篩設(shè)備與復(fù)檢設(shè)備的日常比對(duì)顯得十分重要［7］。

1 陳長(zhǎng)榮，張永昌，張遼明，等.采血前ALT快速檢測(cè)的意義.中國(guó)輸血雜志，2004，17:164.

2 The National Committee for Clinical Laboratory Standards.Method Com-parison and bias Estimation using Patient samptes.Approved Guideline，Second Edition，2002，EP92A2.

3 李傳達(dá).國(guó)產(chǎn)酶試劑盒在Beckm an Syn chron CX9生化儀上的應(yīng)用研究.瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，24:330.

4 郭健，謝潔紅，趙海艦.方法學(xué)比較實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)及兩種白蛋白測(cè)定方法的比較.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2000，23:343-345.

5 張秀明，莊俊華，徐寧，等.不同檢測(cè)系統(tǒng)血清酶測(cè)定結(jié)果的偏倚評(píng)估與可比性研究.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，29:347.

6 李傳達(dá)，袁平宗.兩種丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑的對(duì)比研究及偏倚.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，28:1082.

7 張維.運(yùn)用設(shè)備比對(duì)及改進(jìn)初篩設(shè)備降低血液ALT報(bào)廢率.職業(yè)與健康，2010，26:1226.