米非司酮作用下Bcl-2及Fas在子宮腺肌病異位病灶中的表達

婁 娜,駱永鳳,田雪紅

(1.長春市中心醫院婦產科,吉林 長春130051;2.吉林省人口生命科學技術研究院;3.吉林大學第二臨床醫院婦產科)

子宮腺肌病是指子宮內膜向肌層良性浸潤并在其中彌漫性生長。米非司酮是一種抗孕激素,可以誘導子宮內膜異位癥異位內膜細胞凋亡。本實驗通過對米非司酮作用下,子宮腺肌病患者子宮肌層的異位病灶中細胞凋亡相關因子Bcl-2及Fas的表達變化的研究,從細胞凋亡的角度為其治療子宮腺肌病提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 對象和分組

研究對象為2003年1月-2009年1月在長春市中心醫院婦產科,經臨床確診為子宮肌腺病,要求手術治療的180例患者。隨機分成兩組,實驗組102例,對照組78例。實驗組中54例于月經周期第8天給予米非司酮25 mg口服,每日兩次,連服2周,停藥后行刮宮術,病理證實為分泌期者52例,增生期者2例,隨后行手術治療。另48例于月經前1周給予米非司酮口服,用法同上,停藥后即手術治療。故實驗組中相當于增生期者50例,分泌期者52例。對照組不予服藥,其中有40例于月經后2-3天行手術治療,相當于增生期,38例于月經前3-7天行手術治療,相當于分泌期。上述患者,均行子宮切除術。實驗組患者年齡為38-52歲,平均年齡為45.76±2.88歲,對照組年齡為40-52歲,平均年齡為46.35±3.14歲,兩組差異無顯著性(P＞0.05)。上述患者均已婚,有生育史,無婦科內分泌疾病史,卵巢功能及肝腎功能正常,術前3個月未服用激素類藥物及中藥類藥物,合并子宮肌瘤及卵巢內膜異位囊腫者排除。術后病理回報均證實為子宮腺肌病。

1.2 方法

1.2.1應用免疫組化法檢測肌層異位病灶中Bcl-2及Fas基因的表達變化。Bcl-2及Fas陽性反應產物為棕黃色顆粒,多分布于細胞膜和(或)細胞漿中。綜合細胞著色及陽性細胞百分率數判定,參照文獻[1],按如下通用標準進行評分和積分:①按顯色程度積分:細胞無著色,記為0分;細胞輕度著色染為淡黃色,記為1分;細胞著色為黃色,記為2分;細胞明顯著色為棕黃色,為3分;②按陽性細胞百分率積分:無細胞顯色或陽性細胞數小于5%積0分;5%-35%細胞顯色者積1分;36%-65%細胞顯色者積2分;65%以上細胞顯色者積3分。兩種評分相加除以2,按積分高低分為:0分為陰性(-);0.5-1分為弱陽性(+);1.5-2為陽性(++);2.5-3為強陽性(+++)。

1.2.2統計學分析 各組數據采用百分率表示,計量資料采用t檢驗,計數資料采用卡方檢驗。以P＜0.05為顯著差異,P＜0.01為極顯著差異,P＞0.05為無顯著差異。

2 結果

2.1 Bcl-2基因的表達

Bcl-2基因陽性反應產物主要分布在細胞膜和(或)細胞漿中,陽性細胞呈彌漫性分布。實驗組增生期與分泌期,Bcl-2的陽性表達率分別為26%、23.08%;對照組增生期與分泌期Bcl-2的陽性表達率分別為77.5%、71.05%。見表1。

表1 子宮腺肌病異位病灶中Bcl-2的表達

實驗組中,增生期與分泌期相比較,Bcl-2的表達無顯著性差異(P＞0.05)。對照組中,增生期與分泌期相比較,Bcl-2的表達亦無顯著性差異(P＞0.05)。而兩組的增生期與分泌期分別比較,以及兩組綜合比較,Bcl-2的表達有極顯著性差異(P＜0.01)。提示實驗組較對照組Bcl-2的陽性表達率明顯下降。見表3。

2.2 Fas基因的表達

Fas陽性反應產物的分布,與Bcl-2相似,主要表達在細胞膜和(或)細胞漿中,陽性細胞呈彌漫性分布。實驗組的增生期與分泌期,Fas的陽性表達率分別為80%、84.62%;對照組增生期與分泌期Fas的陽性表達率分別為45%、52.63%。見表2。

實驗組中,增生期與分泌期相比較,Fas的表達無顯著性差異(P＞0.05)。對照組中,增生期與分泌期相比較,Fas的表達亦無顯著性差異(P＞0.05)。而兩組的增生期與分泌期分別比較,以及兩組綜合比較,Fas的表達有極顯著性差異(P＜0.01)。提示實驗組較對照組Fas的陽性表達率明顯升高。見表3。

表2 子宮腺肌病異位病灶中Fas的表達

表3 Bcl-2及 Fas在各組中表達差異比較

3 討論

3.1 細胞凋亡與子宮腺肌病

近年來,子宮內膜細胞凋亡成為婦科領域的一個研究熱點。有研究表明,Bcl-2基因表達可抑制細胞凋亡,促使細胞存活,對異位內膜的種植、生長有重要意義[2,3]。Matsumoto等[2]發現Bcl-2基因表達在子宮腺肌病病灶無周期性變化,分泌期及月經期高于在位內膜,增生期低于在位內膜,因此認為子宮腺肌病的發生與Bcl-2的表達顯著增高,細胞凋亡率明顯下降有關。在本研究中發現,實驗組和對照組中,增生期與分泌期手術患者相比較,其子宮肌層異位病灶中Bcl-2表達無周期性變化,與Matsumoto等的結果相類似。由此推論,由于子宮腺肌病異位病灶中Bcl-2的表達無周期性變化且維持一定的陽性率,導致其中的部分內膜細胞免于凋亡,進而細胞凋亡率明顯下降,這也許是子宮腺肌病的發病機制之一。

目前關于Fas基因與子宮腺肌病的報道較少。有研究表明:在正常子宮內膜中,Fas基因表達于整個子宮內膜周期[4],從增生期、分泌期到月經期呈上升趨勢,與子宮內膜細胞凋亡的發生一致,并受雌孕激素的周期性調控,子宮腺肌病在位及異位內膜中Fas基因的表達強度均較正常子宮內膜降低[5]。提示Fas基因在促子宮內膜凋亡中可能是一種直接作用因子。在本研究中發現,各組增生期與分泌期相比較,與Bcl-2的表達相類似,病灶中Fas基因的表達亦無明顯周期性變化且維持一定的陽性率,由此推論,做為促進細胞凋亡的因子,Fas的持續陽性表達以及無周期性變化,可能導致部分內膜細胞不凋亡,得以繼續生存,且異位內膜細胞對凋亡因子的敏感性下降,進而導致細胞凋亡率下降甚至停滯,異位病灶形成并發展。

3.2 米非司酮作用下子宮腺肌病異位病灶中Bcl-2及Fas基因的表達變化

米非司酮作為一種抗孕激素,已廣泛地應用于婦產科領域。近年來,亦可見米非司酮治療子宮腺肌病的報道。如于月經第1-3天口服米非司酮10 mg/d,3個月為一個療程,可使患者停經,痛經癥狀消失,子宮體積明顯縮小,副反應少見[6]。但其治療機理尚未完全清楚,而目前從細胞凋亡的角度來研究米非司酮對子宮腺肌病的治療作用的相關報道較少。本研究中采用免疫組化法檢測服用米非司酮后的實驗組以及未服藥的對照組,子宮腺肌病異位病灶中Bcl-2及Fas基因的表達,結果顯示Bcl-2基因的表達,實驗組明顯低于對照組,而Fas基因的表達實驗組明顯高于對照組,且均有極顯著性差異(P＜0.01)。由此可以證實,米非司酮可促使子宮腺肌病異位病灶中Bcl-2表達降低,Fas表達增強,而作為細胞凋亡抑制因子Bcl-2及細胞凋亡促進因子Fas,它們的這一變化,必將誘發細胞凋亡的增強,進而達到治療效果。

3.3 研究米非司酮對子宮腺肌病細胞凋亡影響的意義

本實驗結果從細胞凋亡的角度為米非司酮臨床治療子宮腺肌病的良好療效提供了理論依據。在今后的研究中可進一步考慮最佳藥物劑量以及服用時間,使異位病灶中細胞凋亡的水平更接近正常子宮內膜的凋亡水平。考慮米非司酮副作用較少,使用方便,價格低廉,應有較好的應用前景。

[1]李 剛,陳必良,辛曉燕,等.米非司酮對早孕絨毛滋養層細胞Bcl-2和Caspase-3表達的影響[J].細胞與分子免疫學雜志,2003,19(2):136.

[2]Matsumoto Y,Iwasaka T,Yamasaki F,et al.Apoptosis and Ki-67 expression in adenomyotic lesions and in the corresponding eutopic endometrium[J].Obstet-Gynecol,1999,94:71.

[3]Jones RK,Searle RF,Bulmer JN.Apoptosis and bcl-2 expression in normal human endometrium,endometriosis and adenomyosis[J].Human Reprod,1998,13:3496.

[4]Song J,Rutherford T,Naftolin F,et al.Hor monal regulation of apoptosis and the Fas and Fas ligand system in human endometrial cells[J].Mol Hum Reprod,2002,8(5):447.

[5]Selam B,Kayisly UA,MulayimN,et al.Regulation of ligand expressionby estradiol and progesterone in human endometrium[J].Biol Reprod,2001,65:979.

[6]魏福敏,李 燕,池紅云.米非司酮治療圍絕經期子宮腺肌病58例分析[J].中華實用中西醫雜志,2003,16:701.