骨肉瘤中低氧誘導因子-2α(HIF-2α)、骨橋蛋白(OPN)、血管內皮生長因子(VEGF)的表達及其臨床意義

謝 虎,李永忠*,郭風勁,張繼平,林 華,習 巍

(1.宜昌市第二人民醫院骨科,湖北宜昌443000;2.華中科技大學附屬同濟醫院骨科)

骨肉瘤是一種常見的骨的原發性惡性腫瘤,好發于青少年患者,亦稱成骨肉瘤,其侵襲力強、轉移早且轉移率高等特點往往使得臨床治療失敗[1]。雖然近幾年輔助化療、保肢手術的運用使骨肉瘤患者5年生存率和保肢成功率顯著提高,但長期療效及患者的遠期存活率并無明顯改善。這就使越來越多的學者將目光轉向了對于骨肉瘤發生、發展、轉移機制以及影響這些過程的相關因素的研究[2,3]。本研究采用免疫組化法,從蛋白水平上檢測了93例骨肉瘤組織中低氧誘導因子-2α,骨橋蛋白,血管內皮生長因子,以期探討三者在腫瘤轉移、復發中的作用及相互關系,進而反映其能否作為檢測骨肉瘤預后的相關指標。

1 資料與方法

1.1一般資料選用我院病理科1991年元月-2005年六月期間收治的93例骨肉瘤標本和25例瘤周正常骨組織。腫瘤直徑5-26 cm,平均12 cm。組織學分型參照Dahlin分型標準[4]及WHO新分型法。全部標本經臨床、病理、X線相結合確診。患者分為初發組75例,復發組18例,伴肺轉移組 20例,不伴肺轉移組73例。

1.2免疫組化方法所有一抗及二抗系濃縮型,儲存于-20℃冰箱備用,用前以緩沖液(0.01M的磷酸鈉、0.25 M 的 NaCl、pH7.6)及穩定劑(15 mg/ml的牛血清白蛋白)按照1∶100稀釋。

檢測用SP法(SP試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司)。選用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3評價指標①細胞核內有呈淺黃、棕或棕褐色顆粒為HIF-2α陽性,觀察5個高倍鏡視野(10×20倍)陽性細胞所占比例。無陽性細胞或陽性細胞數＜1%為(-),1%-10%為(+),11%-50%為(++),＞50%為(+++)。②OPN表達的計數同樣采用上述圖文分析系統,按陽性細胞所占比例分為(-):瘤細胞染色陰性或＜5%的瘤細胞有少量著色;(+):5%-20%的瘤細胞呈弱陽性;(++):21%～50%的瘤細胞陽性;(+++):＞50%的瘤細胞陽性且著色較強。③腫瘤組織VEGF表達的計數方法也同樣采用上述圖文分析系統,以腫瘤組織VEGF陽性率及陽性細胞質中顆粒數及大小分為如下級別:陰性(-):瘤細胞完全不染色;弱陽性(+):瘤細胞染色＜25%呈淺黃色;陽性(++):26%-50%的瘤細胞染色呈棕黃色;強陽性(+++):＞50%的瘤細胞染色呈棕褐色。

1.4統計學處理數據采用SPSS 12.0軟件進行統計學處理和分析,資料采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1HIF-2α,OPN,VEGF在不同組織中的表達情況比較與正常骨組織相比,瘤組織中HIF-2α,OPN,VEGF的表達明顯提高,差別均具有統計學意義(P＜0.05);另外,與不伴肺轉移組相比,復發組和肺轉移HIF-2α,OPN,VEGF的表達明顯提高,差別亦具有統計學意義(P＜0.05)。結果見表1。

表1 HIF-2α,OPN,VEGF在不同組織中的表達情況比較 例(%)

2.2骨肉瘤組織中HIF-2α、OPN表達與VEGF的關系VEGF陽性組中HIF-2α的陽性表達率與VEGF陰性組中HIF-2α的表達率具有統計學意義(P＜0.05)。另外 VEGF陽性組中OPN的陽性表達與VEGF陰性組表達率在具有統計學意義(P＜0.05)。由此可見,HIF-2α和OPN的表達與VEGF有顯著相關性。結果見表2。

表2 骨肉瘤組織中HIF-2α、OPN表達與的 VEGF關系例(%)

3 討論

惡性腫瘤的生長侵襲和轉移是一個多環節,多步驟的復雜過程,有多種因子參與。低氧誘導因子(HIF)是近年來研究較多的與腫瘤行為的許多重要方面均有關的因子。HIF是廣泛存在于人和哺乳動物體內的一種結合因子,主要HIF-1、HIF-2和HIF-3。HIF-2和HIF-1的基因序列有48%同源,有相同的DNA結合位點。HIF-2是缺氧誘導的一種異源二聚體轉錄因子,主要由HIF-2α和HIF-1b兩個亞單位組成,其活性由HIF-2α決定[5]。OPN是一種具有多種生物學功能的分泌性、糖基化的磷酸蛋白,在細胞的黏附、遷移、信號轉導及組織修復中具有重要作用。隨著腫瘤研究的深入,人們發現OPN在肝癌、肺癌、乳腺癌及頭頸部腫瘤等原發腫瘤及其轉移瘤組織中高表達,提示OPN可能與腫瘤的侵襲轉移密切相關[6,7]。實體腫瘤的血管新生與瘤細胞分泌的多種血管生長因子有關。在已發現的20多種多肽類血管生長因子中,VEGF是針對內皮特異性最高,促血管生長作用最強的關鍵調節因子[8],它以旁分泌方式通過調節內皮細胞整合素及蛋白酶激活因子的表達激活細胞內信號傳導通路,增加微血管通透性等途徑而誘導內皮細胞增殖,遷移。因此是一種內皮細胞特異的致分裂原,并參與腫瘤性基質形成及新生血管形成。

本研究結果表明,93例骨肉瘤的HIF-2α表達陽性率為33.3%,25例癌旁正常骨組織中HIF-2α表達陰性。但與其他腫瘤比,HIF-2α在骨肉瘤組織中表達率較低。另外,VEGF陽性組中HIF-2α和OPN的陽性表達率與VEGF陰性組中HIF-2α的表達率具有統計學意義(P＜0.05)。因而為尋找新的腫瘤治療靶點提供了更多的途徑。

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