平喘湯對支氣管哮喘大鼠肺組織形態學及肺指數的影響

馮高華 朱 虹 孫 峰 賈永良 張翠萍

1揚州大學醫學院（江蘇揚州225001）2江蘇省張家港市中醫院（江蘇張家港215600）

本研究在建立大鼠支氣管哮喘模型的基礎上，通過觀察臨床經驗方平喘湯對大鼠支氣管和肺組織及肺指數的影響，以探討其對支氣管哮喘組織學的作用機制，為中醫藥防治支氣管哮喘提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康清潔級SD大鼠，48只，雌雄不拘，（225±10.711）g，南京醫科大學實驗動物中心提供，許可證號SCXK（蘇）2008-0004。飼養于室溫18～22℃環境中，自由飲水飲食1周。

1.2 儀器 WH-1型醫用超聲霧化器，無錫市第四機床電器廠；萊卡RM 2245切片機。

1.3 藥物制備 平喘湯由炙麻黃、杏仁、葶藶子、蘇子、萊菔子、白芥子、枳殼、桔梗、地龍、僵蠶、五味子等藥物組成。藥物均由江蘇省蘇北人民醫院中藥房提供，口服液由揚州大學醫學院中西醫結合研究所制備，藥物質量濃度為每毫升含生藥2g。藥液置于250mL鹽水瓶中，4℃保存備用。對照藥物博利康尼以生理鹽水溶解，備用。

1.4 動物模型制備 參考文獻[1]，將模型組及各治療組大鼠腹腔注射10%卵蛋白1mL和氫氧化鋁干粉100mg致敏。2周后予超聲霧化吸入1%卵蛋白激發，隔日1次，每次30min，共激發2周，即可觀察到大鼠呼吸加快、點頭呼吸及站立不穩等表現，示造模成功。正常對照組用生理鹽水代替抗原液進行注射和霧化吸入。

1.5 分組與給藥 按隨機數字法將其分為正常對照組、模型組、平喘湯低劑量組（0.7mL）、平喘湯中劑量組（1.3mL）、平喘湯高劑量組（2.6mL）、陽性藥物對照組（0.1mL），每組8只。各組均從實驗第3周起灌胃給藥，正常組及模型組給予1.3mL生理鹽水，每日1次，連續4周。

1.6 標本采集及檢測 參考文獻[2]方法，準確稱取大鼠體質量后，頸椎脫位法處死大鼠，立即打開胸腔，無菌條件下取出肺臟，稱濕質量測定肺指數，肺指數=肺臟總濕質量/實驗后體質量。取右肺中葉，以10%甲醛固定。把固定好的組織塊入梯度酒精脫水，然后常規透明、浸蠟、包埋。將包有組織的蠟塊用萊卡切片機切為 5μm的薄片，貼于載玻片上，脫蠟后進行常規 HE染色后鏡檢、攝片，捷達801圖文分析系統分析。

1.7 統計學處理 采用SPSS 15.0統計軟件。所有計量資料均用（±s）表示，采用單因素方差分析（LSD檢驗）比較各組間差異。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 肉眼觀察 正常組大鼠肺臟外觀正常，顏色淡紅，支氣管黏膜淡紅。模型組大鼠肺臟充血、腫大，其中2只大鼠肺臟顏色深紅；模型組大鼠氣管切開，可見支氣管、細支氣管黏膜充血，有較多黏痰，其中1只大鼠支氣管中有黏液栓。各治療組大鼠肺臟、支氣管黏膜充血情況均較模型組為輕，支氣管中有少許清稀痰液。在實驗過程中，所有大鼠均無死亡。

2.2 各組大鼠支氣管-肺組織形態學變化 見圖1。正常組大鼠肺組織偶見少量炎細胞浸潤。模型組大鼠可見支氣管壁增厚，杯狀細胞及黏膜皺襞增多，大量炎細胞浸潤，纖毛上皮細胞脫落，基底膜暴露，肺泡壁部分增厚，部分斷裂。平喘湯低劑量組淋巴細胞浸潤，纖毛上皮細胞脫落，支氣管壁及肺泡壁增厚，氣管腔內大量分泌物潴留，肺泡壁增厚，杯狀細胞增多。平喘湯中劑量組：淋巴細胞浸潤，管腔見炎性分泌物，黏膜皺襞增多，支氣管壁及肺泡壁稍增厚。平喘湯高劑量組：淋巴細胞浸潤，管腔少量分泌物潴留。與模型組比較，各治療組淋巴細胞等炎性細胞浸潤有不同程度減少，肺組織充血、水腫現象減輕，支氣管管壁和肺泡壁增厚程度減輕。平喘湯劑量越高，則支氣管腔內分泌物潴留越少。

圖1 各組肺組織病理組織圖（HE染色）

2.3 平喘湯對哮喘大鼠肺指數的影響 哮喘組及各治療組大鼠肺指數均高于正常組，差異顯著（P＜0.05）；各治療組大鼠肺指數均低于模型組，有顯著差異（P＜0.05）；與陽性藥物對照組相比，平喘湯高劑量組大鼠肺指數無差異（P＞0.05）；平喘湯中、低劑量組大鼠肺指數顯著高于陽性藥物對照組（P＜0.05）。

表1 各組肺指數比較 （±s）

表1 各組肺指數比較 （±s）

與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與陽性藥物對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組 別 n 肺臟指數（×10-3）正常對照組 8 5.64±0.032模型組 8 8.73±0.115**陽性藥物對照組 8 6.49±0.087*△平喘湯高劑量組 8 6.02±0.184*△△平喘湯中劑量組 8 7.93±0.312**△#平喘湯低劑量組 8 8.52±0.143**△##

3 討 論

支氣管哮喘的本質是由多種炎性細胞、多種炎性介質和多種細胞因子參與的慢性氣道炎癥[3]，氣道炎癥是氣道高反應性（AHR）的重要基礎。氣道炎癥學說是支氣管哮喘的的主要發病機制。炎性細胞如淋巴細胞、嗜酸性粒細胞的激活、浸潤在此過程中起著非常重要的作用。氣道炎癥的形成與Ⅰ型變態反應、上皮損傷以及神經炎癥有關。通常情況下，機體內的Th1/Th2處于相對恒定狀態，哮喘發作時Th1細胞功能下降，Th2細胞功能上升，因而產生大量的炎性細胞和細胞因子。正常氣道上皮為假復程纖毛柱狀上皮細胞，其間散在著杯狀細胞。氣管壁增厚、杯狀細胞增多、上皮細胞損傷，是支氣管哮喘氣道持續性損傷和結構改變即氣道重構的病理學特征。本研究應用卵蛋白作為致敏原復制大鼠哮喘模型，致使大鼠出現了氣道炎癥及氣道的高反應性，因此模型組大鼠可見支氣管壁增厚，杯狀細胞及黏膜皺襞增多，大量炎細胞浸潤，纖毛上皮細胞脫落，基底膜暴露，肺泡壁部分增厚，部分斷裂。由于致敏原導致大鼠肺部變應性炎癥，因此肺臟充血、腫大，濕重增加，而由于氣道的高反應性，大鼠吸收障礙，營養不足，故而體質量下降，所以肺指數增高。

中醫學認為，支氣管哮喘屬中醫學“哮證”、“喘證”等范疇，其基本病理因素是痰濁內停（即夙根），其發作是因為外邪觸動伏痰，痰隨氣升，氣因痰阻，痰氣交阻，壅塞氣道，肺管因而狹窄所致。平喘湯是以三子養親湯和三拗湯為基礎方，加減而成。三子養親湯出自《韓氏醫通》，由蘇子、萊菔子、白芥子組成，《本朝綱目》謂之有“利氣豁痰，除寒暖中，消腫止痛”之功效。有研究認為，痰濁內停與支氣管哮喘的氣道炎癥以及相關炎性細胞和細胞因子有關。三子養親湯化痰實際上就是減輕氣道炎癥，改善氣道高反應性。三拗湯源自《太平惠民和劑局方》，具宣肺解表，止咳平喘之效。平喘湯方中麻黃入肺經，可外開皮毛之郁閉，暢通肺氣，善于平喘；杏仁味苦降瀉，能肅降兼宣發肺氣而能止咳平喘；兩藥相配，能降瀉上逆之肺氣，而起到平喘的作用。葶藶子專泄肺中水飲及痰火而平喘；五味子上斂肺氣，下滋腎陰，為治療久咳虛喘的要藥。枳殼聯合桔梗主治痰滯胸痞，地龍、僵蠶有通絡解痙平喘的作用。現代藥理研究認為，麻黃含麻黃堿和偽麻黃堿，均有緩解平滑肌痙攣的作用；杏仁含苦杏仁苷，可在下消化道分解后產生少量氫氰酸，能抑制咳嗽中樞，而起到鎮咳平喘的作用；僵蠶有抗組胺作用，可抑制氣道炎癥，降低氣道高反應性。全方寒溫并用，降氣祛痰，止咳平喘。因此以高、中、低劑量平喘湯作用于哮喘大鼠模型后，病理可見各治療組淋巴細胞等炎性細胞浸潤有不同程度減少，肺組織充血、水腫現象減輕，支氣管管壁和肺泡壁增厚程度減輕，少量嗜酸粒細胞浸潤，支氣管腔內分泌物潴留減少，且高劑量組病理變化程度最為明顯；各治療組大鼠肺指數均低于哮喘組，有顯著差異，且平喘湯高劑量組低于中、低劑量組。說明應用高劑量的平喘湯對支氣管哮喘大鼠在降低氣道高反應性、減輕氣道炎癥以及緩解氣道重構等方面有積極的作用。

綜上所述，平喘湯尤其是高劑量的平喘湯，在降低氣道高反應性、減輕氣道炎癥等方面有積極的作用，而平喘湯對支氣管哮喘發病過程中抑制杯狀細胞增殖、減輕氣道重構等基于分子水平的作用機制，尚需更進一步研究。

[1]呂國平，崔德健，郭英江，等.介紹一種建立大鼠哮喘模型的實驗方法[J].中華結核和呼吸雜志，1995，18（6）：377-378.

[2]王曉紅，楊牧祥，于文濤，等.溫陽益氣平喘方對支氣管哮喘大鼠病理形態學的影響及一氧化氮和內皮素的調節作用 [J].中國中西醫結合雜志，2009，29（5）：435-438.

[3]鐘南山.支氣管哮喘—基礎與臨床[M].北京：人民衛生出版社，2006：249-250，342，438.