氫溴酸西酞普蘭咀嚼片人體生物利用度和生物等效性研究

張麗娟，李海燕，郝光濤，劉澤源

西酞普蘭為選擇性很強的5-羥色胺攝取抑制劑(SSRI)，其抗抑郁作用是抑制中樞神經系統中的5-羥色胺能神經元對 5-羥色胺的再攝取［1］，同時對膽堿能毒蕈堿受體、組織胺受體和α-腎上腺素能受體無抑制作用［2］，因此，會減少很多抗抑郁藥物引起的毒副作用，如口干、鎮靜、體位性低血壓等［3］。西酞普蘭對肝臟細胞色素P450代謝酶影響很小［4］，因此，臨床上有較強的抗抑郁作用，不良反應和藥物間相互作用較少，安全范圍大。常用在抑郁癥的急性期和長期維持治療，可使患者的《兒童抑郁評分量表—改良版(CDRS-R)》評分獲得改善［5］，尤其適用于老年及共病軀體疾病抑郁癥患者的治療［6］。本試驗考察國產氫溴酸西酞普蘭咀嚼片與進口氫溴酸西酞普蘭片的生物等效性［7］，為臨床安全、合理用藥提供理論依據。

1 材料、對象和方法

1.1 藥品試劑與儀器

1.1.1 藥品與試劑 氫溴酸西酞普蘭咀嚼片(昆明積大制藥有限公司提供，10 mg/片，批號:100301);氫溴酸西酞普蘭片(商品名:喜普妙，丹麥靈北藥廠生產，20 mg/片，批號:2202204);氫溴酸西酞普蘭對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，含量:99%，批號:100790-200501);內標:鹽酸苯海拉明(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:100066-200807);甲醇和乙腈均為色譜純(DIMA公司);其他試劑為分析純。

1.1.2 儀器 API 3000型三重四極桿串聯質譜儀，配有電噴霧離子化源以及Analyst 1.4.2數據處理軟件(美國Applied Biosystem公司);Agilent 1200高效液相色譜系統，包括四元輸液泵、自動進樣器、切換閥(美國Agilent公司);GL-88B旋渦混合儀(海門市其林貝爾儀器制造有限公司);AB104電子分析天平(瑞士METTLER TOLEDO公司);2K-15高速低溫離心機(美國Sigma公司);Milli-Q Plus純水器(美國密理博中國有限公司)。

1.2 受試者選擇 24例中國健康男性受試者的平均年齡為(24.5±3.2)歲，身高(1.69±0.06)m，體重(60.7±4.6)kg，體重指數為(21.37±1.33)kg/m2。試驗前生命體征、血常規、尿常規、肝功能、腎功能、心電圖及胸透等檢查未發現異常。受試前2周未服用任何其他藥物，受試者均自愿參加并簽署知情同意書。

1.3 給藥方案與血樣采集 本試驗采用雙周期、隨機、自身交叉試驗設計，試驗在解放軍307醫院I期臨床試驗病房進行。

24名健康受試者隨機進入2個試驗組，每組12名。每組受試者每次試驗時分別服用受試制劑或參比制劑。受試制劑空腹咀嚼30～60 s后直接吞咽，參比制劑空腹用200mL溫開水送服。服藥后2 h方可再飲水，4 h后統一進食低脂標準餐。兩次用藥間隔2周。本試驗兩種制劑的服用劑量均為20 mg，一次服用。

分別于給藥前及給藥后 1、2、3、4、6、8、12、24、36、48、72、96、120、144 h 各取靜脈血5mL 左右置于肝素處理的試管中，靜置約0.5 h，3000 r/min離心10min，分離血漿;血漿樣品置－20℃冰箱保存。

1.4 樣品測定方法

1.4.1 標準溶液的配制 西酞普蘭標準溶液的配制:精密稱取氫溴酸西酞普蘭對照品12.5 mg，置于50mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得200μg/mL西酞普蘭的標準儲備液，取該儲備液以甲醇依次稀釋，配成濃度分別為100μg/L、50μg/L、25μg/L、10μg/L 、2.5μg/L、1μg/L、0.5μg/L 的西酞普蘭標準溶液。內標(苯海拉明)標準溶液的配制:精密稱取鹽酸苯海拉明對照品5.7 mg，置于25mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得200μg/mL的內標儲備液，倍比稀釋該儲備液至10μg/L，對照品溶液于4℃冰箱保存作為內標待用。

1.4.2 色譜條件 色譜柱:Agilent-ZORBAX-C8柱(4.6mm ×150mm，5μm)，流動相:乙腈∶0.1%甲酸水溶液 =60∶40;流速:0.5mL/min;柱溫:20 ℃;進樣量:10μL。

1.4.3 質譜條件 離子源:電噴霧離子化源(ESI源);離子極性:正離子(Positive);離子檢測方式:多反應監測(MRM)方式;噴射電壓:5400 V;離子源溫度:450℃;源內氣體1(GS1，N2)壓力:8 psi;源內氣體2(GS2，N2)壓力:7 psi;氣簾氣體(N2)壓力:6 psi;碰撞能量(CE):27 V(西酞普蘭)、13V(苯海拉明);碰撞能量(DP):50 V(西酞普蘭)、30V(苯海拉明);碰撞氣(CAD，N2)壓力:6 psi;用于定量分析的離子反應對分別為質荷比 m/z 325.1→m/z 262.1(西酞普蘭)和m/z 256.2→m/z 167.1(苯海拉明，內標)。

1.4.4 血漿樣品分析方法 準確量取50μL血漿樣品于一潔凈EP管中，加入50μL內標溶液(10μg/L 苯海拉明甲醇溶液)，補加 1050μL 甲醇溶液，混合均勻，4℃、15000 r/min離心10min，取上清液800μL，40 ℃ 水浴氮氣揮干，150μL純水復溶，進樣10μL進行HPLC-MS/MS分析。

1.5 方法學考察與評價

1.5.1 質譜分析 取西酞普蘭和苯海拉明標準儲備液適量，用甲醇稀釋成濃度為1μg/mL的甲醇液，按“1.4.3”項操作，相應的二級全掃描質譜圖見圖1。

圖1 西酞普蘭和內標苯海拉明的產物離子質譜掃描圖

1.5.2 特異性 分別取6例受試者的空白血漿進行方法特異性考察。結果表明，空白血漿中的內源性物質不干擾西酞普蘭和苯海拉明的測定。見圖2。

1.5.3 標準曲線及定量下限 取空白血漿50μL，分別精密加入標準系列溶液的西酞普蘭對照品溶液50μL 和內標溶液50μL，旋渦混勻，配成含西酞普蘭的濃度分別為 0.5、1、2.5、10、25、50、100μg/L的標準含藥血漿，按“1.4.4”項下操作，記錄色譜圖，計算西酞普蘭峰面積As和內標峰面積Ai的比值f(f=As/Ai)。以血漿中待測物濃度(X)為橫坐標，待測物與內標的峰面積比值(Y)為縱坐標，用加權最小二乘法進行回歸運算［8］，求得回歸方程:Y=0.0399X-0.00309，r=0.9979，權重系數w=1/x2。按上述條件測得的西酞普蘭在血漿中的定量下限為0.5μg/L。

圖2 血漿中西酞普蘭和內標苯海拉明的典型MRM色譜圖(I西酞普蘭;II苯海拉明)

1.5.4 精密度和準確度(相對回收率)按“1.4.4”項下操作。每天做1批及1條隨行標準曲線，連續做3 d，共3批，每批每個濃度做6份樣品，記錄色譜圖，計算西酞普蘭峰面積As和內標峰面積Ai的比值f，代入當天的標準曲線求得實測濃度，計算批內、批間精密度和準確度(相對回收率)。見表1。

表1 血漿中西酞普蘭的批內、批間精密度(RSD)和準確度(相對回收率)(%，n=18)

1.5.5 樣品穩定性 西酞普蘭檢測樣品進樣器中放置6 h、血漿樣品在室溫放置4 h及－40℃ 反復凍融3次及－40℃ 凍存2個月條件下，進行樣品穩定性考察，RE均在±15%內，穩定性良好。

1.6 數據處理 用SPSS軟件進行統計學分析。藥代動力學參數的計算:根據血藥濃度-時間曲線計算每個受試者口服受試制劑及參比制劑后的血藥濃度。根據血藥濃度-時間曲線末端直線部分的試驗點，以lnC對t進行回歸，求得消除速率常數ke;T1/2=0.693/ke;Cmax、Tmax為試驗的實測值，以梯形面積法計算 AUC0-tn，AUC0-∞=AUC0-tn+Ctn/ke(tn為最后一次可檢測血藥濃度的采樣時間;Ctn為末次可測定樣品的藥物濃度);CL/F=D/AUC0-∞(D為給藥劑量);Vd/F=CL/F/Ke。相對生物利用度 F，以公式計算:F=(AUCT×DR)/(AUCR×DT)×100%(T為受試制劑，R為參比制劑，D為劑量)。

2 結果

2.1 血藥濃度-時間曲線 24例受試者服用受試制劑和參比制劑后西酞普蘭血藥濃度-時間曲線見圖3。

圖3 受試者服用受試制劑和參比制劑后血漿中西酞普蘭平均血藥濃度-時間曲線

2.2 藥代動力學參數和生物利用度 受試者單次口服受試制劑及參比制劑后的平均藥代動力學參數見表2。

表2 受試者單次口服T和R后西酞普蘭的平均藥代動力學參數

2.3 生物等效性評價 將藥代動力學參數Cmax、AUC0-tn和AUC0-∞經對數轉換后進行方差分析，雙單側t檢驗，計算90%置信區間，對Tmax進行非參數檢驗。AUC0-tn、AUC0-∞、Cmax的 90% 的置信區間分別為 84.5%～96.90%、84.64%～97.03%、84.16%～96.15%。對Tmax的實測值進行檢驗，P＞0.05。結果表明，受試制劑與參比制劑具有生物等效性。

2.4 安全性評價 整個試驗過程中未出現與試驗相關的嚴重不良事件。參加試驗的24例受試者中有7例受試者出組時出現尿常規和/或血生化檢查異常，血生化檢查異常的項目為總膽紅素、直接膽紅素、尿酸和甘油三酯一過性增高。未經任何治療而給予密切觀察處理，一段時間后恢復正常。

3 討論

本試驗建立的人血漿中西酞普蘭濃度的測定方法簡便可靠、準確性強、重現性好，血藥濃度在0.5～100μg/L范圍內線性關系良好，符合氫溴酸西酞普蘭人體藥代動力學及生物利用度研究的要求。

藥代動力學參數表明，受試制劑和參比制劑在人體內吸收、分布、消除規律較為接近。受試制劑的相對生物利用度F0-tn和F0-∞分別為91.92% ±15.10%和92.09%±15.52%。經生物等效性評價，受試制劑和參比制劑具有生物等效性。

藥物的吸收程度和速度隨劑型不同而不同，受試制劑氫溴酸西酞普蘭片經咀嚼30～60 s后直接吞咽，咀嚼后藥物顆粒有效面積增大，從而促進藥物釋放與吸收，理論上受試制劑應吸收較快。本試驗中，受試制劑及參比制劑的實測平均達峰時間Tmax分別為(4.42±2.41)h和(5.00±2.87)h，受試制劑達峰時間比參比制劑平均提前約35min，符合咀嚼片吸收較快的趨勢，但經統計學分析，二者差異無統計學意義(P＞0.05)，這可能是受試者例數較少所致。

西酞普蘭片為臨床常用藥物，經查閱文獻，未發現藥物不良反應中有對肝臟功能損傷的報道，使用說明書中也未列舉該種不良反應。但參加試驗的24例受試者中，有7例受試者出組時出現尿常規和/或血生化檢查異常，血生化檢查異常的項目為總膽紅素、直接膽紅素、尿酸和甘油三酯一過性增高。考慮受試者主訴無任何不適及其他臨床癥狀，其余化驗項目也未見有臨床意義的改變，未經任何治療而給予密切觀察處理，一段時間后恢復正常。分析治療后化驗結果異常原因，不排除受試者在住院期間體力活動減少及試驗期間作息與飲食改變引起的指標一過性異常。綜合以上因素，判斷此不良反應與試驗藥物可能有關。

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