復方甘草酸苷對佐劑性關節炎大鼠血清中 IL-4、IL-10和 IL-17表達水平的影響

孫曉鵬,高聰輝

(佳木斯大學附屬第一醫院,黑龍江佳木斯 154003)

類風濕性關節炎(RA)是以關節滑膜慢性炎癥為主的自身免疫性疾病,以慢性、對稱性、多滑膜關節炎和關節外病變為主要臨床表現。RA具體發病機制仍不清楚,隨著分子生物學和免疫學的發展,發現細胞因子在 RA的發病過程中起著免疫調節作用。本研究通過檢測佐劑性關節炎大鼠血清 IL-4、IL-10和 IL-17水平,來探討復方甘草酸苷注射液對佐劑性關節炎的治療作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物:Wistar大鼠45只,雌性,8～ 10周齡,180～ 220g,清潔級。 [大連醫科大學,許可證號:SCXK(遼)2800— 0002]。

1.1.2 實驗試劑、藥物和儀器:復方甘草酸苷注射液 (衛材藥業有限公司),完全弗氏佐劑 (CFA,50mg/支)、(Sigma公司 ),IL-4、IL-10、IL-17酶聯免疫試劑盒。(天津索羅門生物科技有限公司 ),電熱恒溫水槽、ST-21低溫高速離心機(由佳木斯大學提供)。

1.2 方法

1.2.1 AA大鼠模型的建立及分組:將 BCG與 CFA臨用前充分搖勻,取適量 BCG與 CFA經雙注射器反復推吸乳化,配置成20mgBCG/mL的乳劑。將45只大鼠隨機分成正常組(Ⅰ 組)、模型組(Ⅱ 組)和治療組 (Ⅲ 組),每組15只。Ⅱ 組和Ⅲ組每只老鼠75%酒精消毒后,于足跖部注射上述乳劑0.2mL(含 BCG4mg),Ⅰ組予相應部位注射 0.2mL生理鹽水。造模后第 6天 ,第12天分別再次注射 10mg BCG/mL的乳劑0.1mL,加強免疫炎癥反應。

1.2.2 AA大鼠的干預:從免疫后14天開始,Ⅰ組和Ⅱ組以生理鹽水(1mL/100g體重)腹腔注射14d,Ⅲ組腹腔注射復方甘草酸苷注射液14d,用藥量相當于人 150mg/d。

1.2.3 標本的采集及檢測:斷頭取血5mL,低溫離心,取上清液,-80℃保存。用酶聯免疫吸附法檢測血清中 IL-4、IL-10和 IL-17的濃度。

1.3 統計學處理

2 結果

見表1。

表1 大鼠血清 IL-4、IL-10和 IL-17水平的比較 ±s,n=15)

表1 大鼠血清 IL-4、IL-10和 IL-17水平的比較 ±s,n=15)

注:*與正常組相比較 P＜0.05;& 與模型組比較P＜0.05;#與治療組比較 P＞ 0.05。

3 討論

RA的具體病因和發病機理目前尚不清楚,研究表明細胞因子和炎癥介質的增多是引起關節滑膜炎、骨質結構和功能破壞,最終導致畸變的基本原因。近年來 ,關于 IL-4、IL-10和 IL-17在 RA發病中的作用的研究越來越多。復方甘草酸苷注射液為復方制劑,由0.2%甘草酸苷、2%甘氨酸和0.1%鹽酸半胱氨酸等組成,主要有效成分為甘草酸苷,其化學結構類似于皮質激素,具有抗炎、抗過敏、免疫調節等多種藥理活性作用;半胱氨酸、甘氨酸則加強免疫調節作用,三種成分共同發揮協調作用,加強了抗變態反應的療效[2]。黃能慧等[3]報道,給小鼠甘草酸單銨鹽腹腔注射給藥 ,可明顯抑制其化學性耳廓紅腫及腹腔毛細血管通透性的增高,明顯減輕急性炎性反應時的紅、腫、熱癥狀。IL-4是由活化的Th2細胞產生的一種細胞因子[4],具有多種生物效應,主要包括誘導人 B細胞分化 Ig E分泌細胞;促進 IgE產生及細胞表面 IgE Fc受體 (CD23抗原)的表達;同時還促進肥大細胞脫顆粒產生炎性介質和嗜酸性粒細胞的局部浸潤,在變應性炎癥的發生和發展中發揮著重要的作用[5]。IL-10是一種由 CD4+Th2輔助性 T細胞亞群產生的、具有生物活性的小分子多肽[6],在免疫過程中具有廣泛的生物學活性,表現為既有激活作用又有抑制作用,后者是其主要的生物學活性,IL- 10的雙重生物學活性最終導致免疫抑制[7]。

本實驗中大鼠在造模后血清中 IL-4、IL-10水平較正常組明顯下降,與以往的研究結果相符合。用復方甘草酸苷注射液治療后大鼠血清中 IL-4、IL-10的表達水平較模型組明顯升高,說明復方甘草酸苷注射液能促進抑炎因子 IL-4、IL-10的分泌與釋放。其可能的機制是通過調解細胞因子功能 ,糾正 TH1/TH 2比例的失衡,穩定肥大細胞膜,產生抗體封閉作用,調節過強的細胞免疫和體液免疫,達到抗過敏作用。IL-17是近年來研究發現的又一新的細胞因子,主要由活化 CIM+CD45RO+記憶 T淋巴細胞產生,能夠與多種細胞因子產生協同作用,以放大炎癥反應,可誘導基質細胞分泌 IL-6、IL-8和 G-CSF,促進人巨噬細胞釋放 IL-1β、 TN F- α、 IL-10、 IL-12。本實驗中大鼠在造模后 血清中IL-17水平較正常明顯升高,與以往的研究結果一致。用復方甘草酸苷注射液治療后大鼠血清中 IL-17的表達水平較模型組明顯降低,提示說明復方甘草酸苷注射液能抑制致炎因子 IL-17的分泌與釋放。可能的機制是復方甘草酸苷顯著抑制抗原提呈細胞對 T細胞的過度激活,抑制由 TN F介導的細胞免疫作用,從而調節免疫反應,改善免疫功能,降低不良反應。復方甘草酸苷注射液通過促進抑炎因子 IL-4、IL-10在大鼠血清中的表達,抑制致炎因子 IL-17的分泌與釋放,從而調節大鼠體內細胞因子的失衡,有效減輕佐劑性關節炎大鼠的病情,從而推斷其對 RA具有一定的治療作用。

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