三棵針質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究＊

孫志國(guó)，高國(guó)峰

三棵針為小檗科植物擬豪豬刺 Berberissoulieana Schneid.、小黃連刺 Berberis wilsonae Hemsl.、細(xì)葉小檗 Berberis poiretii Schneid.或匙葉小檗 Berberisvernae Schneid.等同屬數(shù)種植物的干燥根[1]，味苦、性寒，歸肺、脾、胃、大腸經(jīng)，具清熱燥濕、瀉火解毒功效，主要用于痢疾、腸炎、黃疸、上呼吸道感染、急性中耳炎等癥[1]。為控制藥材質(zhì)量，筆者對(duì)三棵針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀;Waters 2487型紫外檢測(cè)器。樣品均為市售品，經(jīng)鑒定均為正品;鹽酸小檗堿對(duì)照品(批號(hào)為110713－200609，中國(guó)藥品生物制品檢定所);乙腈為色譜純，水為娃哈哈超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀

本品呈類圓柱形，稍扭曲，有少數(shù)分枝，長(zhǎng)10～15 cm，直徑1～3 cm。根頭粗大，向下漸細(xì)。外皮灰棕色，有細(xì)皺紋，易剝落。質(zhì)堅(jiān)硬，不易折斷，切面鮮黃色，稍顯放射狀紋理，髓部棕黃色。氣微，味苦。

2.2 薄層色譜鑒別

取樣品粉末1.0 g，加甲醇 20 mL，超聲處理 20 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照2005年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇－醋酸－水(2∶0.5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。薄層色譜圖見圖1。

圖1 薄層色譜圖

2.3 含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Agilent C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈 －0.02 mol/L 磷酸二氫鉀(24∶76);檢測(cè)波長(zhǎng):265 nm;進(jìn)樣量:10μL。在此條件下，色譜圖見圖2。

2.3.2 溶液制備

取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含20μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取樣品粉末(過四號(hào)篩)約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)60 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:分別精密吸取對(duì)照品溶液(0.010 006 g/L)5，10，15，20，25 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=251 109X－33 442，r=1.000 0(n=5)。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.050 03～0.250 15μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果峰面積值的 RSD=0.5%(n=5)，表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，室溫放置，分別在0，2.5，5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，17.5，20.0，22.5 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的RSD為1.6%(n=10)，表明供試品溶液在22.5 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一編號(hào)(編號(hào)1)的樣品6份，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果的 RSD為0.5%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

圖2 高效液相色譜圖

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

加樣回收試驗(yàn):精密稱取同一編號(hào)(編號(hào)1)的樣品6份，精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.3.4 樣品含量測(cè)定

結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液和供試品溶液在200～400 nm紫外波長(zhǎng)下掃描，結(jié)果在265 nm和347 nm波長(zhǎng)處均有最大吸收，參考2005年《中國(guó)藥典(一部)》，選擇265 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

由于三棵針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無鹽酸小檗堿的含量測(cè)定，而鹽酸小檗堿為其中主要成分，故選擇鹽酸小檗堿為指標(biāo)成分。2005年版《中國(guó)藥典(一部)》黃柏[1]品種項(xiàng)下采用外標(biāo)法控制了鹽酸小檗堿的含量，故將鹽酸小檗堿的含量測(cè)定方法確定為外標(biāo)法。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:168，附錄Ⅵ B.